阴虚型原发性干燥综合征患者调节性B淋巴细胞、IL-17水平与血液系统受累情况的相关性分析*

梅寒颖 刘炬 汤曾耀 胡玲 江敏 石春红

阴虚型原发性干燥综合征（PSS）是一种慢性自身免疫性疾病，在中医学上导致的主要原因是燥邪损伤津液，同时五脏六腑失去濡润，所以阴虚是其主要的发病机制[1]。唾液腺、泪腺等外分泌腺存在淋巴细胞浸润，同时血清中存在着自身抗体是本病的主要特点。其临床表现是口眼干燥、肢体疼痛及疲劳等，同时患者还会出现系统受累情况，尤其是血液系统出现受累[2]。根据李娅等[3]的统计，对PSS 患者进行调查，血液系统受累率达到35.1%，其中青年患者血液系统受累率更高。有研究显示，调节性B 淋巴细胞（Breg）及白细胞介素-17（IL-17）与PSS 的发展有着密切的关系。IgG 是一种抗体蛋白，其水平可以表明血液系统受累情况。本研究通过检测Breg、IL-17 水平，分析两者水平与血液系统受累情况的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取九江市第一人民医院风湿免疫科2020 年1 月-2021 年4 月收治的PSS 患者62 例为研究对象。纳入标准：（1）符合文献[4]阴虚型原发性干燥综合征诊断标准；（2）均为初治；（3）年龄>18 岁；（4）入院前未接受任何治疗。排除标准：（1）合并内分泌系统疾病；（2）合并其他风湿性疾病；（3）多脏器功能衰竭；（4）既往有卵巢手术史；（5）存在精神障碍；（6）合并其他需要服用长期药物治疗的疾病。根据患者是否发生血液系统受累，将患者分为血液系统受累组（22 例）和无血液系统受累组（40 例）。本研究以通过本院医学伦理委员会审核批准，患者及家属积极配合，签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 Breg 细胞水平 于清晨抽取两组患者2 mL的肘静脉血，经过抗凝处理后在流式细管中加入肘静脉血100 μL，编码后去送检；在流式细管分别加入APC-CD19 单抗、FITC-CD24 单抗、PE-CD38 单抗各20 μL，混合均匀后在室温下避光放置30 min，然后加入150 μL 的红细胞裂解液，震荡混匀后在冰箱中冷藏30 min，在2 000 r/min 的离心机上离心10 min，弃上清液，用PBS 液将白细胞沉淀清洗3 次，然后在2 000 r/min 的离心机上离心10 min，循环2 次，在沉淀中加入PBS 液500 mL 制成单细胞悬液，再用滤网过滤，最后使用流式细胞仪进行检测。

1.2.2 IL-17 水平 ELISA 法检测，于入院第2 天清晨抽取两组患者空腹的外周静脉血取5 mL，在室温中放置2 h，在1 000 r/min 的离心机中离心20 min，将上清液血清放在-80 ℃中储存。在检测前将标准品震荡混匀，洗涤缓冲液是由洗涤液按照1︰20 稀释的，然后分别往预先包被IL-1A 抗体的包被孔中依次加入标准品和样本，加入50 μL 不同浓度的标准品在孔板中，在样本孔中加50 μL 待测样本，在空白孔中加50 μL 样本稀释液。加完后在每孔中加入100 μL 辣根过氧化物酶标记的检测抗体，将反应孔用封板膜封住，用37 ℃水浴锅温育60 min 后弃液体，将吸水纸上排干，每孔再加350 μL 洗涤液，静置1 min。将洗涤液甩去，拍干吸水纸，反复此动作4 次，在每孔中加入100 μL 的底物，在37 ℃避光孵育15 min，每孔加入50 μL 终止液，最后用酶标仪在150 nm 波长处检测IL-17水平。

1.2.3 IgG 水平 操作步骤严格按照试剂盒说明书要求进行，采集所有患者空腹外周静脉血，分离血清待测。采用酶联免疫吸附实验（ELISA），根据每孔吸光度及标准曲线计算IgG 水平。

1.2.4 血液系统受累诊断标准 结合山东省各地市级医院标准制定，（1）贫血诊断标准：男性血红蛋白<120 g/L，女性血红蛋白<110 g/L；（2）白细胞受累诊断标准：白细胞计数<3.5×109/L；（3）血小板受累诊断标准：血小板及时<100×109/L；（4）红细胞受累诊断标准：男性红细胞<4.0×1012/L；女性红细胞<3.5×1012/L[5]。依据IgG 水平分为轻中重，轻度组：13.0 g/L≤IgG≤15.0 g/L；中度组：15.0 g/L20 g/L。

1.2.5 相关性分析 采用Pearson 相关性分析阴虚型原发性干燥综合征患者Breg、IL-17 水平与IgG的相关性。

1.3 观察指标（1）比较两组一般资料，包括年龄、性别、病程、体重指数、吸烟史、饮酒史、高血压史、糖尿病史。（2）比较各组患者Breg 细胞水平、IL-17 水平及IgG 水平。（3）分析Breg、IL-17 水平与IgG 水平的相关性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 22.0 统计学软件处理数据。计量资料用（）表示，组间比较采用t 检验，多组间比较采用方差分析，计数资料用率（%）表示，比较采用χ2检验，相关性用Pearson 相关性分析，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 两组一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组Breg、IL-17、IgG 水平比较 血液系统受累组患者Breg、IL-17、IgG 水平均高于无血液系统受累组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 两组Breg、IL-17、IgG水平比较（）

表2 两组Breg、IL-17、IgG水平比较（）

2.3 不同程度血液系统受累患者Breg、IL-17、IgG水平比较 与轻度组相比，中度组和重度组患者Breg、IL-17 水平均升高；与中度组相比，重度组患者Breg、IL-17 水平均升高（P<0.05），见表3。

表3 不同程度血液系统受累患者Breg、IL-17、IgG水平比较（）

表3 不同程度血液系统受累患者Breg、IL-17、IgG水平比较（）

2.4 阴虚型原发性干燥综合征患者Breg、IL-17 水平与血液系统受累情况的相关性 阴虚型原发性干燥综合征患者Breg、IL-17 水平均与患者血液系统受累（IgG 水平）情况呈正相关（r=0.798，0.811，P<0.05），见表4、图1。

表4 阴虚型原发性干燥综合征患者Breg、IL-17水平与IgG的相关性

图1 阴虚型原发性干燥综合征患者Breg、IL-17水平与IgG的相关性

3 讨论

阴虚型原发性干燥综合征是一种慢性自身免疫性疾病，有着较高的发病率，其发病因素与遗传、环境、多种细胞及相关因子等因素有关[6]。同时，这个疾病科可及腺体以外的多种脏器，其中以血液系统受累最为常见[7]。而血液系统受累已经不容忽视，严重时会掩盖患者干燥综合征的症状从而延误阴虚型原发性干燥综合征患者的诊断和治疗[8]。血液系统损害和免疫有关，其发病机制和调节性B 淋巴细胞和白细胞介素-17 有关[9]。因此，探究阴虚型原发性干燥综合征患者Breg、IL-17 水平与血液系统受累情况的相关性具有重要意义，为临床诊断和治疗提供合理的依据。

目前对于Breg 细胞与PSS 关系的研究仅有少量文献报道。研究显示，在多种自身免疫性疾病中Breg 表达水平表现出异常[10]。虽然Breg 在B 细胞中比例仅占0.2%～0.6%，但有着非常明显的免疫调节作用[11]。多种免疫复合物、多克隆免疫球蛋白及自身抗体是由机体中的B 淋巴细胞介导的体液免疫产生的，损害患者的血液系统[12]。有研究发现，Breg 在干燥综合征患者中具有减轻CD4+T 细胞所介导的炎症反应的作用，同时Breg 可以通过分泌多种细胞因子，直接或者间接地作用于其他免疫细胞，进而发挥抑制炎症反应的作用[13]。在本研究中，血液系统受累组患者Breg 水平显著高于无血液系统受累组（P<0.05），这与文献[14]研究结果一致，说明Breg 不仅与阴虚型原发性干燥综合征的发病过程相关，还与患者血液系统受累的程度有关，所以进一步分析了阴虚型原发性干燥综合征患者Breg 水平与血液系统受累情况的相关性，结果发现，阴虚型原发性干燥综合征患者Breg 水平与血液系统受累情况呈正相关（r=0.798，P=0.005），说明患者Breg 水平越高，血液系统受累情况就越严重。

IL-17主要是由近期新发现的Th17细胞分泌的，目前作为新发现的细胞因子，可以促进白细胞的迁移和活化，导致炎症反应加重[15-16]。一些研究表明，IL-17 因子与阴虚型原发性干燥综合征疾病有着很大的关系[17-18]。结果显示，血液系统受累组患者IL-17 水平显著高于无血液系统受累组（P<0.05），这与国外研究结果一致[19-20]。这说明IL-17 不仅参与了阴虚型原发性干燥综合征的发病过程，还与患者血液系统受累的程度有关，所以进一步分析了阴虚型原发性干燥综合征患者IL-17 水平与血液系统受累情况的相关性，结果发现，阴虚型原发性干燥综合征患者IL-17 水平与血液系统受累情况呈正相关（r=0.811，P=0.016），说明患者IL-17 水平越高，患者血液系统受累情况就越严重。

综上所述，因阴虚型原发性干燥综合征发生血液系统受累的患者病情比较严重，可以用Breg、IL-17 水平来判断阴虚型原发性干燥综合征患者血液系统受累的严重情况，为后续临床治疗提供合理的依据。