阿尔茨海默病患者口腔微生物及局部炎症因子表达变化的研究

陈玉英 郭玲

阿尔茨海默病起病隐匿，可导致患者出现记忆障碍、认知下降、精神症状、行为障碍等多方面的异常，对患者的生存质量造成极大危害[1-2]。与本病相关的研究众多，而关于病因的研究是重点。近年来关于菌群失调与本病关系的研究多见，较多关于肠道菌群失调与阿尔茨海默病发生发展的关系研究，而关于口腔微生物方面的研究不断增多，且现存研究结果的差异较为突出。同时，口腔局部及脑脊液炎症因子在本类患者中的表达结果研究也存在较大差异[3-4]，且其与口腔微生物方面的关系研究不足，因此对于口腔微生物与局部炎症因子表达变化的研究空间较大。本研究分析了阿尔茨海默病患者口腔微生物及局部炎症因子表达的研究意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019 年3 月-2021 年2 月福建省立医院南院收治的90 例阿尔茨海默病患者为观察组，选取同时期的90 例非神经系统疾病患者为对照组。对照组纳入标准：脑脊液及其他检查为非神经系统疾病。排除标准：（1）合并高血压、糖尿病、慢阻肺或其他慢性基础疾病；（2）1 个月内发生创伤或进行手术治疗；（3）存在心肝肾肺等器官功能不全。观察组纳入标准：符合阿尔茨海默病诊断标准。排除标准：（1）合并高血压、糖尿病、慢阻肺或其他慢性基础疾病；（2）合并其他神经系统疾病；（3）1 个月内发生创伤或进行手术治疗；（4）存在心肝肾肺等器官功能不全。本研究经本院伦理委员会批准，家属对本研究知情同意。

1.2 方法 采集两组龈沟液及脑脊液标本，其中龈沟液采集部位为非龋齿及修复体部位，漱口后采用滤纸条轻轻插入牙周袋，30 s 后取出，加入去离子水；脑脊液采用诊断性腰椎穿刺获得，标本采集量为2.0 mL，将龈沟液及脑脊液标本采用高温低速离心机进行离心，龈沟液标本（离心半径、时间及速度分别为15 cm、15 min 及13 000 r/min），取离心后的上清液，以酶联免疫法（ELISA 法）检测白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）水平。另将龈沟液滤纸条沉淀物进行微生物检测，统计牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体的检出率，并以PCR 法检测其Ct 值。比较两组及观察组中不同严重程度患者的上述指标，采用Pearson 相关性分析观察组中检出牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体者的Ct 值与脑脊液及龈沟液炎症因子的关系，采用Spearman 秩相关分析观察组中检出牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体者的Ct 值、脑脊液及龈沟液炎症因子与阿尔茨海默病严重程度的关系。

1.3 统计学处理 数据检验选用SPSS 23.0 软件包，计数资料以率（%）表示，比较采用χ2检验；计量资料用（）表示，两组比较采用t 检验，重复测量的计量资料为方差分析，关系分析为Pearson相关性分析及Spearman 秩相关分析。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 对照组男41 例，女49 例；年龄56～82 岁，平均（69.0±7.1）岁。观察组男40 例，女50 例；年龄55～83 岁，平均（69.1±7.0）岁；严重程度[临床痴呆评定量表（CDR 评分）]：轻度（1 分）30 例，中度（2 分）35 例，重度（3 分）25 例。两组一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。观察组轻度男13 例，女17 例；年龄55～83 岁，平均（68.9±6.9）岁。中度男15 例，女20 例，年龄55～82 岁，平均（69.2±7.2）岁。重度男12 例，女13 例；年龄56～83 岁，平均（69.1±7.1）岁。轻度、中度及重度患者一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体的检出率及Ct 值比较 观察组牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体检出率及Ct 值均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。对照组牙龈卟啉单胞菌Ct 值为（0.02±0.01），低于观察组的（0.05±0.02），对照组齿垢密螺旋体Ct 值为（0.02±0.01），低于观察组的（0.06±0.02），差异均有统计学意义（t=3.307、4.817，P<0.05），见表1。

表1 两组牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体的检出率比较[例（%）]

2.3 观察组中不同严重程度患者的牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体的检出率及Ct 值比较 观察组重度患者的牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体的检出率均高于轻度和中度患者，且中度患者均高于轻度患者，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。观察组轻度患者牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体Ct 值分别为（0.03±0.01）、（0.03±0.01），中度患者为（0.05±0.02）、（0.06±0.02），重度患者为（0.06±0.02）、（0.09±0.03）。观察组重度患者的牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体的Ct 值均高于轻度和中度患者，且中度患者均高于轻度患者，差异均有统计学意义（t牙龈卟啉单胞菌=8.998、5.404、3.616，t齿垢密螺旋体=6.972、4.160、5.065，P<0.05）。的检出率比较[例（%）]

表2 观察组中不同严重程度患者的牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体

2.4 两组脑脊液及龈沟液炎症因子比较 观察组脑脊液及龈沟液的IL-1β 和IL-6 均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表3。

表3 两组的脑脊液及龈沟液炎症因子比较[pg/mL，（）]

表3 两组的脑脊液及龈沟液炎症因子比较[pg/mL，（）]

2.5 观察组中不同严重程度患者的脑脊液及龈沟液炎症因子比较 观察组重度患者脑脊液和龈沟液中的IL-1β 和IL-6 均高于轻度和中度患者，且中度患者均高于轻度患者，差异均有统计学意义（P<0.05），见表4。

表4 观察组中不同严重程度患者的脑脊液及龈沟液炎症因子比较

2.6 观察组牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体Ct 值与脑脊液及龈沟液炎症因子的关系分析 Pearson 相关性分析显示，观察组中检出牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体患者的Ct 值与脑脊液及龈沟液炎症因子均呈正相关（P<0.05），见表5。[pg/mL，（）]关系分析

表5 牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体与脑脊液及龈沟液炎症因子的

2.7 观察组牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体Ct 值、脑脊液及龈沟液炎症因子与阿尔茨海默病严重程度的关系分析 Spearman 秩相关分析显示，观察组中检出牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体患者的Ct 值、脑脊液及龈沟液炎症因子均与阿尔茨海默病严重程度均呈正相关（P<0.05），见表6。

表6 牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体、脑脊液及龈沟液炎症因子与阿尔茨海默病严重程度的关系分析

3 讨论

阿尔茨海默病作为神经系统退行性病变，其对患者的认知、行为、人格等多方面均有较大的改变，给患者、家属及社会均造成较大的负担，因此对本类患者进行诊治与防控的研究多见。与阿尔茨海默病相关的病因研究中，感染及炎症假说是研究较多及较热的方面，而较多研究认为，导致阿尔茨海默病相关的β-淀粉样蛋白沉积的发生，可能与炎症的持续存在有关，因此认为炎症网络的存在可能与阿尔茨海默病的发生发展有一定的关系[5-7]。另外，菌群异常作为近年来在阿尔茨海默病患者中研究较多的方面，而牙龈卟啉单胞菌及齿垢密螺旋体是研究较多的菌群类型，研究普遍认为，上述病原菌的感染导致机体处于炎症反应状态，进而通过炎症反应导致阿尔茨海默病的发生发展[8-10]。与阿尔茨海默病相关的炎症因子中，IL-1β 及IL-6 是研究较多的指标，有研究认为其在本类患者的脑脊液中呈现较高表达的状态，是导致局部组织损伤的重要原因[11-13]。同时牙龈卟啉单胞菌及齿垢密螺旋体的感染可能影响到机体的免疫代谢，进而影响阿尔茨海默病的发生发展。但是现存的上述方面的研究仍存在一定差异，导致上述指标与疾病的关系研究仍有待进一步研究，以为疾病的诊断与防控提供确切的参考依据[14-16]。

本研究经细致探究的结果显示，阿尔茨海默病患者的牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体的检出率及Ct 值、脑脊液及龈沟液炎症因子均相对较高，而阿尔茨海默病严重程度的差异也导致上述方面检测结果的差异显著，Pearson 相关性分析显示，观察组检出牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体患者的Ct 值与脑脊液及龈沟液炎症因子均呈正相关（P<0.05），Spearman 秩相关分析显示，观察组检出牙龈卟啉单胞菌、齿垢密螺旋体患者的Ct 值、脑脊液及龈沟液炎症因子均与阿尔茨海默病严重程度均呈正相关（P<0.05），因此对阿尔茨海默病患者进行口腔微生态的改善及炎症反应的控制需求较高，同时也提示微生物失调及炎症反应可能与本病有密切的关系，应重视对阿尔茨海默病高危人群上述方面的监测与调控[17-20]。

综上所述，阿尔茨海默病患者口腔微生物及局部炎症因子表达显著异常，且与阿尔茨海默病严重程度有密切的关系，在阿尔茨海默病的诊治与防控中具有较高的检测意义。