复方白黄散胶囊的抗炎和抗腹泻作用研究

崔潇婷，洪伟鸣，王 榕，许 瑞

（江苏农牧科技职业学院动物药学院，江苏 泰州 225300）

白头翁汤作为传统的治痢疾方剂，具有抗菌、消炎、增强免疫力等多种功能，且有利于患者的病后恢复，故在临床上应用较多[1]。根据中兽医辨证论治的原则，复方白黄散胶囊以白头翁汤为基础，进行科学组方及处方筛选，以清热解毒、凉血止痢作为立方依据，可主治犬湿热泻痢型腹泻[2-4]。鉴于中药复方是一个比较复杂的系统，为进一步提供临床应用依据，本试验从抗炎和抗腹泻这两个方面对其药效学展开初步研究，为复方白黄散胶囊的大规模生产、最终的药效学评价和临床应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

复方白黄散胶囊，自制；甲醛（AR）、乙醚（AR），购自国药集团化学试剂有限公司；氢化可的松片，购自北京双鹤药业股份有限公司；氯化钠注射溶液，购自南京小营药业集团有限公司；蓖麻油，购自邹平卓涛生物科技有限公司；番泻叶提取物，购自陕西宝禾生物科技有限公司。

1.2 主要仪器

XS105电子分析天平 （瑞士梅特勒-托利多有限公司）；DST673电子秤 （苏州市苏杭科技器材有限公司）；YLS-25A电动耳肿打孔器（济南益延科技发展有限公司）；PV-200大鼠足趾容积测定仪 （成都泰盟科技有限公司）。

1.3 实验动物

纯昆明种小鼠[体重（20±2）g 左右]和健康 Wistar大鼠[体重（200±20）g]，由江苏农牧科技职业学院实验动物中心提供，雌雄各一半，统一喂养。大鼠和小鼠分开饲养，同时根据性别分笼饲养。动物房日常温度为（20±2）℃，湿度为（60±5）%，环境保持安静无噪音。

1.4 抗炎试验

1.4.1 耳郭肿胀试验。取健康无伤的昆明种小白鼠50只，雌雄各半。分为5组，分别是复方白黄散胶囊高剂量组（20 g/kg·BW）、中剂量组（15 g/kg·BW）、低剂量组（10 g/kg·BW）、阳性对照组（氢化可的松）和空白对照组（生理盐水）。每组随机选取10只小鼠，雌雄各半。其中，复方白黄散胶囊组采用灌胃给药法，药物等体积但浓度不同。每次给药0.4 mL，每天1次，持续5 d。阳性对照组（氢化可的松）采用腹腔注射给药法，按 0.01 g/kg·BW 的剂量注射，每天1次，持续5 d。空白对照组每天1次灌胃，灌入0.4 mL生理盐水，持续5 d。

每组在最后一次给药30 min后，于小鼠左耳用移液枪滴洒20 μL的二甲苯，并均匀地涂抹在耳朵的两面。对右耳不做任何处理，只作为空白对照。致炎30 min后，利用颈脱臼法处死所有小鼠，用手术剪沿耳根基线把左右两耳都剪下来。在同一部位用直径6 mm的打孔器获得圆耳片，分别称重，两耳的重量差即是其肿胀度（衡量炎症的一项指标）[5]。计算出肿胀抑制率，比较复方白黄散胶囊不同浓度的抑菌效果。计算公式如下：

1.4.2 足趾肿胀试验。取雄性SD大鼠50只，随机分为5组（同1.4.1）。试验开始前对大鼠禁食不禁水。每组每天给药2次，连续给药1周。第7天时在大鼠的踝关节处划线标记，用足趾容积测定仪测定其后腿的左足趾和右足趾的体积，计为足正常体积。最后一次给药30 min后分别在各组大鼠后腿的左右足趾腱膜下注射0.05 mL新鲜的10%蛋清致大鼠肿胀发炎。注射后0.5、1、1.5和2 h，测量大鼠后腿的左右足体积，共测量3次，取平均值，与给药前足趾体积进行比较，其肿胀的体积即被作为试验考核的指标。其后进行统计学分析，比较各组间差异的显著性。

1.4.3 棉球肉芽肿试验。实验动物的选取、分组及给予剂量参照1.4.1。用乙醚麻醉小鼠后，再用碘伏对其背部进行消毒。在无菌条件下于其背部切一个0.5 cm的小口，向两侧腋下各植入1个备用的无菌棉球（5 mg），缝合后对各组依次给药，每天给药1次，连续8 d。最后一次给药1 h后处死小鼠，将棉球取出，剥离附着在棉球上的结缔组织并放入烘箱中存留2 h，减去原棉球的重量，计算肉芽净重[6]。以其作为考核指标，比较各组间差异的显著性。

1.5 抗腹泻试验

1.5.1 蓖麻油致腹泻试验。取健康无伤的昆明种小白鼠30只，雌雄各一半。分为3组，分别为复方白黄散胶囊高剂量组（2 g/kg·BW）、复方白黄散胶囊低剂量组（0.5 g/kg·BW）、空白对照组（生理盐水）。 每组随机选取10只小鼠，雌雄各半。对每组小鼠按每只0.4 mL的固定标准灌胃给药，每天灌胃1次，持续1周。给药期间正常提供食物和水。第7天最后一次灌胃0.5 h后，给每只小鼠灌入0.2 mL蓖麻油。将小鼠分别关在不同的鼠笼里，每只笼子均提前铺好白纸。给予蓖麻油后对小鼠断食断水，观察8 h，每隔1 h换纸1次。粪便外形不正常，或者表现为水样、血样，都被视为腹泻粪便[7]。根据纸上的便滩数量记录腹泻次数。其后进行统计学分析。

1.5.2 番泻叶致腹泻试验。实验动物的选取、分组及饲养管理参照1.5.1。第7天最后一次灌胃1 h后，给每只小鼠由胃灌入0.5 mL的番泻叶煎剂。将小鼠分别关在不同的鼠笼里，每只笼子均提前铺好纸张。观察8 h内小鼠的活动情况，在此过程中断食断水，并每隔1 h换纸1次。根据纸上的便滩数量记录腹泻次数并进行统计学分析。

1.6 数据处理

数据通过SPSS 18.0统计学软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 复方白黄散胶囊的抗炎作用

2.1.1 耳郭肿胀试验。由表1可知，与空白对照组相比，试验组和阳性对照组的肿胀度均减小，且复方白黄散胶囊的高、中两个剂量组和阳性对照组小鼠的肿胀度均极显著地降低（P＜0.01）。复方白黄散胶囊高、中、低3个剂量组对小鼠耳朵肿胀的抑制率分别是50.22%、31.52%和12.34%。其中高剂量组的抑菌效果优于阳性对照组，说明复方白黄散胶囊对二甲苯导致的小鼠耳朵炎症有一定的抑制效果。

表1 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

2.1.2 足趾肿胀试验。由表2可知，注射蛋清0.5 h后大鼠足趾肿胀较为明显，随着炎性物质渗出厚度的增加，试验组和阳性对照组对炎症反应都呈现出较强的抑制作用，给药后肿胀逐渐消退。与空白对照组相比，给药后高剂量组和阳性对照组及中剂量组给药2 h后大鼠足趾肿胀程度极显著地降低（P＜0.01），而中剂量组在给药 0.5～1.5 h后、低剂量组在给药2 h后也显著降低了足趾肿胀（P＜0.05）。故复方白黄散胶囊对蛋清导致的大鼠足趾炎症有一定的抑制效果。

表2 对蛋清所致大鼠足趾肿胀的影响

2.1.3 棉球肉芽肿试验。由表3可知，与空白对照组相比，阳性对照组极显著地降低了小鼠炎症水平（P＜0.01），复方白黄散胶囊的高、中、低剂量组与空白对照组相比显示出一定的抑制作用，但是差异不显著（P＞0.05）。说明复方白黄散胶囊对棉球导致的肉芽肿抗炎效果不强。

表3 棉球肉芽肿试验结果

2.2 复方白黄散胶囊的抗腹泻作用

2.2.1 蓖麻油致腹泻试验。由表4可知，与空白对照组相比，复方白黄散胶囊高、低剂量组极显著地降低了由蓖麻油导致的小鼠腹泻（P＜0.01）。可见复方白黄散胶囊高、低剂量组对蓖麻油导致的小鼠腹泻均有较好的抑制效果。

表4 复方白黄散胶囊对蓖麻油所致小鼠腹泻的影响

2.2.2 番泻叶致腹泻试验。由表5可知，与空白对照组相比，复方白黄散胶囊高、低剂量组极显著地降低了由番泻叶导致的小鼠腹泻（P＜0.01）。可见复方白黄散胶囊高、低剂量组对番泻叶导致的小鼠腹泻均有较好的抑制效果。

表5 复方白黄散胶囊对番泻叶所致小鼠腹泻的影响

3 讨论

3.1 对复方白黄散胶囊抗炎作用的讨论

小鼠耳郭肿胀和大鼠足趾肿胀炎症模型是实验室常用的炎症模型，采用的致炎佐剂分别是二甲苯和蛋清，这两者所致的肿胀都属急性炎症。在小鼠体内植入棉球是常用的肉芽肿形成模型，其与临床上的慢性炎症相似，故为慢性炎症试验。通过试验结果可以看出，复方白黄散胶囊对急性炎症呈现出明显的抑制作用，有较好的抗炎效果，但对于慢性炎症效果并不明显。炎症反应与动物体内释放的致炎介质有关，比如前列腺素、缓激肽等，故本研究认为复方白黄散胶囊有可能抑制了这些物质的释放，从而在小鼠体内发挥出较强的抗炎作用。

3.2 对复方白黄散胶囊抗腹泻作用的讨论

本研究采用蓖麻油和番泻叶这两种刺激性物质为诱导剂，建立不同的小鼠腹泻模型，然后通过观察稀便次数计算腹泻指数，以此对药物抗腹泻的效果进行评价。结果表明，复方白黄散胶囊抗腹泻的作用机制广泛，对蓖麻油引起的小肠性腹泻和番泻叶引起的大肠性腹泻都有显著的抑制效果，说明其对刺激性腹泻有一定的抑制效果，是较好的抗腹泻药物。