利用氯前列烯醇钠诱导乏情期母驴发情的研究

李泽廷 ，苏少锋 ，乔健敏 ，马跃军 ，贾晓清 ，赵俊利 ，白晋宇 ，张 玲 ，孙培陪 ，吴海青 *

（1.内蒙古自治区农牧业科学院，内蒙古 呼和浩特 010031；2.内蒙古草原御驴科技牧业有限公司，内蒙古呼和浩特 010041）

乏情期母驴几乎没有发情表现，其卵泡发育停止，但多数有黄体存在。Quaresma等[1]对非繁殖季节母驴的卵巢进行监测时发现，在冬季母驴的卵巢上仍会有连续的明显的卵泡波活动，但大部分卵泡直径小于18 mm，偶尔可出现大于25 mm的卵泡。未发现优势卵泡和排卵现象，仅有个别母驴出现发情表现。同样，在非繁殖季节，绝大部分马有黄体存在，但不再出现大卵泡，中卵泡的数量也较少，而小卵泡数量较多。张国庭等[2]采用以B超检测法为主、外观鉴定法为辅的方式来判断驴是否发情，全年跟踪观察母驴卵泡发育情况和发情行为表现，发现约有6%的母驴在3月份开始发情，有96%以上的驴在5—6月份开始发情，在7—8月份高温时节约有70%的母驴发情，11月份以后母驴几乎不发情。因此，若想让乏情期母驴发情，需借助外源激素刺激其卵泡发育或黄体溶解。

哺乳动物卵巢黄体的存留对母畜生殖活动具有重要作用。前列腺素F1α(PGF2α)是哺乳动物的主要溶黄体因子，通过与其受体结合，可激活一系列早期反应基因，进而诱导黄体出现功能性（孕酮水平下降）和结构性退化（细胞程序性死亡）[2-3]。氯前列烯醇是一种有机物，为PGF2α类似物，在常用的PGF2α及其类似物中的活性最高。氯前列烯醇对母畜的妊娠黄体、持久黄体有明确的溶解作用，可调节母畜的发情周期。还可特异性兴奋子宫，对子宫平滑肌有明显的舒张作用[4-5]。PGF2α通过血液循环被运送至生殖系统，使卵巢上的功能黄体迅速溶解，黄体的溶解可引发孕酮分泌量骤减。血液内孕酮含量的降低能通过负反馈的形式向下丘脑发出信号，解除其对GnRH分泌的抑制。GnRH分泌可以促进垂体分泌FSH和LH，FSH和LH进入血液并抵达卵巢后可促进卵泡发育进而促使母畜发情。Spergel等[6]发现，在黄体期类固醇类激素主要限制GnRH的脉冲频率，而其对垂体的影响作用较小。这也反向证实了溶解黄体降低孕酮量可以促进卵泡发育。

1 材料与方法

1.1 母驴的选择

2021年11月，在驴的乏情期选择空怀母驴94头用于试验。母驴品种为三粉驴。所有母驴均为经产驴，无繁殖疾病、无发情表现，营养、环境条件一致，体重相近，约为260 kg。

1.2 B超检查

用B超仪检查母驴卵泡发育情况及黄体存在情况，并详细记录黄体存在的位置。

1.3 黄体的处理及监测

于母驴臀部肌肉注射CS注射液 （宁波第二激素厂，0.2 mg/2 mL/支）。注射1支CS后48 h进行B超直肠检查，根据记录了解试验驴的黄体溶解情况。若黄体还存在，则再注射1支CS。96 h后用B超仪检查卵巢黄体情况：若黄体消融，则定期用B超仪检测卵泡发育情况；若黄体未消融，则继续注射1支CS，144 h后再次检测黄体溶解情况；若3次注射CS后黄体仍未溶解，则将该驴淘汰。选择有或无黄体的、未进行任何药物处理的母驴各10头作为对照，B超跟踪检测卵泡及黄体情况。

1.4 优势卵泡发育监测

对黄体溶解的母驴定期用B超仪检查卵泡发育情况，每2天用B超仪直肠监测卵泡发育情况1次，并记录优势卵泡的发育时间。

1.5 排卵监测及配种

于母驴配种前用B超仪观察优势卵泡排出情况，配种方法为子宫内人工输精。输精量为20 mL，精子数约为5×108个。输精位置为宫颈口内约10 cm处。每天输精1次直到排卵为止。

1.6 早期孕检

母驴配种排卵后18 d进行B超早孕检查，统计受胎率。对照组为同年5—6月间驴场B超孕检统计的受胎率。

2 结果与分析

2.1 黄体及卵泡发育情况

在实施CS处理前对母驴进行B超直肠检查，94头母驴中有79头卵巢存在黄体；15头卵巢存在卵泡，其中有2头存在优势卵泡，如表1所示，卵泡直径分别为24 mm和26 mm。

表1 试验驴黄体及卵泡发育情况

2.2 CS促进母驴黄体溶解的效果

给79头卵巢存在黄体的母驴注射CS，注射量为0.2 mg。48 h后出现黄体溶解的有38头，占比为48.1%。注射0.4 mg CS，96 h后出现黄体溶解的有20头，占比为25.3%。注射0.6 mg CS，144 h后出现黄体溶解的有16头，占比为20.3%，如表2所示黄体溶解率为93.7%。另有5头黄体始终未溶解，占比为6.3%。

表2 CS促进母驴黄体溶解情况

在对照组的有黄体存在的10头母驴中，有1头在144 h后出现黄体自然溶解。在10头无黄体的母驴中有7头表现为无优势卵泡发育。有3头表现为优势卵泡发育且卵泡直径分别达27、25和30 mm。

2.3 试验母驴优势卵泡发育监测

注射CS促进黄体溶解后，优势卵泡的发育速度平均为（3.9±1.2）mm/d。无黄体的13头母驴的优势卵泡的发育速度平均为（4.1±1.1）mm/d，结果如图1所示。

图1 注射CS促进黄体溶解后优势卵泡直径的发育速度

排卵前卵泡最大直径平均为 （39.4±5.2）mm，≥40 mm的占55%，≥35 mm且＜40 mm的占28%，≥30 mm＜35 mm的占17%，结果如图2所示。

图2 试验母驴排卵前卵泡最大直径平均值

经 CS处理后，母驴平均排卵日数为（9.6±2.0）d。其中 9～12 d排卵的占 80.2%，5～8 d排卵的占19.8%，结果如图3所示。

图3 用CS处理母驴后排卵时间占比

2.4 早期孕检

配种后18 d对92头试验母驴进行B超孕检，发现妊娠母驴41头，受胎率为44.5%。对照组统计参配母驴数量为510头，受胎229头，受胎率为44.9%，结果如表3所示。

表3 试验母驴早期孕检结果

3 讨论

在乏情期诱导母驴发情对规模化驴场提高繁殖率具有重要意义。PGF2a类似物CS常被用于家畜的繁殖调控，其可有效溶解家畜黄体，促进卵泡发育，调整发情周期。

在北半球，驴与马相近，多在每年的11月后进入乏情期[7]。作为PGF2α类似物的氯前列烯醇对母畜的妊娠黄体、持久黄体具有明确的溶解作用[8-10]。给黄牛一次性注射0.4 mg CS，在72 h内有92%的母牛发情[11]。给水牛两次使用CS，间隔11 d，总量为0.4 mg，可使同期发情率达到70%[12]。给育成牛一次性肌注0.4 mg CS，其发情率为56%[13]。采用间隔11 d两次注射CS的方法对新疆本地牛进行同期发情处理，可使同期发情率达到77%[14]。在5—7月份，给有功能性黄体的母马一次性注射0.6 mg CS，有78%的母马在处理后5～8 d发情[15]。周晶谦[16]研究发现，给母驴分别肌肉注射0.2、0.4和0.6 mg氯前列烯醇对母驴黄体的溶解、排卵间隔没有影响，这表明给母驴一次性注射0.2 mg氯前列烯醇就足以使其黄体消融，且排卵间隔不受剂量影响。但Carluccio等[17]的研究显示，给母驴在排卵后第3天注射PGF2a，其血浆中孕酮水平下降不明显，但在排卵后第6天注射则效果显著。本研究发现，间隔48 h分两次注射0.4 mg CS，黄体溶解率为73%，与上述用CS促进母牛发情的研究结果相近，但与周晶谦的研究结果差异较大[16]。本研究继而观察注射0.6 mg CS的结果，发现黄体溶解率为94%，此与Carluccio等的研究结果相近[17]。这些证据直接或间接证明，母驴排卵黄体形成后起初对CS不敏感，须在6 d后注射氯前列烯醇才能有效溶解黄体。这种过早使用PGF2α未能加速发情和排卵的现象似乎与不完全的黄体溶解有关[18]。

黄体退化意味着哺乳动物开始新的发情周期。与本研究结果一致，利用外源PGF2a类似物溶解黄体后，可大幅缩短马属动物的发情周期[17-18]。母驴发情周期平均为21 d[19]。周晶谦研究发现，在母驴排卵后第3天注射0.4 mg CS可使排卵间隔缩短近一半[16]。Panzani研究发现，在排卵后第6天给予PGF2a可使母驴黄体完全溶解。与对照组[排卵间隔为（24.5±2.9）d]相比，PGF2a处理组的排卵间隔为（15±1.8）d，缩短了排卵时间。本研究通过多次隔天注射CS，显著缩短了排卵时间，与前期统计的驴场母驴的平均排卵间隔24 d相比，平均缩短排卵时间14 d。