凝血功能指标、孕激素和脂联素分子受体3 与食管癌疾病进展和预后的关系

李攀，徐焰#，张广焕，杨紫嫣，吕菁，魏东，郝茜，周慧蓉，严欢庆

西安大兴医院1检验科，2输血科，西安 710000

食管癌是指发生于食管黏膜上皮组织的恶性肿瘤，约占所有恶性肿瘤的2%，随着年轻群体生活习惯的改变，近年来食管癌的发病率呈增长趋势[1-2]。早期食管癌的临床表现较为隐匿，病情呈跳跃性进展，临床检查存在一定难度，大多数患者确诊时已发展至中晚期，导致预后较差，严重威胁患者的生命安全[3]。因此，检测食管癌相关指标对评估食管癌病情进展和预后具有重要意义。研究发现，恶性肿瘤患者往往存在凝血功能异常，而凝血功能与肿瘤的发生、进展密切相关[4]。孕激素和脂联素分子受体3（progestin and adipoQ receptor family member 3，PAQR3）是一种跨膜蛋白，参与肿瘤的发生、发展过程[5]。本研究探讨凝血功能指标、PAQR3 与食管癌疾病进展和预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017 年1 月至2019 年8 月西安大兴医院收治的食管癌患者。纳入标准：①经病理检查确诊为食管癌；②入院前未接受放疗、化疗等治疗；③临床资料及实验室检查资料完整。排除标准：①入院前1 个月内服用过抗凝药或止血药、存在输血史；②合并血液系统疾病；③合并其他恶性肿瘤；④合并器官衰竭；⑤未能接受随访；⑥合并意识障碍或精神疾病；⑦合并全身感染性疾病；⑧妊娠期或哺乳期女性。依据纳入和排除标准，本研究共纳入82 例食管癌患者作为研究组。其中，男48 例，女34 例；年龄43～78 岁，平均（62.45±10.35）岁；病理类型：鳞状细胞癌71 例，腺癌11 例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期49 例，Ⅲ～Ⅳ期33 例。分别取术中切片肿瘤组织82 例和癌旁5 cm 处正常组织82例。另选取同期于西安大兴医院进行体检的74 例健康体检者作为健康组。其中，男47 例，女27 例；年龄45～77 岁，平均（64.38±11.29）岁。两组研究对象的年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有研究对象均知情同意并签署知情同意书。

1.2 凝血功能检测

所有受检者均在医师协助下完善相关检查，研究组于入院后第2 天、健康组于体检当日抽取5 ml空腹静脉血，应用枸橼酸钠进行抗凝处理，采用凝固法检测凝血酶时间（thrombin time，TT）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶原时间（prothrombin time，PT）、D-二聚体（D-Dimer，D-D），采用Clauss 法检测纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）水平，应用沃芬ACLTOP-750 型全自动凝血分析仪及配套试剂盒进行检测，操作均严格按照说明书执行。TT 正常值：13～16 s；APTT正常值：21～37 s；PT正常值：11～13 s；D-D 正常值：﹤0.5 mg/L；FIB 正常值：2～4 g/L。

1.3 PAQR3 检测

收集食管癌患者的食管癌组织及癌旁5 cm 处正常组织，将组织切片后脱蜡、水化，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（streptavidin perosidase，SP）检测PAQR3 表达情况，以磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）代替一抗作为对照。检测过程严格按照说明书进行。根据阳性细胞百分比及染色程度判定PAQR3 表达情况[6]。阳性细胞百分比评分：无阳性细胞为0 分，阳性细胞1%～25%为1 分，阳性细胞26%～50%为2 分，阳性细胞﹥50%为3 分。染色程度评分：无色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。阳性细胞百分比评分与染色程度评分相乘，≤3分为低表达，﹥4 分为高表达。

1.4 观察指标

比较食管癌组织和癌旁正常组织中PAQR3 的表达情况，比较研究组和健康组的凝血功能指标，比较不同临床分期食管癌患者凝血功能指标及食管癌组织中PAQR3 的表达情况。对食管癌患者进行2 年随访，随访方式包括电话随访、回院复查，统计食管癌患者的生存情况，分析食管癌患者预后的影响因素。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件对数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；采用多元Logistic 回归模型分析食管癌患者预后的影响因素；以P﹤0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 食管癌组织和癌旁正常组织中PAQR3 表达情况的比较

食管癌组织中PAQR3 高表达率为69.51%（57/82），低于癌旁正常组织的91.46%（75/82），差异有统计学意义（χ2=12.580，P﹤0.05）。

2.2 研究组和健康组凝血功能指标的比较

研究组和健康组的TT、APTT、PT 比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）；研究组患者的FIB、D-D水平均明显高于健康组，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。（表1）

表1 研究组和健康组凝血功能指标的比较

2.3 不同临床分期食管癌患者凝血功能指标及食管癌组织中PAQR3 表达情况的比较

Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期食管癌患者的TT、APTT、PT 比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）；Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者的FIB、D-D 水平均明显低于Ⅲ～Ⅳ期患者，差异均有统计学意义（P﹤0.01）（表2）。Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者食管癌组织中PAQR3 高表达率为91.84%（45/49），明显高于Ⅲ～Ⅳ期患者的36.36%（12/33），差异有统计学意义（χ2=28.634，P﹤0.01）。

表2 不同临床分期食管癌患者凝血功能指标的比较（±s）

表2 不同临床分期食管癌患者凝血功能指标的比较（±s）

P值0.055 0.064 0.086<0.01<0.01

2.4 食管癌患者生存情况的影响因素分析

随访2 年，82 例食管癌患者生存63 例，死亡19例。Logistic 回归分析结果显示，FIB 异常、D-D 异常、PAQR3 低表达均是食管癌患者生存情况的独立危险因素（P﹤0.01）。（表3）

表3 食管癌患者生存情况的影响因素分析

3 讨论

近年来，中国食管癌的发病率显著增加，据统计，中国食管癌发病例数占全世界食管癌发病例数的50%以上，病死例数约占全世界食管癌病死例数的50%，其病死率居全部恶性肿瘤的第4 位[7-8]。食管癌患者早期可无明显临床症状，少数患者会出现胸骨后疼痛，随着病情进展，患者会出现进行性吞咽困难，直至最后出现恶病质[9]。如何延缓食管癌患者的病情进展，从而改善预后是目前临床研究的热点。

随着分子生物学的不断发展，临床开始关注恶性肿瘤与凝血功能之间的关系[10]。相关研究显示，恶性肿瘤与血栓形成存在一定的联系，恶性肿瘤患者常表现为高凝状态，具有并发血栓相关性疾病的潜在风险[11]。据不完全统计，约95%的恶性肿瘤患者存在一项甚至多项凝血功能指标异常[12]。此外，凝血功能异常亦会对恶性肿瘤患者疾病进展和预后造成一定程度的影响。本研究结果显示，研究组和健康组的TT、APTT、PT 比较，差异均无统计学意义（P﹥0.05）；研究组患者的FIB 及D-D水平均明显高于健康组，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。表明食管癌患者存在凝血功能异常，致使血液处于高凝状态。Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者的FIB、D-D 水平均明显低于Ⅲ～Ⅳ期患者，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。这可能是由于肿瘤细胞进入血液循环后，会对内皮细胞造成一定程度的刺激，使内皮细胞释放大量的组织因子，促进凝血系统激活，致使抗凝活性下降，从而引起凝血因子活性增加，造成继发性纤溶亢进，导致D-D、FIB 表达水平上调，而随着疾病进展，患者体内的FIB及D-D含量增加，机体的高凝状态显著增强[13]。因此，通过检测血液中FIB 及D-D 含量有助于预测食管癌患者病情发展。

PAQR3 是PAQR 家族中的一员，是近些年来新发现的一类抑癌基因，相关研究指出，PAQR3 可通过调控RAS/RAF/丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MEK）/胞外信号调节激酶（extracellular signal- regulated kinase，ERK）信号转导通路，影响多种细胞功能，且PAQR3 与恶性肿瘤的发生、发展有关[14]。本研究结果显示，食管癌组织中PAQR3 高表达率低于癌旁正常组织（P﹤0.05），Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者食管癌组织中PAQR3高表达率明显高于Ⅲ～Ⅳ期患者（P﹤0.01），提示PAQR3 低表达可能在食管癌的发生、发展过程中发挥一定的作用。但目前关于PAQR3 介导食管癌发生、发展的具体分子机制还需进一步深入研究。通过Logistic 回归分析发现，FIB 异常、D-D 异常、PAQR3 低表达均是食管癌患者生存情况的独立危险因素（P﹤0.01），提示FIB、D-D 及PAQR3 是评估食管癌患者预后的重要指标，临床中可将上述指标用于辅助评估食管癌患者的预后。

综上所述，食管癌患者存在凝血功能异常及PAQR3 表达下调，加强对食管癌患者凝血功能及PAQR3 的干预，及时根据上述指标的变化情况调整诊疗计划，有助于延缓病情进展及改善预后。