气相色谱法同时测定速效心痛滴丸中两种成分含量的应用价值

毛耀南 钱桂英

速效心痛滴丸是纯中药制剂,由牡丹皮、川芎、冰片三味天然药材中提取有效成分用现代中药制造技术精制而成,具有清热凉血,活血止痛等功效,用于偏热型轻、中度胸痹心痛,痛兼烦热,舌苔色黄等,本品对稳定性心绞痛属心脉瘀热证的患者具有较快的疗效,可用于养心、护心和速效救心,体现了中药的特色和优势,在临床广泛应用。治疗冠心病心绞痛的中药新药仍然是研究的热点之一［1-4］,为大力发展中医中药,有效地控制中药制剂的产品质量,本实验参照相关文献［5-9］,采用气相色谱法同时测定速效心痛滴丸中丹皮酚和冰片的含量,对测定过程进行了优化改进,方法简便可行,并应用于该产品的质量控制,现报告如下。

1 仪器与试药

GC-14B 气相色谱仪(日本岛津公司)；冰片对照品,丹皮酚对照品,丁香酚对照品,均购自中国药品生物制品检定所；醋酸乙酯为分析纯；速效心痛滴丸［上海海虹实业(集团)巢湖今辰药业有限公司］。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:以聚乙二醇20M 为固定相,涂布浓度10%,担体Chromaxorb W(Av-Dmcs)；柱温170～200℃,程序升温,升温速度10℃/min,进样口温度240 ℃。载气(N2)流量50 ml/min,空气压力0.5 kg/cm2,氢气压力0.8 kg/cm2,进样量2 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 内标溶液的制备 取丁香酚适量,加醋酸乙酯制成每1 ml 含20 mg 的溶液,摇匀,作为内标溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取冰片对照品246.4 mg、丹皮酚对照品26.49 mg,置25 ml 量瓶中,加醋酸乙酯溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液。

2.2.3 样品溶液的制备 取样品约1 g,精密称定,置25 ml 量瓶中,加入醋酸乙酯适量,超声提取20 min,冷却至室温,精密加入内标溶液1 ml,加醋酸乙酯至刻度,摇匀,离心10 min,取上清液即得。

2.2.4 阴性溶液的制备 按生产工艺,分别制备不含牡丹皮及冰片的滴丸作为空白,与“2.2.3”项阴性对照溶液行同法处理,即得。

2.3 系统适用性试验 取对照品贮备液,吸取2.0 ml置10 ml 量瓶中,精密加入内标溶液1 ml,加醋酸乙酯至刻度,摇匀,精密吸取2 μl,注入气相色谱仪；再分别精密吸取样品溶液和阴性对照溶液各2 μl 注入气相色谱仪,按“2.1”项下色谱条件,依法测定,记录色谱图。从色谱图可知,在此色谱条件下,丹皮酚、冰片和内标物质可达到很好分离,在与丹皮酚峰、冰片峰及内标物质峰保留时间相同的时间段内无其他色谱峰,说明阴性对照溶液不干扰丹皮酚及冰片的含量测定,见图1。

图1 气相色谱图

2.4 线性关系考察 取对照品贮备液,分别吸取0.2、1.0、2.0、3.0、4.0 ml 置10 ml 量瓶中,各精密加入内标溶液1 ml,加醋酸乙酯至刻度,摇匀,依次进样2 μl,在上述色谱条件下测定峰面积,以丹皮酚和冰片的峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标(Y),丹皮酚、冰片进样浓度(X)为横坐标,经数据回归处理得其线性回归方程。丹皮酚：Y=0.1038X+0.0672,r=1；冰片：Y=150.14X+1.6323,r=0.9999。结果表明：丹皮酚在21.19～423.84 μg/ml、冰片在0.1971～3.9424 mg/ml 的浓度范围内有良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取“2.4”项下的同一份对照品溶液,重复进样6次,每次测得丹皮酚和冰片与相应内标峰面积的比值,其平均峰面积比值分别为21.9570(RSD=0.22%)和296.4277(RSD=0.13%)。试验表明,该法精密度良好。

2.6 重现性试验 取同一批号的样品6 份,按“2.2.2”、“2.3”项下方法制备样品溶液,分别进样测定。结果：丹皮酚含量RSD 为1.92%；冰片含量RSD 为1.86%,表明方法重现性良好。

2.7 稳定性试验 取“2.6”项下的样品溶液,于室温条件下放置,分别在第0、2、4、6、8、10、12、24 h进样测定,记录峰面积。结果：丹皮酚和冰片与相应内标峰面积比值的RSD 分别为0.39%和0.36%,表明样品溶液在24 h 内稳定。

2.8 加样回收试验 取已知含量的样品(丹皮酚含量0.34%、冰片含量6.99%)6 份,每份1 g,精密称定,分别精密加入丹皮酚3.5 mg、冰片70 mg,置分液漏斗中,加水20 ml,时时振摇使溶解,用醋酸乙酯提取4 次(16、10、10、10 ml),合并提取液,置50 ml 量瓶中,精密加入内标溶液1 ml,加醋酸乙酯至刻度,摇匀,精密吸取2 μl,注入气相色谱仪依法测定,结果见表1。

表1 加样回收率试验(n=6)

2.9 样品测定 抽取两个生产厂家的速效心痛滴丸各3 批样品共6 批,按“2.2.3”项下方法制备样品溶液,按“2.1”项下色谱条件测依法定,记录峰面积,将丹皮酚和冰片与相应内标峰面积的比值代入回归方程计算样品中丹皮酚和冰片含量,测定结果表明这6 个批号的速效心痛滴丸含量均符合规定,结果见表2。

表2 样品含量测定(n=3,mg/丸)

3 讨论

采用气相色谱法对速效心痛滴丸中丹皮酚和冰片进行含量测定的方法,之前已有报道,作者在相关资料原有实验方法的基础上做了一些探索。对于色谱条件的选择方面,通过不同柱温和不同流速下试验,结果该法所得出的保留时间、分离度、对称性都达到分析要求。

速效心痛滴丸采用的是固体分散,药物溶出快速,在供试品的制备方法上,本文参考中国药典中收载的龙脑含量测定方法［10］,分别用乙酸乙酯、无水乙醇等作为样品提取溶剂,超声处理作为提取条件,并且试验对比了不同的提取时间,分别进样测定,结果用乙酸乙酯提取制成的供试品溶液峰形好,重现性好,各成分之间分离良好,超声20 min 提取率为最高。以上实验表明,用气相色谱法对速效心痛滴丸进行含量测定,方法简便、灵敏、可靠,可应用于该制剂的质量控制,针对不同厂家的速效心痛滴丸在生产工艺,或包装、运输、储存等可能存在的问题,在生产和贮存过程中是否造成有效成分的损失,作者应用此方法,随机抽取临床正在使用样品进行检测,以进一步保证用药安全有效,并为临床合理用药提供了理论依据。