海螵蛸对大鼠胃黏膜细胞损伤保护作用的实验研究

赵文玲，朱敏敏，孙虎

(1.淄博市第四人民医院，山东 淄博 255000；2.安丘市市立医院，山东 安丘 262100;3.山东省中医药研究院附属医院，山东 济南 250014)

海螵蛸为乌贼科动物无针乌贼(Sepiellamaindronide Rochebrune)或金乌贼(SepiaseculentaHoyle)的干燥内壳[1]，为传统中药材，味咸、涩，性微温，具有收敛止血、制酸止痛等功效[2]，临床应用广泛。另外，海螵蛸还可用于治疗胃十二指肠溃疡、慢性胃炎等疾病，也可用于收敛止血等治疗[3]。研究发现海螵蛸中的碳酸钙可以中和胃酸，能减轻应激引发的胃黏膜损伤，通过减少胃酸的含量，从而保护胃黏膜细胞，达到防治胃黏膜细胞损伤的效果[4]。本研究旨在探索中药海螵蛸对大鼠胃黏膜的保护作用，观察海螵蛸对小鼠实验性胃溃疡的疗效，为临床用药提供依据。

1 实验材料与方法

1.1 实验药物 海螵蛸(山东建联盛嘉中药有限公司，批号：190813)；无水乙醇(山东龙玉泉药用辅料有限公司，批号：190705)。

1.2 实验仪器 BP211D型电子天平(德国赛多利斯)；XW-80A旋涡振荡仪(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；Cary60型紫外-可见分光光度计(安捷伦科技<中国>有限公司)；HH-7智能恒温水浴锅(力城科技)；LD-2A型离心机(北京医用离心机厂)；不锈钢高精度专业级机械式游标卡尺(浙江得利公司)；大鼠体重机(Rgz-120)；成像系统(Nikon Eclipse TI-SR)。

1.3 实验动物 SPF级雄性Wistar大鼠40只，8周龄，体质量180～220 g，购自济南鹏悦实验动物中心，许可证号：SCXK(鲁)20190003。饲养条件：温度22～24 ℃，相对湿度50%～65%，自由进食、饮水。

1.4 实验分组及造模 适应性喂养1周后，将40只大鼠按照随机分组法分为4组，每组10只，即正常对照组、模型组、海螵蛸500、1 500 mg·kg-1两个剂量组。海螵蛸低、高剂量组分别灌胃给药，正常组及模型组给予等体积蒸馏水灌胃，每日1次，连续7 d。末次给药前一天禁食，末次给药后30 min，除正常对照组外，其余各组大鼠均灌胃无水乙醇(0.2 mL/只)诱导急性胃黏膜损伤模型。

1.5 样本采集 造模2 h后，将大鼠用乙醚麻醉，待大鼠麻醉后将其固定于专用手术台上，样本采集过程中如果大鼠有苏醒迹象则持续麻醉大鼠。剖开大鼠腹部，从心脏取血置于取血管中备用；将胃幽门和贲门结扎后剪下胃部并将其取出，将胃部剪开把胃内容物收集于离心管内备用[5]。剪下部分胃壁用4 ℃的生理盐水洗净，冷藏待用；剩余部分注入适量10%的甲醛溶液固定20 min，待其固定后做病理切片进行观察[6]。

1.6 胃黏膜损伤指标

1.6.1 胃黏膜损伤指数 将胃用适量10%的甲醛溶液固定20 min后，沿大弯剪开，把内容物洗净后展开胃黏膜，使用游标卡尺对胃黏膜上的出血点或出血带的长度和宽度进行测量，评分标准见表1。

表1 急性酒精损伤肉眼观察评分标准

2 结果

2.1 海螵蛸对大鼠体重的影响 由表2可知，大鼠灌胃1周后，模型组及海螵蛸高、低剂量组大鼠体重均维持在300 g 左右，与空白对照组比较无明显差异(P>0.05)。实验期间，各组大鼠均未出现不良反应及死亡现象，表明海螵蛸并未产生毒副作用，且对大鼠体重没有影响。

表2 海螵蛸对大鼠体重的影响

2.2 海螵蛸对大鼠胃黏膜损伤的影响

2.2.1 胃黏膜肉眼观察情况 肉眼观察可见，对照组大鼠胃黏膜色泽正常，触摸光滑，表面无损伤；模型组大鼠胃黏膜损伤部位颜色呈深红色，面积最大，损伤最为严重；海螵蛸高剂量组损伤部位颜色比模型组浅，在各组中损伤面积最小，损伤程度最轻；海螵蛸低剂量组胃黏膜损伤程度比高剂量组严重，颜色较深，损伤面积也要更大，但与模型组相比从颜色和面积上来看损伤程度还是明显较轻的。以上实验结果表明海螵蛸具有保护大鼠胃黏膜损伤的作用。

2.2.2 海螵蛸对大鼠胃黏膜损伤指数、抑制率、面积的影响 由表3可知，模型组胃黏膜损伤指数较高，胃黏膜损伤面积较大；与模型部比较，海螵蛸500、1 500 mg·kg-1剂量组大鼠胃黏膜损伤指数明显降低，损伤面积显著缩小(P<0.01)。与500 mg·kg-1剂量组相比，海螵蛸1 500 mg·kg-1剂量组的损伤指数较低，损伤面积较小，统计学比较仍有显著性差异(P<0.05)，胃黏膜损伤抑制率：海螵蛸高剂量组>海螵蛸低剂量组。

表3 海螵蛸对大鼠胃黏膜损伤指数、抑制率、面积的影响

3 讨论

无水乙醇是实验室常用的急性胃黏膜损伤诱导物，灌胃后可直接损伤大鼠的胃黏膜细胞结构，致使大鼠胃部胃酸分泌增多，胃黏膜上皮细胞肿胀，进而造成急性胃黏膜损伤。本实验中我们采用对胃黏膜上的出血点或出血带的长度和宽度进行测量得到胃黏膜的损伤指标，通过测量经过胃黏膜溃疡中心的最大纵径和横径得到胃黏膜的损伤面积，用这两个指标来评价大鼠胃黏膜损伤模型建立与海螵蛸对胃黏膜的保护作用。

海螵蛸主要成分是碳酸钙，能有效降低胃液的酸度，具有较强的细胞保护能力。本研究从胃黏膜损伤指数、损伤抑制率、损伤面积的结果来看，海螵蛸能有效减轻急性胃黏膜损伤的形成，降低胃黏膜损伤指数和损伤面积，促进其快速恢复，且呈现出一定的剂量依赖性，表明海螵蛸具有保护胃黏膜损伤的作用，且高剂量组的保护效果较好，从实验角度进一步验证了海螵蛸对胃黏膜的保护作用。

当下，现代人的生活节奏逐步加快，伴随着精神压力的增加以及饮食习惯的不规律，出现消化性胃溃疡的患者越来越多，且年龄趋于年轻化[9]。当前，由于现代人快节奏的生活方式，大多数人选择西医治疗，见效更快，且便于携带[10]。然而，以“治未病”为理念的中医药产业，在疾病的预防治疗方面已经默默地守护了我们上千年的时间，在这历经岁月考验的临床历史实践中中医药展现出了其独特的魅力，在“治未病”方面与西医相比，它的优势是非常明显的[11]。通过本实验研究，可考虑根据海螵蛸的自身特点开发成药食同源的新型功能性食品，让其发挥更大的应用价值。