S-环氧氯丙烷异构体的分析方法

＊顾晋文 王耀堂 储佳佳 周婷婷

（1.上虞京新药业有限公司 浙江 312369 2.浙江鸿盛化工有限公司 浙江 312369）

引言

S-环氧氯丙烷作为关键起始物料，作为医药和化工等相关领域的重要中间体，在医药中广泛用于合成手性药物，在生产中得到广泛应用。比如用于对映选择性合成羟基异噁唑烷和抗感染类药物（左奥硝唑、奥硝唑）、前体4-氯-3-羟基丁酸酯（阿伐他汀）、β-肾上腺素拮抗剂（阿替洛尔）、左旋肉碱、利伐沙班等药物。S-环氧氯丙烷作为手性起始物料，必须控制其异构体杂质R-环氧氯丙烷。检测S-环氧氯丙烷常用气相色谱检测，但是异构体R-环氧氯丙烷在很多气相色谱柱上没有完全分离，难以准确控制其异构体R-环氧氯丙烷杂质含量[1]。

本研究采用手性毛细管色谱柱[2]，气相色谱法检测S-环氧氯丙烷异构体杂质，建立的新方法简单，灵敏高，分离度好，准确性高。

1.实验部分

(1)仪器与试药

Agilent7890B气相色谱仪器，梅特勒-托利多电子天平XPE105，S-环氧氯丙烷对照品（TCI批号：P1450590）；R-环氧氯丙烷对照品（TCI批号：P1450589）；S-环氧氯丙烷样品（抚顺大恒化工有限公司，批号：SECH- 190601；SECH- 190602；SECH-190603）。

(2)色谱条件

色谱柱及填料：LIPODEX E色谱柱（50m×0.25mm× 0.25μm）；柱温：50℃保持4min，以5℃/min升温至110℃，以20℃/min升温至180℃；进样口：200℃；检测器类型：FID；检测器温度：250℃；分流比：80:1；柱流量：2.0mL/min；进样量：1μL。

(3)溶液配制

空白溶液：正庚烷。

R-环氧氯丙烷贮备溶液：取R-环氧氯丙烷约375mg，精密称定，置50ml量瓶中，用空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1ml置于10ml量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，作为R-环氧氯丙烷贮备溶液（约含R-环氧氯丙烷0.75mg/ml）。

R-环氧氯丙烷对照品溶液：精密量取R-环氧氯丙烷贮备溶液10ml，置100ml量瓶中，用空白溶液稀释并定容，摇匀，作为R-环氧氯丙烷的100%限度溶液（约含R-环氧氯丙烷0.075mg/ml）。

系统适用性溶液：取S-环氧氯丙烷对照品约500mg，精密称定，置10ml量瓶中，精密量取1ml R-环氧氯丙烷贮备溶液置同一10ml量瓶，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液（约含S-环氧氯丙烷50mg/ml，R-环氧氯丙烷0.075mg/ml）。

供试品溶液：取S-环氧氯丙烷供试品约500mg，精密称定，置10ml量瓶中，用空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（约含S-环氧氯丙烷50mg/ml）。

2.实验结果

(1)气相手性色谱柱的选择

文献[3-4]曾报道Gamaa Dex 225手性色谱柱可以分离 S-环氧氯丙烷和R-环氧氯丙烷，但是在这个手性色谱柱下，S-环氧氯丙烷拖尾严重，R-环氧氯丙烷在主峰尾巴上，没有达到基线分离，难以控制0.15%以下的异构体杂质。不同气相色谱柱分离环氧氯丙烷异构体结果统计如下表1。

表1 不同手性色谱柱分离S-环氧氯丙烷异构体

因此，最终异构体分离的气相手性色谱柱确定为：LIPODEX E色谱柱50m×0.25mm×0.25μm。

(2)配制样品溶剂的选择

环氧氯丙烷，活泼性强，容易参与反应，分别考察甲醇、乙醇、二氯甲烷、正庚烷作稀释剂，比较环氧氯丙烷在这些稀释剂中的稳定性，结果统计如下表2。

表2 配制样品溶剂的选择

甲醇、乙醇作稀释剂，会与环氧氯丙烷缓慢反应，产生未知峰。二氯甲烷，容易挥发，色谱分析过程中，重复进样分析，随二氯甲烷挥发，峰面积增大；正庚烷作样品配制溶剂非常稳定，最终选择正庚烷作S-环氧氯丙烷的稀释剂。

(3)系统适用性试验，检测限和定量限及回收率

①系统适用性溶液

将系统适用性溶液加入气相色谱仪器，S-环氧氯丙烷与异构体分离统计如下表3。

表3 系统适用性溶液结果

系统适用性谱图，如图1，11.54min为S-环氧氯丙烷，12.43min为R-环氧氯丙烷。

图1 S-环氧氯丙烷系统适用性气相色谱图

②方法的检测限和定量限

将R-环氧氯丙烷异构体杂质，采用稀释剂正庚烷，不断稀释下去，到4.45μg/ml、14.85μg/ml，这分别是检测限和定量限浓度，数据统计如下表4。

表4 R-环氧氯丙烷检测限和定量限

③线性

用稀释剂正庚烷，分别配制R-环氧氯丙烷，LOQ，50%，100%，150%和200%浓度的溶液，依次加入气相色谱仪器，她们浓度与峰面积的结果统计如下表5。

表5 R-环氧氯丙烷浓度与峰面积结果

结论：在20%水平浓度（即LOQ）～200%水平浓度范围内，R-环氧氯丙烷峰的峰面积与其浓度成立的回归方程，所得相关系数应r=0.9999＞0.99，成线性关系；Y的截距为0.0423，小于100%限度水平的平均峰面积的20%。

④方法的回收率实验

取供试品约500mg，精密称定，置10mL量瓶中，依次用LOQ限度浓度标准溶液，50%限度溶液，100%限度溶液和150%限度溶液使其溶解并稀释至定容，作为各个浓度加标样品溶液（平行配制3份）；实验结果如表6。

表6 R-环氧氯丙烷加标到样品中回收率结果

结论：各水平浓度回收率均在90%～110%之间，各水平浓度回收率RSD均小于10%。

⑤稳定性

将供试品溶液、R-环氧氯丙烷对照品溶液于常温下放置，待仪器稳定后，进样1针空白溶液（必要时可重复进，直至无干扰峰），进行系统适用性试验，系统适用性符合要求后，以预定的时间间隔进样（例如：间隔2h、4h、8h、12h、16h、20h和24h），记录色谱图。溶液稳定性统计结果，如表7。

表7 溶液的稳定性室验结果

供试品溶液和对照品溶液分别在常温条件下放置24h后，与0h相比，均无新增杂质。供试品溶液中S-环氧氯丙烷峰面积相对平均偏差为0.11%，不大于2.0%，供试品中R-环氧氯丙烷峰面积相对平均偏差为2.3%，不大于10%，R-环氧氯丙烷对照品溶液中R-环氧氯丙烷峰面积相对平均偏差为0.8%，不大于10%，异构体检测方法的溶液稳定性非常好。

3.样品检测及结论

检测三批次S-环氧氯丙烷，它们的异构体体结果，见表8。

表8 S-环氧氯丙烷异构体检测结果

结论：三批样品中R-环氧氯丙烷含量均符合规定。

图2 S-环氧氯丙烷异构体检测谱图

建立的新方法，样品配制非常简单,溶液稳定性非常好，方法的灵敏度非常高，异构体杂质的分离度非常好，检测异构体结果准确度非常高；新方法检测S-环氧氯丙烷中异构体杂质值得推广应用。