不同厂家阿莫西林胶囊聚合物含量的考察及影响因素

＊叶宁 吴愫青

（广东省珠海市食品药品检验所 广东 519000）

阿莫西林，又名羟氨苄青霉素，是临床上一种常用的口服半合成青霉素，属于广谱抗生素，通过抑制细菌细胞壁的合成，引起细菌迅速溶解破裂，从而起到杀菌消炎的作用，对革兰阴性菌和阳性菌均有强而迅速的杀灭作用，对钩端螺旋体亦有杀灭作用。《中国药典》收载的阿莫西林剂型有片剂、胶囊、颗粒、干混悬剂。阿莫西林胶囊口服易吸收，使用方便，是该品种市面上最主要的剂型，并且起效快，临床使用广泛。药品质量安全关系患者安全、医院利益，阿莫西林在临床应用中大约存在5%～6%的不良反应发生率，少数严重者会导致死亡，因此严格控制阿莫西林胶囊中高分子聚合物的含量有着重要的意义[2-3]。本文通过考察不同区域药企阿莫西林胶囊聚合物的含量，为各企业优化工艺流程、严格把关原辅料的供应提供一定的参考，也可临床安全用药提供科学依据。

1.仪器与试药

(1)仪器

METTLER-TOLEDOXS205电子分析天平；Elmasomicp P300H超声波清洗器；Agilent 1260 infinity II高效液相色谱仪；色谱柱：Puxiang G-10 400×10mm凝胶色谱柱。

(2)试药

青霉素对照品（由中国食品药品检定研究院提供；批号：130437-201707，含量：94.1%）磷酸氢二钠，广州化学试剂厂；磷酸二氢钠，广州化学试剂厂；无水碳酸钠，天津市大茂化学试剂厂，均为分析纯；水为超纯水。

2.方法

(1)色谱条件

pH8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液[0.05mol/L磷酸氢二钠溶液-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(95:5)]为流动相A（盐相），水为流动相B（水相），波长254nm，进样量100μl，柱温：25℃，流速：1.5ml/min。

(2)试剂配制

精密称定青霉素对照品适量，置50ml量瓶中，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。另精密称取供试品适量（约相当于阿莫西林0.2g），置10ml量瓶中，加2%碳酸钠溶液5ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

(3)系统适用性要求

精密称取供试品适量（约相当于阿莫西林0.2g），置10ml量瓶中，加2%碳酸钠溶液4ml使溶解，用0.3mg/ml的蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。量取100μl注入液相色谱仪，用流动相A进行测定，记录色谱图，高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比应大于2.0（图1）。

图1 系统色谱图

(4)测定法

取供试品溶液注入色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图（图2）。另精密量取对照溶液注入色谱仪，以流动相B为流动相，同法测定。按外标法以峰面积计算，结果乘以校正因子0.1，含阿莫西林聚合物以阿莫西林计，不得过标示量的0.2%。

图2 样品色谱图

3.结果

我国地域辽阔，各个行政区之间的温湿度差异很大，我们将25家药企按照东北、华北、华东、西南、华南五个区域划分进行考察，通过数据统计分析得出，各个区域之间的聚合物含量结果不存在显著性差异。但是，假设将聚合物含量结果落在0～0.05%之间的作为低风险考察区域，0.05%～ 0.10%之间的作为中风险考察区域，大于0.10%的作为高风险考察区域，大于0.15%的作为极高风险考察区域，现在根据阿莫西林聚合物含量的结果对阿莫西林胶囊质量进行风险评估，我们发现，13家企业的聚合物含量结果落在低风险考察区域，20家企业的结果落在低风险和中风险考察区域，5家的结果落在高风险考察区域，只有1家企业的结果落在极高风险考察区域，说明落实药品质量管理上市许可人主体责任后，企业在药品全生命周期的安全性、有效性的保证义务已经得到强化。考察结果见表1和图3。

图3 不同区域药企阿莫西林胶囊聚合物含量分布

表1 不同区域药企聚合物含量结果

我们在考察区域之间聚合物含量的基础上，进一步考虑到药品流通过程的影响因素，将25家药企按照抽样来源分类对聚合物含量进行考察，抽样来源分为批发企业10家、零售药店10家、医院5家三类，从表1和图4可以看出，9家批发企业的结果落在低风险和中风险考察区域，对于结果落在高风险考察区域的1家企业，表1中显示生产日期和检验日期相差24个月，而零售药店结果落在极高风险考察区域的那家企业，表1中也显示同样情况。这也进一步提示我们可以从样品的储存时间长短来考察对聚合物含量形成的影响。

图4 流通渠道中阿莫西林胶囊聚合物含量的分布

我们将25家的产品按照生产日期和检验日期间隔时间的长短作为横坐标，聚合物含量结果作为纵坐标绘制趋势曲线，见图5，从图中可以看出，生产日期和检验日期间隔时间的长短对聚合物含量结果呈现上升趋势，考虑可能是样品储存过程中聚合物含量的升高，提示企业应该从这方面进一步提高产品质量。

图5 阿莫西林胶囊样品生产和收检时间间隔含量趋势图

4.讨论

阿莫西林胶囊为目前国内使用较多的青霉素类抗生素药物，作为过敏原的高分子聚合物是其质量控制的重点[4]。从以上聚合物含量结果看，均符合规定，但不同区域药企聚合物含量存在较大差异。阿莫西林胶囊聚合物含量的影响因素有很多，其中主要与制剂的生产工艺和储存条件相关，生成工艺可影响聚合反应方式，而不同方式聚合形成的高分子聚合物的过敏反应特性存在差异，储存条件可影响聚合的速度和聚合物的形成，从图4可知，因批发企业的储存条件最好，所以批发企业的聚合物含量较低。从图5趋势图可知，生产与收检周期越长，聚合物含量越大，因为阿莫西林结构中含有结晶水，有引湿性，对高温不稳定，吸潮会使分子中的β-内酰胺环开环降解，导致杂质增多，聚合物含量增大[5]，药品温湿度管理体制要求药品应储存在常温（10～ 30℃），相对湿度应保持在45%～75%环境中，因此，各厂家在生产、储存、运输过程中要严格控制环境，温度低于30℃，湿度小于75%[6]。

我们总结了聚合物含量测定实验中的一些注意事项，希望对大家今后的检验工作有所帮助和借鉴。

（1）开启新的Sephadex G-10葡聚糖凝胶色谱柱时，先用70～80℃的超纯水冲洗一段时间，使内部凝胶充分溶胀，再用超纯水，低流速冲洗一周，使其充分活化，达到更好 柱效[7]。

（2）阿莫西林胶囊样品在5%无水碳酸钠中较易溶解，一般手动振摇即可，超声或加热溶解都容易导致聚合物含量增高。

（3）分子排阻色谱法是以淋出体积作为分子量的相对检测，基线的稳定性直接影响计算结果，每次实验前宜先用对应水相或盐相低流速冲洗色谱柱一晚，让基线更加稳定[8]。

（4）色谱柱使用完后先用超纯水冲洗至基线稳定，再用0.03%叠氮钠溶液冲洗保存色谱柱，用堵头密封两端，放 4～8℃冰箱保存。

（5）国产凝胶色谱柱因其特性，不宜高压高温冲洗使用，使用时和使用后均不宜用带有机相的溶液冲洗，会导致柱效变差，峰形变形，且使用的流动相必须经过脱气处理，气泡进入色谱柱会难以排除，长期使用也会导致柱效降低。