一种新型自体表皮细胞悬液移植术治疗皮肤全层缺损的临床研究

李菁 单维娜 陈学玲 郭海阳 杨姗姗 刘畅▲

1.江苏省徐州市中医院急诊科，江苏徐州 221000；2.江苏省徐州市中医院肛肠一科，江苏徐州 221000；3.江苏省徐州市中医院护理部，江苏徐州 221000

皮肤为人体最复杂器官，皮肤由皮下组织、真皮及表皮组成，具有代谢、保护、分泌等多种功能。目前研究显示，表皮损伤后可刺激基底干细胞转变为祖细胞，而后变为短暂扩充细胞，分化为终末分化细胞，上述过程由多种因素共同调节。江苏省徐州市中医院急诊设有急诊外科、门诊换药室，各种外伤、褥疮创面及部分病变切除术所导致的皮肤缺损患者较多。部分皮肤全层缺损的患者，创缘距离大于2cm 或面积大于10 cm，长期不能愈合，加重患者的经济负担和躯体、精神痛苦。现有的治疗方法治疗周期长、费用高、皮肤愈合效果欠佳。应对较大面积的皮肤全层缺损，微粒皮移植术是目前主要治疗方法，而自体供皮不足成为限制移植的较大难题。部分患者可使用异体甚至异种皮移植，但此过程中仅可作为创面的临时性覆盖物，移植效果较差。寻找永久性皮肤替代物一直以来都是研究者关注的热点，目前普遍认为，永久性皮肤替代物依赖有活性的表皮细胞和成纤维细胞。建立表皮细胞移植的新技术、新方法成为解决此问题的一个可行方向。我科采用自体表皮细胞悬液移植术联合重组人表皮细胞生长因子（recombinanthuman epidermal growth factor，rhEGF）治疗皮肤全层缺损，取得很好的临床疗效，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年1 月～2021 年7 月江苏省徐州市中医院收治的皮肤缺损患者90 例。纳入标准：①参考相关文献，确诊为慢性皮肤缺损病例；②年龄18～85岁，男女不限；③生命体征平稳，心、肺、肝、肾功能在正常范围；④创缘距离＞2 cm，5 cm≤单处表皮全层缺损面积＜100 cm；⑤创面无明显感染征象，或经换药后感染控制无脓性渗液；⑥自愿接受该方法治疗（签署知情同意书），且治疗依从性较好者。排除标准：①认知障碍或依从性差者；②患有癫痫或使用抗精神病、镇静药物者；③孕妇和哺乳期妇女；④糖尿病患者治疗后空腹血糖大于10 mmol/L 者；⑤创面明显感染者；⑥有其他严重并发症的患者，医生认为患者不适合入组者；⑦入组病人有权自愿退出临床研究，或失访者；⑧不能按照方案规定完成治疗者。根据编号单双数将患者分为对照组（n=45，编号为单数）和试验组（n=45，编号为双数）。对照组男27 例，女18 例；年龄23～83 岁，平均（37.21±5.06）岁；皮肤缺损时间2～6 个月，平均（3.47±0.18）个月；缺损面积5～56 cm，平均（30.47±1.21）cm；缺损部位：胸壁7 例、下肢38例。试验组男25 例，女20 例；年龄22～84 岁，平均（36.21±5.42）岁；皮肤缺损时间2～6 个月，平均缺损时间（3.39±0.24）个月；缺损面积5～56 cm，平均（30.47±1.21）cm；缺损部位：胸壁5 例、下肢40 例。两组患者的性别构成、年龄、皮肤缺损时间等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，本研究经江苏省徐州市中医院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

对照组：创面清创后，以单层无菌油纱布覆盖，用表皮细胞生长因子凝胶涂抹。参考相关文献给予患者相应治疗，每日补充50 IU/cm表皮细胞生长因子凝胶，最外层盖无菌纱布，观察创面渗出情况及有无感染征象。

试验组：供皮区消毒后在局麻下取全厚皮片，获取的皮肤用PBS 漂洗2 遍，去除皮下组织，剪成0.2 cm×0.2 cm 小块，加入0.01%EDTA 和0.125%胰蛋白酶1∶1 混合液，37°C 消化20 min 后，加入血清终止消化，转移液体部分至新试管，离心弃上清。用含血清培养基重新悬浮细胞，吹打成单细胞悬液。均匀涂抹于创面，然后用涂有浓度为50 IU/cm表皮细胞生长因子凝胶的膨化聚四氟乙烯薄膜覆盖创面，最外层覆以无菌纱布。术后第2 天起每天更换敷料，碘伏消毒薄膜及周围组织，待干后在膨化聚四氟乙烯薄膜层外补充50 IU/cm表皮细胞生长因子凝胶。膨化聚四氟乙烯薄膜层保留不动，防止移植的表皮细胞移位。观察细胞生长状况，创面渗出及有无感染征象。

1.3 观察指标及评价标准

护士在医生指导下术后每周进行创面观察统计，至创面愈合或8 周。①3 周和8 周时的创面愈合率。测量创面愈合面积，根据以下公式计算创面愈合率：创面愈合率（%）=愈合创面面积/原创面面积×100%。②创缘上皮生长速度（mm/d）=（初始创面长度-当前创面长度）/术后天数。8 周内愈合创面，当前创面长度取0，术后天数以实际愈合天数为准。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组患者的创面愈合率比较

试验组的3 周创面愈合率和8 周创面愈合率明显高于对照组，差异有统计学意义（均P＜0.05）。见表1。

表1 两组患者的创面愈合率比较（%，）

2.2 两组患者的创缘生长速度及愈合时间比较

试验组的创缘生长速度快于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。试验组的创面愈合时间短于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组患者的创缘生长速度及愈合时间比较（）

2.3 两组患者的创面图片比较

图1、2 为对照组的创面愈合前后对比，图3、4 为试验组的创面愈合前后对比。试验组创面愈合后为一线状疤痕，对照组为片状。图5、6 为试验组一例下肢皮肤缺损患者的愈合前后创面对比，新生皮肤色泽红润，毛孔明显。

图1 对照组愈合前

图2 对照组愈合后

图3 试验组愈合前

图4 试验组愈合后

图5 试验组一例下肢皮肤缺损患者愈合前

图6 试验组一例下肢皮肤缺损患者愈合后

3 讨论

3.1 皮肤全层缺损治疗现状

皮肤作为人体最表面的防御器官，容易因为各种原因受到损伤。较大面积皮肤缺损，往往经久不愈，愈合后也会遗留大片疤痕，影响外观与功能。对于大面积的皮肤缺损，目前临床上采取的方法不外乎以下几种：皮片植皮、微粒皮移植、自体表皮细胞膜片移植。皮片植皮术需要有良好的供皮区，且供皮区会产生新的缺损区。应对大面积缺损时，还需要反复手术。微粒皮移植术可通过较小的供皮区覆盖皮肤缺损，扩展比例最大为1∶20。缺点是手术复杂，愈合后外观欠佳。Green等将人表皮角质形成细胞体外培养在经放射处理的鼠成纤维细胞滋养层上，成功后移植于创面，能快速恢复皮肤的屏障功能，较快地缓解疼痛，提供良好的美容效果和功能。其缺点是，需要切取患者小块皮肤标本，耗时长（从取材到培养成完整的表皮膜片需要3～4 周时间）；细胞膜片菲薄易碎，难以操作，移植到创面后，接受率低，易造成移植物脱失。

3.2 自体表皮细胞悬液移植术优点

自体表皮细胞悬液移植术相对以上三种技术有较多的优点：①需要的自体皮肤少。自体表皮细胞悬液移植时细胞播种密度为1×10/cm，1 cm正常全层皮肤可获得3×10个表皮细胞，其供、受皮面积比为1∶30。自体表皮细胞悬液移植术比微粒皮移植术扩展比例更大。②操作简便。本研究全部工作均在门诊完成，无需住院，全部手术时间可控制在2 h 内。术后1 周每日来院换药，1 周后患者自行补充表皮细胞生长因子即可，极大减轻患者的负担及医疗机构的工作量。③治疗效果远优于前述三种方法。动物实验效果来看，自体表皮细胞悬液回植到自体皮肤缺损创面，加速其分裂增殖，修复全层皮肤缺损效果好于表皮细胞膜片，成活率高，皮片完整，抗挛缩性好，成活快。本研究中，自体表皮细胞悬液移植的这些优势都得到充分表现。所有试验组患者创面均愈合良好，皮肤外观功能均令人满意，且愈合时间较单纯换药治疗明显缩短。本试验采取在创面边缘取皮的方法无需单独供皮区，患者更容易接受。

3.3 表皮细胞生长因子在本研究中的作用

表皮细胞生长因子（epidermal growth factor，EGF）是一种体内活性物质，由53 个氨基酸残基构成的单链多肽，与细胞表面的表皮生长因子受体结合形成复合物，通过细胞内移行、酪氨酸磷酸化、cAMP 与cGMP 的介导而发挥作用。在体外培养皮肤实验中，观察到一些已分化的细胞可逆转为具有显著增殖与分化潜能细胞的现象。表皮生长因子的促修复效应部分也来自于可能由已分化细胞逆分化而来的干细胞和一些表皮基底干细胞。

利用基因重组技术人工合成的重组人表皮细胞生长因子（rhEGF）能促进细胞增殖分化和组织再生，具有与天然产物一样的活性。目前应用在临床上比较普遍常用的剂型有凝胶、喷雾剂和滴眼液。动物实验和大量临床应用均证实重组人表皮细胞生长因子（rhEGF）能有效促进溃疡、烧伤、吸入性损伤的愈合。内源性表皮细胞生长因子在创面局部含量较低，但在受创伤组织修复中起到重要作用。创面补充一定量的外源性重组人表皮细胞生长因子，能诱导分化成熟的皮肤细胞逆转成表皮干细胞，加速伤口上皮细胞增殖与肉芽组织生成，从而缩短伤口愈合时间，改善伤口修复的质量。

3.4 膨化聚四氟乙烯薄膜在本研究中的作用

自体表皮细胞悬液涂抹于创面后，覆盖一层膨化聚四氟乙烯薄膜以固定移植的细胞，再将表皮细胞生长因子凝胶涂在薄膜上，最后覆盖无菌敷料。移植术后每日换药时，只需补充表皮细胞生长因子，根据创面愈合情况修剪薄膜，并不移动或更换膨化聚四氟乙烯薄膜。膨化聚四氟乙烯薄膜具有透气不透水且不与组织粘连的特性，有利于保持移植细胞固定与生长环境的稳定，防止细菌感染，为移植成功提供进一步的保障。本研究中未出现创面感染，推测应与膨化聚四氟乙烯薄膜的这种特性有关。

综上所述，使用该新型自体表皮细胞悬液移植术联合重组人表皮细胞生长因子（rhEGF）治疗患者皮肤全层缺损，愈合后皮片完整，抗挛缩性好，接近解剖学意义上的修复皮肤全层缺损，能修复患处皮肤的功能且保持良好的外观，无论是美观还是功能效果均令人满意。本技术操作简单，用时短，成活率高，全部治疗过程在门诊即可完成，可降低治疗费用，减轻患者的经济负担，同时减轻医疗机构的工作量，值得推广应用。