QuEChERS-高效液相色谱串联质谱法测定猪肝中氯丙嗪残留量

周青 周宏霞 姜华军 张玉洁

摘 要：建立了QuEChERS结合高效液相色谱串联质谱法测定猪肝中氯丙嗪残留量的检测方法。猪肝样品经过乙腈提取、QuEChERS净化后，通过C18色谱柱分离，在ESI正离子模式下，以质谱多反应（Multiple Reaction Monitoring，MRM）监测、外标法定量。结果表明，在0.5～100.0 ng/mL，氯丙嗪的线性相关系数在0.99以上，方法检出限为0.5 μg/kg，定量限为1.0 μg/kg;在3个浓度添加水平下，氯丙嗪的平均回收率在80.9%～95.1%，相对标准偏差在0.8%～1.9%。该方法准确、快速、高效，能够满足猪肝中氯丙嗪残留量的分析要求。

关键词：氯丙嗪;猪肝;QuEChERS;高效液相色谱串联质谱法

Determination of Chlorpromazine Residue in Swine Liver by QuEChERS-High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry

ZHOU Qing， ZHOU Hongxia， JIANG Huajun， ZHANG Yujie

（Weihai Institute for Food and Drug Inspection and Testing， Weihai 264209， China）

Abstract： An efficient method was developed for the determination of chlorpromazine residues in swine liver by QuEChERS combined with high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. The sample was extracted by acetonitrile， purified by QuEChERS， separated on C18 column， analyzed in positive electronic spay ionization （ESI+） mode with dynamic reaction mointoring（MRM）， and quantified by the external standard method. The results showed that the calibration curves are linear （R2>0.99） over concentration range of 0.5～100.0 ng/mL. The limit of detection was 0.5 μg/kg， and the limit of quantification was 1.0 μg/kg. The recoveries of chlorpromazine at three spiked levels ranged from 80.9%～95.1%， with the relative standard deviations of 0.8%～1.9%. The method is accurate， rapid and efficient， which is suitable for analysis of chlorpromazine residues in swine liver.

Keywords： chlorpromazine; swine liver; QuEChERS; high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry

氯丙嗪（Chlorpromazine，CPZ）是一种吩噻嗪类药物，具有安眠、镇静等作用。但是一些不法商贩在饲料中添加氯丙嗪，对动物间接催肥或减少运输中的质量损失和死亡率，导致氯丙嗪在畜禽产品中存在残留[1]。氯丙嗪在动物体内的肝脏代谢过程中易引起药物残留，经食物链传递到人体后，能引起白细胞减少等不良反应，甚至导致人体肝肾的病变[2]。目前，《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》（GB 31650—2019）明确指出，氯丙嗪允許做治疗用，但在动物性食品中不得检出[3]。

近年来，氯丙嗪的检测方法有气相色谱法[4]、液相色谱法[5]、气质联用法[6]和液质联用法[7]。液相色谱串联质谱法以其高灵敏度和高准确性，在氯丙嗪的检测中具有明显的优势。本研究采用液相色谱质谱联用技术，在现有研究基础上，重点研究了QuEChERS法对猪肝样品的前处理方法优化，建立了乙腈提取、QuEChERS净化、高效液相色谱串联质谱法测定氯丙嗪残留量的分析方法，为猪肝中氯丙嗪的测定提供了科学依据。

1 材料与方法

1.1 仪器

Qtrap 6500液相色谱质谱联用仪，美国AB SCIEX公司;SQP电子天平，美国Sartorius公司;GM200刀式研磨仪，德国Retsch公司;超纯水机，法国Millipore公司;移液枪，美国Sartorius公司;超声波清洗器，昆山美美超声仪器有限公司;涡旋混合器，德国IKA公司;高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司;TurboVAP全自动氮吹浓缩仪，瑞典Biotage公司。

1.2 试剂

盐酸氯丙嗪（99%，中国食品药品检定研究院）;乙腈、乙酸乙酯、甲醇（色谱纯、美国FISHER公司）;甲酸（色谱纯，上海麦克林生化科技有限公司）;无水硫酸钠、无水硫酸镁（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）;PSA、C18（天津博纳艾杰尔科技有限公司）。

1.3 试验方法87802F42-BF74-432F-92D9-02027006B9AA

1.3.1 标准溶液的配制

准确称取氯丙嗪标准品，用甲醇配制成100 μg/mL的标准储备液，-18 ℃避光储存备用。量取适量标准储备液，用甲醇稀释成1 μg/mL的标准中间液，4 ℃避光保存。分别量取适量标准中间液，用空白基质提取液稀释，配制成0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、50.0 ng/mL和100.0 ng/mL的系列标准工作溶液。氯丙嗪标准品的离子色谱图见图1。

1.3.2 样品前处理

将样品粉碎，称取5.00 g样品，置于50 mL聚四氟乙烯离心管中，加入10 mL乙腈，2.0 g无水硫酸钠，涡旋混合1 min，超声提取5 min，4 000 r/min离心10 min，转移上清液，残渣用10 mL乙腈重复提取一次。合并两次提取液。取上清液4 mL于100 mg C18、150 mg PSA、500 mg无水硫酸镁的10 mL离心管中，涡旋混合1 min，8 000 r/min离心5 min。将上清液在40 ℃氮吹至近干，加1 mL初始流动相溶液溶解，过0.22 μm有机滤膜，待测定。

1.3.3 色谱条件

色谱柱：Kinetex C18，100 mm×2.1 mm，2.6 μm;流动相A：0.1%甲酸溶液，流动相B：乙腈;梯度洗脱程序：0～2 min，90% A;2～8 min，90%～10% A;8.1～10.0 min，10%～90% A;流速：0.3 mL/min;柱温：40 ℃;进样量：5 μL。

1.3.4 质谱条件

电离方式：ESI+;监测模式：MRM;离子源温度：500 ℃;喷雾电压：4 500 V;气帘气压力（CUR）35 psi;雾化器压力（GS1）55 psi;辅助雾化气压力（GS2）55 psi。氯丙嗪的质谱参数见表1。

2 结果与分析

2.1 提取溶剂的选择

氯丙嗪是脂溶性化合物，易溶于乙腈、甲醇、乙酸乙酯等，实验分别采用乙腈、甲醇、乙酸乙酯、乙腈∶水溶液（1∶1）（V/V）等溶剂进行提取，净化条件选择QuEChERS法，进行加标回收实验[2，7]。结果表明，采用甲醇、乙酸乙酯作为提取溶剂时会提取出部分脂类等基质干扰物质，影响后续的净化和分析检测;乙腈-水溶液提取时，提取液较为混浊，而乙腈的提取效果好、干扰较小，且具有沉淀蛋白质的作用[8]。因此，本研究采用乙腈进行样品的提取处理。

2.2 前处理条件的优化

在样品净化过程中，本研究比较了HLB固相萃取柱[9]、QuEChERS法等净化方法。由于氯丙嗪属于脂溶性化合物，因此并不适合液液萃取的净化方法[1]。采用HLB固相萃取柱净化时，氯丙嗪的回收率较低，回收率在45.1%～66.7%;采用QuEChERS法进行净化时，PSA对样品中的脂肪、蛋白质类化合物具有较好的吸附作用，C18可以有效吸附色素类物质，此时氯丙嗪的回收率均在80%以上。因此，选择QuEChERS法进行样品提取液的净化。

2.3 方法的线性范围和检出限

本方法采用空白样品基质提取液配制基质标准工作溶液，在0.5～100.0 ng/mL的浓度下，以样品浓度对应的峰面积绘制标准曲线。氯丙嗪标准曲线的回归方程为：y=7 022.970 18x-1 453.511 59，相关系数r为0.997 2，呈现良好的线性关系。以3倍信噪比为检出限，10倍信噪比为定量限，氯丙嗪的检出限为0.5 μg/kg，定量限为1.0 μg/kg。

2.4 方法回收率与精密度

在空白猪肝样品中添加1.0 μg/kg、2.5 μg/kg、10.0 μg/kg 3个水平的标准工作溶液，按照1.3.2的方法进行前处理，每个水平平行测定6次，结果表明氯丙嗪的加标回收率为80.9%～95.1%，RSD为0.8%～1.9%，见表2，回收率与精密度均能满足检测要求。

2.5 实际样品测定

采用该方法对15批次市售猪肝样品进行测定，结果表明所购买的猪肝样品中均未检出氯丙嗪残留。

3 结论

本研究采用高效液相色谱串联质谱法建立了猪肝中氯丙嗪残留的快速检测方法，采用基质标准溶液校准，外标法定量。该方法检出限为0.5 μg/kg，定量限为1.0 μg/kg，具有较好的线性范围、精密度和回收率。结果表明该方法检测灵敏度高、重现性好，可为猪肝中氯丙嗪残留量的检测提供参考依据。

参考文献

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