miR-423-5p与miR-212在生长激素型垂体腺瘤患者血清中的表达及与预后的相关性研究*

沈海涛，焦荣红，姚晓阳

1.上海中医药大学附属第七人民医院检验科，上海 200137；2.上海市浦东新区人民医院检验科，上海 201299

垂体腺瘤是颅内最常见的良性肿瘤之一，可分泌包括催乳素、生长激素(GH)、促甲状腺素等多种激素，造成患者内分泌功能的紊乱[1]。其中，GH型垂体腺瘤是垂体腺瘤中的常见类型，可分泌过多的GH，造成患者肢端肥大症等综合征[2]。目前，GH型垂体腺瘤的发病机制及预后的影响因素尚不明确，因此，探寻可早期预测GH型垂体腺瘤的生理指标具有重要意义[3]。既往研究表明，微小RNA(miR)-423-5P能够抑制垂体腺瘤细胞增殖并诱导其凋亡，在GH3细胞中发挥重要作用[4]；miR-212是近期发现的一种miRNA，在肿瘤细胞凋亡、免疫应答及恶性胶质瘤的抗辐射特性中具有重要作用[5]。因此，推测miR-423-5p、miR-212与GH型垂体腺瘤细胞的增殖与治疗效果有关，但二者与GH型垂体腺瘤患者的预后关系尚不明确。因此，本研究通过检测GH型垂体腺瘤患者血清中miR-423-5p、miR-212表达水平并分析二者与其预后的关系，旨在为今后临床工作中评估GH型垂体腺瘤患者预后提供一定的参考依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2018年1月至2020年1月收治的GH型垂体腺瘤患者为研究对象，以中国垂体腺瘤协作组牵头制定的《肢端肥大症诊治中国专家共识(2020版)》为诊断标准进行诊断[6]。纳入标准：(1)符合上述诊断标准，且经过术后病理证实；(2)所有患者对本研究知情，自愿参加本研究并签署知情同意书。排除标准：(1)合并肝、肾、心等重要脏器功能不全；(2)合并其他良、恶性肿瘤的患者；(3)合并其他内分泌疾病；(4)严重传染性疾病，不适宜参加本研究的患者。随访结束后，共有108例患者纳入本研究，根据患者血清中GH水平与MRI影像学资料，64例患者评价为缓解，44例患者评价为未缓解。其中，缓解组患者中男38例、女26例，平均年龄(31.36±8.72)岁；对照组中男20例、女24例，平均年龄(29.43±7.88)岁。两组患者性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2主要试剂 miRNeasy Serum/Plasma Kit(德国QIAGEN公司)；SYBR PrimeScriptTMmiRNA RT-PCR Kit(德国QIAGEN公司)。

1.3方法

1.3.1样本收集 采集观察组及对照组清晨空腹肘正中静脉血5 mL置于EDTA抗凝管中，室温静置并离心后吸取血清并立即存放于-80 ℃冰箱中保存以备后续试验。

1.3.2血清总RNA提取、反转录及PCR 使用miRNeasy Serum/Plasma Kit血液RNA提取试剂盒提取各组血清，严格按照试剂盒说明书进行操作，通过分光光度仪检测所提取RNA的A260/A280值，当该值为1.9～2.1时逆转录为cDNA。根据SYBR PrimeScriptTMmiRNA RT-PCR Kit试剂盒说明书配制反应体系，以95 ℃ 10 min、62 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s为反应体系，共反应45个循环，以U6作为内参照，采用2-ΔΔCt方法计算miR-423-5p与miR-212相对表达水平，反应体系所使用引物序列见表1。

表1 引物序列

1.4治疗 本研究患者均采用内镜下经鼻蝶垂体腺瘤切除术进行治疗，手术由本科室主任医师完成，术后常规止痛等对症支持治疗。

1.5随访方法及评估标准 以术后次日为随访起点，通过电话、短信及门诊复查方式进行随访，随访周期为6个月，并根据患者预后，分为缓解组(即预后良好)与未缓解组(即预后不良)。所有患者评价预后为缓解的标准如下：(1)随访期内患者空腹GH<10 μg/L；(2)随访期内患者头颅MRI未见复发。根据随访结果，将患者分为缓解组与未缓解组。

2 结 果

2.1两组患者血清miR-423-5p与miR-212表达水平比较 PCR结果显示，与缓解组相比，未缓解组患者血清miR-212与miR-423-5p表达水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组患者血清miR-423-5p与miR-212表达水平比较

2.2血清miR-423-5p与miR-212对GH型垂体腺瘤患者预后评价 ROC曲线显示，血清miR-212水平预测GH型垂体腺瘤患者预后的曲线下面积为0.857，此时其灵敏度为85.2%，特异度为90.3%；血清miR-423-5p水平预测GH型垂体腺瘤患者预后的曲线下面积为0.829，此时其灵敏度为72.3%，特异度为78.4%。

3 讨 论

GH型垂体腺瘤是功能性垂体腺瘤中的一类，是常见的鞍区肿瘤之一[7]。GH型垂体腺瘤不仅能够引起鞍区占位效应，导致颅内压增高、头痛及视乳头水肿，还可因为分泌过量的GH导致巨人症与肢端肥大症，部分患者还会引起糖耐量降低、睡眠障碍与睡眠呼吸暂停等症状[8]。目前，GH型垂体腺瘤的治疗主要以手术治疗为主，部分患者可采取生长抑素类药物治疗，或手术辅助药物治疗等手段[9]。近年来，随着神经内镜技术的不断发展，手术治疗垂体腺瘤能够获得较为满意的疗效，但是少部分患者仍然存在GH水平过高或肿瘤易复发等问题，对GH型垂体腺瘤患者预后的预测仍然缺乏有效手段[10]。既往研究表明，miRNA在许多肿瘤的发生、发展中发挥重要的生物学作用，两者之间具有密切关系，miRNA常常参与基因的转录与调控，起到类似原癌基因或抑癌基因的作用[11]。此外，miR-212可通过调控c-Met水平抑制肿瘤细胞的增殖与侵袭，从而在肿瘤的发生、发展中起到抑癌基因的作用[12]。有研究显示，GH型垂体腺瘤患者体内miR-212的表达水平明显下调，提示miR-212可能与GH型垂体腺瘤的发生与发展关系密切[13]。赵斯达等[14]通过研究发现，对比GH型垂体腺瘤与对照组血清miRNA表达水平差异，共找到169个差异表达的miRNA，其中miR-423-5p在GH型垂体腺瘤中低表达；经过对比后发现，miR-423-5p具有抑制GH型垂体腺瘤细胞增殖、诱导其凋亡并减少GH释放的作用。细胞凋亡在肿瘤的发生、发展过程中具有重要作用，而研究已经证实，miR-212与细胞凋亡关系密切[15]。既往研究表明，在前列腺癌患者中，其肿瘤组织与癌旁组织内miR-212的表达水平不同，肿瘤组织内miR-212水平显著降低，进一步研究发现miR-212能够显著提高前列腺癌细胞的凋亡水平[16]。同时有研究表明，miR-212在乳腺癌组织中表达水平显著降低，上调其表达水平能够显著抑制乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力并促进其凋亡。有研究显示，在GH型垂体腺瘤中，miR-212同样发挥类似“抑癌基因”作用，及机制可能与其能够促进垂体腺瘤细胞凋亡有关[17]，但具体机制尚不明确。本研究结果显示，未缓解组患者血清中miR-212表达水平降低，这与既往研究结果一致。尽管miR-212在调控GH型垂体腺瘤的作用机制尚不是十分清楚，但结合既往在其他肿瘤中的研究，其分子机制可能与miR-212对肿瘤细胞凋亡的调控有关[18]。

既往研究表明，miR-423-5p在多种肿瘤组织中表达异常，参与多种肿瘤组织的发生及发展，且在不同肿瘤组织中发挥不同的生物学功能，例如，miR-423-5p在神经胶质瘤组织中高表达，下调miR-423-5p的表达水平可抑制胶质瘤细胞的增殖并抑制肿瘤增长；相反，上调胶质瘤细胞中的miR-423-5p表达则会增强细胞的增殖及侵袭能力[14-15]。外源性miR-423-5p能够提高胃癌细胞的异型性，并能够增强胃癌细胞的侵袭能力[19-20]。但是，miR-423-5p在GH型垂体腺瘤组织中发挥的作用鲜有报道，miR-423-5p对GH型垂体腺瘤细胞的生物学功能尚不清楚。本研究对两种预后结局患者血清中miR-423-5p表达水平进行对比，发现缓解组患者血清中miR-423-5p表达水平较未缓解组患者血清高，说明在GH型垂体腺瘤组织中miR-423-5p的表达对肿瘤细胞具有促进作用，但其作用机制尚不明确，也可能与本研究的样本量较少，术后随访时间较短有关。

综上所述，GH型垂体腺瘤患者血清miR-212与miR-423-5p表达水平与患者预后有关，二者的表达水平对GH型垂体腺瘤患者的预后具有一定的诊断价值。