艾叶炭的化学成分研究

谷 乐，邵信婷，王雪钰，杨昭怡，段明华，王 烨，李 勇

（长春中医药大学药学院，长春 130117）

艾叶炭由菊科多年生草本植物艾（Artemisia argyi Lévl，et Vant）的干燥叶经高温炮制而来。中药艾叶被广泛用作食物和草药，具有温经止血、散寒止痛的功效。艾叶中含有挥发油、黄酮类、鞣质类、三萜类等多种化学成分[1-8]，具有抗菌抗病毒、平喘镇咳祛痰、保肝、抗肿瘤、抗氧化等多种药理活性作用[9-12]。根据中药炒炭存性理论，艾叶高温炒炭过程是炭化而非灰化，炒炭后原指标性成分桉油精消失[13]，但仍有部分有机物未炭化，且有新的化学成分生成[14]。同时炒炭后难溶性草酸钙簇晶大幅减少产生游离钙离子，止血作用明显增强[15-17]。目前艾叶炭的化学研究十分稀少，在本课题组前期研究基础上，艾叶炭地方质量标准已被收载于2020年版《吉林省中药饮片炮制规范》第40页，本研究旨在对艾叶炭化学成分进行研究，进一步阐明中药炒炭存性理论并为临床应用奠定基础。

1 材料与仪器

1.1 药材

艾叶炭为实验室自制，产品批号为20200511。艾叶炮制过程：将艾叶饮片净选，除去杂质、梗及灰屑，揉散置滚筒式炒药机中，设置锅底温度为180 ℃，转速为20 r·min-1，待艾叶炒制冒黄烟，取少量水均匀喷洒，翻炒16 min左右，待艾叶表面焦黑色，炒干，灭尽火星，取出，放凉得艾叶炭。其外观呈不规则碎片，表面为黑褐色，符合2020年版《吉林省中药饮片炮制规范》中的艾叶炭标准。

1.2 试剂与仪器

乙腈（HPLC，Fisher Co.，美国），磷酸（HPLC，国药集团化学试剂有限公司，中国）甲醇（AR，HPLC，国药集团化学试剂有限公司，中国），正己烷（AR，HPLC，北京化工厂，中国），乙酸乙酯（AR，HPLC，广东光华科技股份有限公司，中国），纯化水为实验室自制；核磁共振光谱仪（1H NMR：400 MHz，13C NMR：100 MHz，Merk Co.，德国），使用CDCl3和DMSO-d6为溶剂，高效液相色谱仪（Aglient：1 260 Infinity II， 美 国；Waters：600 Controller，Delta 600，2487，美国），精密电子天平（FA1204B 上海菁海仪器有限公司，中国），层析用硅胶（200-300目，青岛海洋化工厂，中国），高效液相色谱柱（SHIMADZU C18 10 mm×250 mm；GSA10250SIL19001 10 mm×250 mm，环球色谱有限公司，中国），三用紫外分析仪（ZF-6，安灵股份有限公司，中国），旋转蒸发器（RE-52A，上海亚荣生化仪器厂，中国），水浴锅（HH-6，邦西仪器科技上海有限公司，中国）。

2 方法与结果

2.1 提取与分离

艾叶炭1.0 kg甲醇回流提取2次，每次30 min，合并提取液，浓缩得到20.10 g提取物。经硅胶柱色谱（200～300 目），以正己烷-乙酸乙酯（10:0～0:10）溶剂系统梯度洗脱，经TLC检识合并相似流分，得到Fr.1-5。将Fr.1通过半制备正向高效液相色谱法（正己烷:乙酸乙酯=10:1，2.0 mL·min-1），分离得到化合物2（68.72 mg，Rt 35.7 min），高效液相色谱图1B；从Fr.4通过半制备反向高效液相色谱法（乙腈:0.1%磷酸=55:45，2.0 mL·min-1），分离得到化合物1（75.69 mg，Rt 22.4 min），高效液相色谱图见图1A。

图1 HPLC色谱图

2.2 结构鉴定

化合物1黄绿色粉末；1H NMR （600 MHz，DMSO-d6，TMS），δH ：9.58（1H，s，OH-3），12.50（ 1H，s，OH-5），6.21（ 1H，d，J=2.0 Hz，H-6），10.76（ H，s，OH-7），6.42（ 1H，d， J =2.0 Hz，H-8），7.69 （1H，d，J =2.2 Hz，H-2´），9.35 （1H，s，OH-3´），9.30 （1H，s，OH-4´），6.90 （1H，d，J =8.5 Hz，H-5´），7.56（1H，dd，J=8.5 Hz，2.2 Hz，H-6´）；13C-NMR （150 MHz，DMSO，TMS），δC ：148.1（C-2），136.2（C-3），176.3（C-4），161.2（C-5），98.6 （C-6），164.9（C-7），93.8（C-8），156.6（C-9），103.5（C-10），120.4（C-1´），116.1（C-2´），145.5（C-3´），147.2（C-4´），115.5 （C-5´），122.4 （C-6´）。以上数据与文献[18-19]报道一致，故鉴定化合物1为槲皮素（Quercetin），化学结构见图2A。

图2 化合物结构图

化合物2白色粉末；LR-EIMS （m/z，392），1H-NMR（600 MHz，CDCl3，TMS），δH ：3.59（ 2H，t，J =6.78 Hz，H-1），2.02（H，d，J =5.16Hz，OH-1），1.52（2H，m，H-2），1.29（50H，m，H-3～27），0.85（3H，m，H-28），13C-NMR（150 MHz，CDCl3，TMS），δC：63.1（C-1），32.8（C-2），31.9（C-3），29.7（C4～ 24），27.1（C-25），25.7（C-26），22.7（C-27），14.1（C-28） 。以上数据与文献[20-22]报道一致，故鉴定化合物2为二十八烷醇（Octacosanol），化学结构见图2B。

3 讨论

近年来艾叶以其温经止血为疗效被大量开发应用，其相关炮制品也广泛用于临床。传统中医药理论中炒炭存性是指药物只能部分炭化，更不能灰化，未炭化部分仍应保存药物的固有气味。艾叶炭由艾叶高温炮制而来，利用传统性状和总黄酮含量的双重综合评价确定180℃为其最佳炮制温度。炒炭后原指标性成分桉油精消失，无法用其含量评价艾叶炭质量。同时，难溶性草酸钙簇晶大幅减少产生游离钙离子增加止血作用，这与“炒炭止血”的传统中医药理论相一致。因此，对于艾叶炭中化学成分尤其是指标性成分研究尤为迫切。本研究在从艾叶炭中分离出2个黄酮类化合物，分别为槲皮素和二十八烷醇，并对其进行了综合光谱解析，通过1D&2D光谱对其进行了完整的结构归属，纠正了部分数据的归属错误，不仅为中药炒炭存性理论提供依据，同时，为日后艾叶炭质量标准的进一步完善与提升奠定坚实基础。