一种快速判定烫狗脊饮片炮制程度的评价方法

陈敬然，杜微波，张志强，沈建梅

(北京康仁堂药业有限公司中药配方颗粒关键技术国家地方联合工程研究中心/北京市中药配方颗粒工程技术研究中心，北京101301)

狗脊为蚌壳蕨科植物金毛狗脊Cibotiumbarometz(L.)J.Sm.的干燥根茎[1]，是传统的祛风湿中药，临床上根据症状的差异分别使用狗脊、烫狗脊，中医理论认为生狗脊以祛风湿、利关节为主，烫狗脊以补肝肾、强腰膝为主，现代研究认为化学成分的变化是生熟异治的原因，恰当的炮制程度是中药饮片作用于临床的重要保障，而关于饮片炮制程度是否合适的判别方法研究鲜有报道[2]，目前大多数的研究更多的是关注于炮制机理、炮制后成分差异及炮制工艺的确定，如解世全等[3]通过对烫狗脊炮制工艺的研究，发现烫狗脊饮片，其砂烫时间不同、饮片鼓起程度不同，对原儿茶酸含量也存在影响，鼓起程度高的原儿茶酸含量相对较高[4]；袁叶飞等[5]通过狗脊膨化实验研究，发现体积增大前后的狗脊饮片，体积变化大的醇溶性浸出物的含量明显增加，而且镇痛功效明显增强。通过以上研究可知，烫狗脊炮制过程中发生了表面鼓胀的情况，《中国药典》2020版也将烫狗脊的炮制描述为“砂烫至鼓起”，但应鼓胀到什么程度，法定标准和现代研究均没有给出明确的标准。对于市场上应用的烫狗脊的质量评估只能以《中国药典》2020版“烫狗脊”项下的原儿茶酸含量限度标准进行判断，但原儿茶酸的含量与炮制程度的相关性研究却未见报道，因此采用法定标准不能判断烫狗脊是否炮制到位。本研究从烫狗脊烫制后体积膨胀出发，将炮制前后其饮片密度差异与专家判别结果相关联，明确烫狗脊炮制到位的密度限值，建立了一种快速准确的判定烫狗脊饮片炮制程度的方法，以弥补现有技术的空白。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Waters ACQUITY UPLC®H-Class超高效液相色谱仪，PDA Detector紫外检测器，Empower 3色谱工作站；ME104E电子天平(梅特勒·托利多)，JY2002电子天平(梅特勒·托利多)，BSA124S电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，BT25S电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，KQ-500DB超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试剂与试药

原儿茶酸对照品(批号：110809-201906，中国食品药品检定研究院)；甲醇、磷酸为色谱纯，水为屈臣氏蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

试验所用生狗脊片、烫狗脊分别产于广西、广东、云南等地，共21批，购自安徽亳州药材市场，饮片经北京康仁堂药业有限公司于立伟老师鉴定为蚌壳蕨科植物金毛狗脊(Cibotiumbarometz(L.) J.Sm.)的干燥根茎。详情见表1。

表1 材料来源

2 方法与结果

2.1 烫狗脊饮片炮制程度判定法

根据文献调研，解世全等[3]通过正交实验优选出了烫狗脊最佳工艺，得出砂烫时间对狗脊中成分影响最大，砂烫温度影响较小，砂量几乎无影响，最终工艺为：180～190 ℃，砂烫6 min，用砂量为8倍量。白桐菲、许枬等[6-7]也验证了该工艺的可行性，还发现饮片的规格和炮制工艺有很大关系，当饮片为厚度30 mm及以上的饮片，炮制时间应在12～15 min，用砂量为10倍量，且砂烫温度应增加至200～220 ℃，由于本研究所使用的狗脊饮片厚度均在10～30 mm，因此将砂烫温度设定为200～220 ℃，砂量控制为8～10倍，对砂烫时间进行考察。

2.1.1 烫狗脊饮片的制备 将河砂置于热锅内，加热至200～220 ℃，取不同批次大小均匀的生狗脊片约100 g，置热锅内，翻炒，分别炒制5、8、11、14、17、20 min时取出，放凉，除去残存绒毛，即得烫狗脊饮片。

2.1.2 饮片检测 将不同炮制时间的烫狗脊饮片，按《中国药典》中烫狗脊饮片含量测定方法进行检测。结果狗脊饮片炮制5 min后，饮片中水分受热蒸发，且烫狗脊饮片原儿茶酸含量均符合《中国药典》规定，在狗脊饮片炮制8 min后，饮片中水分已基本恒定。见表2。

2.1.3 烫狗脊饮片炮制程度判定方法的建立 取河砂400 g，置于烧杯中，震荡，保证砂面水平，测定高度，记录。取生狗脊饮片及不同炮制时间的烫狗脊饮片各30 g，置同一烧杯中，倒入400 g河砂，震荡，保证砂面水平，测定高度，计算密度值；重复上述操作3次，计算密度值的平均值，作为最终密度值；并请从事饮片鉴定的专家进行鉴定，保证结果的准确性。见表2。

表2 炮制程度密度值

由以上结果可知，当烫狗脊饮片的密度为0.43～0.60 g·cm-3时，原儿茶酸含量符合药典规定，且专家鉴定为合格炮制品；当烫狗脊饮片的密度>0.60 g·cm-3或<0.43 g·cm-3时，为不合格炮制品。

2.1.4 方法学考察 (1)重复性考察：由同一个分析人员在同一个实验室内，对同一烫狗脊饮片均按照“2.1.3”项下方法进行测定，在1天之内重复测试6次，并计算RSD。结果烫狗脊饮片平均密度值为0.56，RSD为0.73%。

(2)精密度考察：选择6名不同的实验人员，在同一实验室内，对同一烫狗脊饮片均按照“2.1.3”项下方法进行测定，并计算RSD。结果不同实验人员测定烫狗脊饮片平均密度值为0.56，RSD为0.73%。

(3)稳定性考察：由同一个分析人员在同一个实验室内，对同一烫狗脊饮片按照“2.1.3”项下方法分别在0、2、4、6、8、12、18、25 h进行测定，并计算RSD。结果不同时间测定烫狗脊饮片平均密度值为0.56，RSD为0.83%。

(4)方法验证：将随机在市场中采购的18批烫狗脊饮片，按照“2.1.3”项下方法进行测定；并参照《中国药典》中“烫狗脊含量测定”项下的检测方法进行原儿茶酸的含量检测；同时请专业从事饮片鉴定10年的专家进行判定，结果表明本判定方法针对烫狗脊饮片炮制程度的判断结果与专家鉴定的烫狗脊饮片炮制方法一致。见表3。

表3 不同批次烫狗脊密度值验证结果

3 结语

根据文献调研，烫狗脊在炮制过程中其化学成分原儿茶酸-3-O-糖苷受到加热的影响可分解成原儿茶酸和糖[8-10]，《中国药典》2020版也采用原儿茶酸的含量限值对烫狗脊进行质量控制，要求烫狗脊中原儿茶酸的含量不得少于0.02%，在本实验研究过程中发现，采用该方法检测时，烫狗脊饮片中原儿茶酸和其同分异构体在炮制未合格的情况下，特征峰分离效果较差，易造成原儿茶酸含量测定不准确，因此采用《中国药典》方法检测原儿茶酸含量增加了判别错误的风险。

2020版《中国药典》中规定烫狗脊的炮制方法为：照烫法(通则0213)用砂烫至鼓起，放凉后除去残存绒毛。目的是使狗脊药材高温处理后质地疏松，利于煎出有效成分，但砂炒至药材呈疏松鼓起状，并不易把握火候，往往因为以砂为媒介导致受热不均匀，出现一部分药材已发生炭化而另一部分药材却炮制不彻底的现象[11]，因此造成大量伪劣饮片混入市场，市售烫狗脊饮片质量参次不齐，无法判断，严重影响了中药的临床功效。

本实验证明，采用密度测定法对烫狗脊饮片炮制程度进行了判定，该方法有利于本实验采用密度值测定法对烫狗脊饮片炮制程度进行判定，密度值法基于烫狗脊受热体积增大，通过对烫狗脊饮片体积增大前后密度的变化，以密度客观数据代替主观经验判断，因此使烫狗脊炮制程度“可视化”。本实验通过对比专家鉴定法对市售烫狗脊饮片判断准确率的方式进行验证，密度值法的准确率可达到90%，因此本方法具有方便快捷、成本低廉、准确性高的特点。

本研究提供的烫狗脊饮片炮制程度判断方法，脱离了常规采用色谱研究对炮制程度进行判断的方法，是一种更为简便的方法，可在不损坏样品的情况下，进行快速测定；并将饮片炮制前后体积的变化以密度值作为表现形式，实现烫狗脊炮制状态的量化，将砂烫过程中饮片性状的变化以数据形式展示，更加透明和简单易懂，并为其他品种的炮制判断方法提供了一种新思路。