蒸狗脊质量标准研究

杨德泉 佘永红 唐 庆 吉林芳 丁 野

1.湘西土家族苗族自治州食品药品检验所，湖南 吉首 416000；2.湖南省药品检验检测研究院，湖南 长沙 410001

狗脊为蚌蕨科植物金毛狗脊Cibotiumbarometz(L.) J. Sm.的干燥根茎，别名：金毛狗脊、金毛狗、金狗脊、金毛狮子、猴毛头、黄狗头[1-2]。是历代常用中药，《神农本草经》列为中品。性温，味苦、甘。归肝、肾经。具有补肝肾、强腰脊、祛风湿的功效。临床用于治疗腰膝酸软、下肢无力、风湿痹痛。狗脊的炮制饮片有净狗脊片、烫狗脊、蒸狗脊等规格。其中，蒸狗脊为净狗脊片加黄酒拌匀，经蒸制4～6 h，闷6～8 h，取出，干燥所得的饮片[3]。中药炮制理论认为，酒制狗脊具有增强“补肝肾，强腰膝”的作用[4]。现代药理研究[5]表明，狗脊能够改善佐剂性关节炎大鼠及肾阳虚佐剂性关节炎大鼠血液流变性，通过活血化瘀起到一定的治疗作用。狗脊及其炮制品和狗脊毛具有镇痛作用和不同程度的活血作用[6]。狗脊各炮制品的正丁醇提取部位对于成骨细胞的增殖作用显著[7]。蒸狗脊在抗骨质疏松症作用方面有效[8]。赵敏杰等[9]报道，狗脊中总酚酸和多糖的含量经酒制蒸炮制后由0.25%增加至1.38%，符合制狗脊“补肝肾作用增强”的传统炮制理论。蒸狗脊收载于《湖南省中药饮片炮制规范》2010年版，为进一步提升蒸狗脊的质量，笔者对蒸狗脊标准进行完善和提高研究，现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器 KM5200DE 型超声波清洗器(昆山美美超声仪器有限公司)；AUW220D电子天平( 日本岛津公司)；GoodSee-10型薄层色谱成像仪(上海科哲生化科技有限公司)。

1.2 材料 蒸狗脊饮片(样品编号1、2、3为湖南博世康中医药有限公司提供；样品编号4、5、6为湖南振兴中药有限公司提供；样品编号7、8、9为湖南衡岳中药饮片有限公司提供)。狗脊对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：121071-201706)，原儿茶醛(中国食品药品检定研究院，批号：110810-201608)，原儿茶酸(中国食品药品检定研究院，批号：110809-200503)。所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 成品性状 本品呈不规则块状，表面褐色或暗褐色，较平滑。近边缘1～4 mm处有一条棕褐色隆起的环纹或条纹，中间浅棕褐色，满布小点，周边不整齐，偶有金黄色绒毛残留。质地坚硬，角质。微有香气，味微甘。如图1所示。

2.2 薄层色谱鉴别 取本品粉末2 g，加甲醇 50 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取狗脊对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。取原儿茶醛对照品、原儿茶酸对照品，加甲醇制成每1 mL各含0.5 mg的溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2020年版四部0502)试验，吸取供试品溶液3～6 μL、对照药材溶液 4 μL、对照品溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(3∶5∶6∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁溶液-1%铁氰化鉀溶液(1∶1)(临用配制)，放置至斑点显色清晰。实验结果显示，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(图2)。

2.3 检查

2.3.1 水分 照《中国药典》2020年版四部0832水分测定法第二法测定，平均值为9.97%，以平均值的120%设限，为12.0%，参考《中国药典》2020年版一部狗脊项下该项目的限度，建议蒸狗脊的水分限度定为“不得过13.0%”。结果见表1。

2.3.2 总灰分 照《中国药典》2020年版四部通则2302，测定9批蒸狗脊样品的总灰分，平均值为2.11%，以平均值的120%设限，为2.5%，参考《中国药典》2020年版一部狗脊项下该项目的限度，建议蒸狗脊的总灰分限度定为“不得过3.0%”。总灰分实验结果见表1。

表1 蒸狗脊饮片浸出物测定数据

2.3.3 浸出物测定 照《中国药典》2020年四部通则2201水溶性浸出物测定法热浸法，测定9批蒸狗脊饮片的浸出物，平均值为34.69%，以平均值的80%设限，为27.8%，建议蒸狗脊的浸出物限度定为“不得少于27.0%”。浸出物实验结果见表1。

3 讨论

3.1 蒸狗脊薄层色谱鉴别的对照品选择 狗脊主要化学成分[10-13]有原儿茶酸、原儿茶醛、金毛狗脊苷、金粉蕨素、金粉蕨素-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、24-亚甲基环木菠萝烷醇、β-谷甾醇、β-谷甾醇-β-D-葡萄糖苷，胡萝卜苷、正丁基-β-D-吡喃果糖苷、正丁基-O-β-D-吡喃果糖苷、(3R)-去-O-甲基毛狄泼老素、山奈素、对羟基乙酰苯胺、香草醛、齐墩果酸、熊果酸、阿魏酸等成分。其中原儿茶酸、原儿茶醛为《中国药典》2020年版狗脊的含量测定成分[14]，本次研究中以这两个成分和狗脊药材为对照品，定性鉴别蒸狗脊，结果得到的色谱图清晰，斑点分离度良好。

3.2 蒸狗脊浸出物方法的选择 《湖南省中药饮片炮制规范》[3]2010年版蒸狗脊的浸出物测定采用以70%稀乙醇为溶剂，规定浸出物不得少于18.0%。本次研究采用水溶性浸出物测定法——热浸法测定浸出物，浸出物的平均值为34.7%，更能体现蒸狗脊饮片成分在汤剂中的综合煎出率情况，检验溶剂成本更低，是蒸狗脊质量控制的可靠方法。

蒸狗脊炮制历史久远。《雷公炮炙论》记载:“凡修事，细锉了，酒拌，蒸，从已至申，出，晒干用。”《太平惠民和剂局方》言：“凡使，先以猛火燎去毛，令净，以酒浸一宿，蒸过焙干用。”狗脊因经蒸制或酒拌蒸后，补肝肾、强腰膝的作用增强，故为历代医药家所重视，而应用至今。蒸狗脊的质量是其临床疗效的重要保证，本研究建立的蒸狗脊的性状、鉴别、检查(水分、总灰分)、浸出物测定方法，从定性和定量两个方面，为蒸狗脊的质量控制提供了科学的方法。