儿童功能性便秘不同严重程度肠道菌群特点及胃肠激素水平变化

王放 薛今俊

[摘要] 目的 探討儿童功能性便秘不同严重程度肠道菌群特点及胃肠激素水平变化。方法  回顾性分析2019年1月至2020年10月浙江省立同德医院诊治的120例功能性便秘患儿的临床资料，将其设置为观察组，依据严重程度分为重度组（43例）与轻中度组（77例）。另选择同期进行体检的健康儿童120名为对照组。所有患者均检测肠道菌群数量及胃肠激素P物质（SP）、血管活性肠肽（VIP）、生长抑素（SS）、促胃动素（MTL）水平。结果  ①观察组患儿的乳杆菌、双歧杆菌数量明显少于对照组，大肠埃希菌明显多于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。②轻中度组患儿的乳杆菌、双歧杆菌数量明显多于重度组，大肠埃希菌数量明显少于重度组，差异均有统计学意义（P<0.05）。③观察组患儿的SP、MTL水平明显低于对照组，VIP、SS水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。④轻中度组患儿的SP、MTL水平明显高于重度组，VIP、SS水平明显低于重度组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论  儿童功能性便秘会造成肠道菌群失调及胃肠激素分泌不正常，同时病情越严重，肠道菌群失调及胃肠激素分泌不正常越明显。

[关键词] 功能性便秘;儿童;肠道菌群;胃肠激素;严重程度

[中图分类号] R725.7          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2022）11-0073-03

[Abstract] Objective To investigate the characteristics of intestinal bacteria and changes in gastrointestinal hormone levels in children with different severities of functional constipation. Methods The clinical data of 120 children with functional constipation diagnosed and treated in Tongde Hospital of Zhejiang Province from January 2019 to October 2020 were retrospectively analyzed and set as the observation group. According to the severity， the patients in the observation group were divided into the severe group （43 cases） and the mild to moderate group （77 cases）. Another 120 healthy subjects who underwent physical examination during the same period were selected as the control group. The number of intestinal bacteria and the levels of gastrointestinal hormone substance P（SP）， vasoactive intestinal skin （VIP）， somatostatin （SS）， and motilin （MTL） were measured in all patients. Results ①The number of Lactobacillus and Bifidobacterium in the observation group was significantly less than in the control group. The number of Escherichia coli was significantly more than that in the control group. The differences were statistically significant （P<0.05）. ②The number of Lactobacillus and Bifidobacterium in the mild to the moderate group was significantly more than that in the severe group. The number of Escherichia coli was significantly less than that in the severe group. The differences were statistically significant （P<0.05）. ③The SP and MTL levels of the children in the observation group were significantly lower than those in the control group. The VIP and SS levels were significantly higher than those in the control group. The differences were statistically significant （P<0.05）. ④The SP and MTL levels of the children in the mild to moderate group were significantly higher than those in the severe group. The VIP and SS levels were significantly lower than those in the severe group. The differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Functional constipation in children may cause intestinal flora imbalance and abnormal gastrointestinal hormone secretion. The more severe the disease， the more obvious the intestinal flora imbalance and abnormal gastrointestinal hormone secretion.2A8C9683-8A9E-46B4-8DE6-41F3EACD5843

[Key words] Functional constipation; Children; Intestinal bacteria; Gastrointestinal hormones; Severity

功能性便秘是儿科常见的一种疾病，可于不同年龄段发生，占儿童便秘的90%～95%，临床特征主要有排便时间延长、排便次数减少以及大便坚硬干燥等，对患儿的身心健康产生严重影响，同时给家属带来严重困扰[1-2]。功能性便秘患儿的发病机制与病因十分复杂，相关文献显示，心理、饮食、内脏感觉神经不正常、遗传、肠道菌群失调、平滑肌与血管病变、胃肠激素水平紊乱等均是导致此病的主要因素[3]。肠道菌群失调对功能性便秘的发展起着非常重要的作用，同时调节肠道菌群对功能性便秘的疗效已经取得临床认可[4]。胃肠激素是胃肠道中的神经细胞与分泌细胞产生的一类小分子活性多肽，与胃肠运动功能息息相关[5]。本研究探讨儿童功能性便秘不同严重程度肠道菌群特点及胃肠激素水平变化，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2019年1月至2020年10月浙江省立同德医院诊治的120例功能性便秘患儿的临床资料，将其设置为观察组，依据严重程度分为重度组（43例）与轻中度组（77例）。轻度便秘是指3～4 d排便1次，便干燥，成形;中度便秘是指5～6 d排便1次，便干燥，为大块;重度便秘是指7 d以上排便1次[6]。纳入标准：①与《功能性胃肠道疾病罗马Ⅲ标准》[7]内记载的标准相符;②检查直肠发现粪团可触及;排除标准：①伴有器质性消化系统病变者;②合并肠易激综合征者;③近15 d使用便秘药物治疗者;④出现严重心理疾病者。另选择同期在浙江省立同德医院进行体检的健康儿童120名为对照组。本研究经医院医学伦理委员会批准通过。

观察组女48例，男72例;年龄6～12岁，平均（8.02±1.65）岁;病程6～16个月，平均（11.14±2.36）个月。对照组女52例，男68例;年龄7～12岁，平均（8.35±1.52）岁;病程4～16个月，平均（10.89±2.44）个月。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 肠道菌群与胃肠激素水平检测方法

1.2.1 肠道菌群检测  无菌收集新鲜粪便200 mg置入无菌离心管内，保存于-70℃环境中;选择试剂盒Pow-erfecal DNA Isolation Ki对粪便内的DNA进行提取，按照双歧杆菌、大肠埃希菌、乳杆菌的基因序列16S rDNA对PCR引物进行设计，实施荧光定量PCR反应，反应的体系合计20 μl，其中1 μl下游引物、1 μl上游引物、9 μl SYBRGreen、7 μl DNA模板、2 μl ddH2O;反应条件为预变性95℃ 30 s、变性95℃ 5 s、退火34 s、延伸72℃ 30 s，最后延伸10 min，共计40个循环;纯化回收扩增的产物，对纯化产物的浓度与吸光度值进行测定，换算为1 μl标准品的拷贝数设计标准曲线;选择标准曲线与系统软件自动分析循环阈值对双歧杆菌、大肠埃希菌、乳杆菌的拷贝数进行计算，使用Ig CFU/g湿便的方式表达。其中双歧杆菌上游引物为CTCCTGGAAACGGGTGGT，下游引物为GCTGCCTCCCGTAGGAGT;大肠埃希菌上游引物为CATGCCGCGTGTATGAAGAA，下游引物为CGGGTAACGTCAATGAGCAAA;乳杆菌上游引物为AGCAGTAGGGAATCTTCCA，下游引物为CACCGCTACACATGGAG。

1.2.2 胃肠激素水平测定  选择降结肠黏膜，于4℃条件下保持3000 r/min的速度离心30 min，合计2次，上清液合并后于-80℃环境中保存，等待检查;选择放射免疫法对P物质（substance P，SP）、血管活性肠肽（vasoactine intrestinal peptide，VIP）、生长抑素（somatostatin，SS）、促胃动素（motilin，MTL）进行测定，试剂盒由北京东亚免疫技术研究所提供。

1.3 观察指标

比较分析观察组患儿与健康组及轻中度组与重度组患儿肠道菌群数量（主要包括乳杆菌、双歧杆菌、大肠埃希菌）、观察组患儿与健康组及轻中度组与重度组患儿胃肠激素水平（包括SP、VIP、SS、MTL）

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组肠道菌群数量比较

观察组患儿的乳杆菌、双歧杆菌数量明显少于对照组，大肠埃希菌数量明显多于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 轻中度组与重度组肠道菌群数量比较

轻中度组患儿的乳杆菌、双歧杆菌数量明显多于重度组，大肠埃希菌数量明显少于重度组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 观察组与对照组胃肠激素比较

觀察组患儿的SP、MTL水平明显低于对照组，VIP、SS水平明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2.4 轻中度组与重度组胃肠激素比较分析

轻中度组患儿的SP、MTL水平明显高于重度组，VIP、SS水平明显低于重度组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表4。

3 讨论

儿童功能性便秘是儿科门诊较常见的一种胃肠道疾病，于经济加速发展、生活方式不断变化的趋势下，该疾病的出现与缺乏运动、饮食结构不合理、遗传因素、精神因素等密切相关，造成患儿的胃肠道功能不正常、肠道菌群紊乱[8]。儿童功能性便秘的发生率呈持续上升趋势，发病的平均年龄为2岁，其中近25%的病患于成人阶段会发生其他消化系统疾病[9-10]。儿童功能性便秘的发病机制、病因十分复杂，患儿于临床上的表现具有多样性，如排便不尽、排便持续性较差等，极易影响患儿的生活质量[11]。如果患儿长时间服用泻药，则有可能引起药物依赖、电解质紊乱及大便失禁等状况[12]。2A8C9683-8A9E-46B4-8DE6-41F3EACD5843

相關文献显示，选择实时荧光定量PCR对功能性便秘患儿粪便标本内的乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌的数量进行检测，结果显示其乳杆菌、双歧杆菌数量明显少于正常儿童，肠球菌、肠杆菌的数量明显多于正儿童[13-15]。本研究结果显示功能性便秘患儿的乳杆菌、双歧杆菌数量明显少于健康体检儿童，大肠埃希菌数量明显多于健康体检儿童，同时重度功能性便秘患儿的乳杆菌、双歧杆菌数量与轻中度患儿相比，数量明显减少，大肠埃希菌数量明显增多，说明功能性便秘患儿会出现肠道菌群失调，呈现出益生菌乳杆菌、双歧杆菌数量减少，致病菌大肠埃希菌数量增多，同时随着疾病的不断发展，患儿肠道菌群失调的程度愈加明显。

MTL从空肠与十二指肠黏膜中的M细胞中产生，其生理作用主要是引起消化过程中的移形复合运动，进而对胆管与胃肠道的运动实施刺激，使食管下括约肌的张力提高，促进胃排空并使小肠转运时间缩短，血液循环内MTL的水平同胃肠道收缩有关[16-17]。本研究显示功能性便秘患儿的MTL水平明显低于健康体检儿童，此结果的原因可能是消化道平滑肌的张力降低、蠕动减弱，从而延长传输时间，最终引发便秘。SP为速激肽家族中的一员，由胃肠中的分泌细胞与神经细胞生产并分泌，其生理作用主要是加速括约肌与平滑肌的收缩，参与痛觉反射刺激使胆囊受到刺激并收缩[18]。SS属于脑肠肽类激素之一，由胃肠黏膜D细胞产生，其生理作用主要是通过抑制内外分泌功能，从而抑制胆囊的收缩与胃肠道的蠕动，进而减少肠道营养成分、水电解质的吸收[19]。VIP主要于消化道细胞DI内分布，属于非肾上腺素之一，其生理作用主要是通过对胃肠道的括约肌与平滑肌进行抑制，进而对胆囊收缩及胃蠕动实施抑制，也可以促进肠液分泌，使胰腺受到刺激而分泌碳酸氢盐[20]。本研究的结果显示，功能性便秘患儿的SP、MTL水平明显低于健康体检儿童，VIP、SS水平明显高于健康体检儿童，同时重度功能性便秘患儿的SP、MTL水平同轻中度患儿比较明显高，VIP、SS水平明显低，说明功能性便秘患儿会引发胃肠激素分泌不正常，随着疾病的不断发展，患儿胃肠激素分泌不正常的程度更加明显。

综上所述，儿童功能性便秘会造成肠道菌群失调及胃肠激素分泌不正常，同时病情越严重，肠道菌群失调及胃肠激素分泌不正常越明显。

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（收稿日期：2021-05-18）2A8C9683-8A9E-46B4-8DE6-41F3EACD5843