SEMA3B-AS1在食管鳞状细胞癌中的诊断价值*

毛逸琪，刘 硕，李晓宁，宁云云，史露宾，李世宝，2△

1.徐州医科大学医学技术学院，江苏徐州 221000；2.徐州医科大学附属医院检验科，江苏徐州 221000

我国是食管癌高发国家，食管鳞状细胞癌病例占比达90%以上[1-2]。食管癌常见病理类型为食管腺癌和食管鳞状细胞癌。食管鳞状细胞癌患者的总体5年生存率在15%～25%，但早期诊断其5年生存率为90%以上[3-4]。癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199) 等可作为食管癌的诊断和预后标志物，但其灵敏度和特异度较低[5]，而内窥镜具有侵袭性等特点限制了其作为食管癌早期筛查的工具[6]。因此，临床需求一种灵敏且易获得的诊断标志物。长链非编码RNA(lncRNA)是一类非编码RNA，长度大于200个核苷酸，不具有保守的阅读框，因此没有编码蛋白质的能力[7]。有研究证明，lncRNA参与调控多种生物过程，包括增殖、分化、发育、代谢改变和信号转导等[8-9]。lncRNA与许多恶性肿瘤有密切关系[10-12]，SEMA3B-AS1作为一种lncRNA，被证实在多种癌症中异常表达，包括贲门癌、肝细胞癌及食管癌等，且在食管癌组织与细胞中低表达[13-15]。本研究旨在通过分析食管鳞状细胞癌与食管良性疾病中血清SEMA3B-AS1表达水平的差异，评估血清SEMA3B-AS1在食管鳞状细胞癌的鉴别诊断价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2018年9月至2019年6月徐州医科大学附属医院入院确诊的42例食管鳞状细胞癌和31例食管良性疾病患者的血清标本。其中食管鳞状细胞癌患者42例，男34例，女8例，年龄50～79岁，平均(66.5±7.1)岁。纳入标准：(1)经组织病理活检证实为食管鳞状细胞癌；(2)纳入本研究前未经手术、放疗、化疗等任何治疗方式；(3)临床病理资料完整。排除标准：(1)合并其他肿瘤；(2)患有严重心、肺、肾、神经系统等疾病；(3)患有严重精神疾病。食管良性疾病患者包括食管良性肿瘤、食管炎、食管溃疡患者共31例，男22例，女9例，年龄49～65岁，平均(58.2±6.9)岁，食管良性疾病患者纳入本研究前未经任何治疗。本研究中所有患者均知情同意并签署知情同意书，且本研究获得徐州医科大学附属医院医学伦理委员会批准。

1.2方法 RNA提取与实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)。将置于-80 ℃冰箱的血清标本溶解，移取200 μL血清标本于无核酶小心离心管中，采用Trizol Universal总RAN提取试剂按说明书步骤提取血清总RNA，测量吸光度。使用反转录试剂盒将2 μL总RNA反转录成cDNA，实验条件为：42 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s。得到的cDNA标本放置于-20 ℃冰箱备用。使用ABI7500PCR仪进行qPCR检测，反应体系：2 μL cDNA标本为模板，20 μL总反应体系。反应条件：95 ℃孵育10 min，95 ℃ 15 s，59 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共50个循环。该反应以β-actin为内参基因，每个标本设立3个复孔。结果以循环阈值(Ct值)表示，SEMA3B-AS1的相对表达水平以2-ΔΔCt表示。SEMA3B-AS1的上游引物：5′-AAACCCAGAGCCGAAAACTGA-3′；SEMA3B-AS1的下游引物：5′-CTCAAGCCCTGGTATATTCACT-3′。β-actin的上游引物：5′-TCCTCTCCCAAGTCCACACA-3′；β-actin的下游引物：5′- GCACGAAGGCTCATCATTCA-3′。

1.3统计学处理 采用SPSS25.0统计软件进行数据分析。不呈正态分布的计量资料以M(P25,P75)表示，组间比较采用独立样本的非参数检验(Mann-WhitneyU秩和检验)。计数资料以例数和百分率表示，组间比较采用χ2检验。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SEMA3B-AS1鉴别诊断食管鳞状细胞癌与食管良性疾病的临床价值，并计算曲线下面积、95%置信区间(CI)，取ROC曲线上的最大正确指数(灵敏度+特异度-1)为最佳临界值，得到相应灵敏度与特异度。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1食管鳞状细胞癌及食管良性疾病患者血清SEMA3B-AS1相对表达水平比较 食管鳞状细胞癌患者血清SEMA3B-AS1相对表达水平为12.09(5.91,35.84)，明显高于食管良性疾病患者血清SEMA3B-AS1相对表达水平[1.20(0.51,1.69)]，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2血清SEMA3B-AS1鉴别食管鳞状细胞癌与食管良性疾病的效能 ROC曲线结果表示，血清SEMA3B-AS1可作为鉴别食管鳞状细胞癌与食管良性疾病的良好指标。血清SEMA3B-AS1鉴别食管鳞状细胞癌和食管良性疾病的曲线下面积为0.899(95%CI0.832～0.967，P<0.001)，灵敏度为76.47%，特异度为93.55%，见图1。

图1 血清SEMA3B-AS1相对表达水平鉴别食管鳞状细胞癌与食管良性疾病的ROC曲线

2.3食管鳞状细胞癌患者血清SEMA3B-AS1相对表达水平与临床病理参数的关系 以血清SEMA3B-AS1相对表达水平的中位数(12.09)为分界，将食管鳞状细胞癌患者分为高表达组(SEMA3B-AS1>12.09)23例和低表达组(SEMA3B-AS1≤12.09)19例。高表达组与低表达组肿瘤最大径、淋巴结转移情况比较，差异有统计学意义(P<0.05)。高表达组与低表达组年龄、性别、TNM分期、神经侵犯、分化程度情况比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 食管鳞状细胞癌血清SEMA3B-AS1相对表达水平与临床病理参数的关系[n(%)]

续表1 食管鳞状细胞癌血清SEMA3B-AS1相对表达水平与临床病理参数的关系[n(%)]

3 讨 论

lncRNA是近些年用于肿瘤早期诊断的新型标志物。有研究证明，lncRNA通过多种机制参与基因调控，包括潜在干扰DNA甲基化网络、与miRNA的相互作用等[16]。有研究报道，lncRNA与肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移、凋亡等生理活动密切相关[17-19]。

SEMA3B-AS1已被证实在多种生物学活动中起作用。ZHANG等[20]研究发现,SEMA3B-AS1可明显抑制人间充质干细胞的增殖，同时减少成骨细胞分化，从而显著改变成骨过程。ZHONG等[14]研究证实，SEMA3B-AS1表达水平在肝细胞癌组织中相较于非癌组织明显下调；此外，miR-718可能介导lncRNA SEMA3B-AS1与PTEN之间的间接相互作用，提示了SEMA3B-AS1可能参与肝细胞癌的进程。GUO等[13]报道显示，SEMA3B-AS1及SEMA3B、miR-6872-5p共同抑制贲门腺癌，表明3者可以充当肿瘤抑制因子，并可以作为抗肿瘤治疗的潜在靶点。LI等[21]获得了由SEMA3B-AS1及另外11种乳腺癌相关lncRNA组成的预后风险模型，且此模型被进一步验证为乳腺癌患者的一种新的独立预后因素。

目前有关食管鳞状细胞癌SEMA3B-AS1表达水平与其临床价值的报道较少。DONG等[15]研究发现，SEMA3B-AS1在食管癌细胞和食管鳞状细胞癌组织中表达水平降低，且其表达水平与TNM分期、淋巴结转移相关，且该研究进一步验证了超甲基化抑制SEMA3B和SEMA3B-AS1的转录，促进食管鳞状细胞癌的发展。本研究结果显示，食管鳞状细胞癌患者血清SEMA3B-AS1相对表达水平高于食管良性疾病患者，且与其肿瘤最大径、淋巴结转移密切相关。本研究结果显示，血清SEMA3B-AS1鉴别食管鳞状细胞癌和食管良性疾病的曲线下面积为0.899(95%CI0.832～0.967，P<0.001)，灵敏度为76.47%，特异度为93.55%。这些结果提示SEMA3B-AS1是一项潜在的鉴别食管鳞状细胞癌与食管良性疾病患者的标志物。血清SEMA3B-AS1对食管鳞状细胞癌的鉴别诊断具有较高的临床价值。