柳茶提取物对大鼠血压影响的研究

赵小芳，徐明丽 ，冯翠娟 ，段博文 ，李 运

（1.甘肃卫生职业学院，甘肃 兰州 730000；2.甘肃省人民医院，甘肃 兰州 730000；3.兰州市食品药品检验检测研究院，甘肃 兰州 730000）

柳茶为蔷薇科鲜卑花属植物鲜卑花和窄叶鲜卑花的叶及嫩枝，甘肃省有丰富的野生资源，主要产于甘南藏族自治州，生长在海拔3 000～3 600 m的草地或灌木丛中[1]。药理研究表明，柳茶具有调节脂代谢、提高机体免疫力、抗氧化、抗肿瘤、保护肝损伤[2-4]等作用。为进一步摸清柳茶的其他药理作用，合理开发利用我省的药材资源，课题组开展了柳茶在调节血糖、抗疲劳、抗缺氧、对血压的影响等方面的实验研究，本项目主要承担柳茶提取物对血压影响的实验研究。

肥胖是血压升高的危险因素，控制体重有助于降低血压[5]。另外，大量流行病学研究显示，高脂血症是高血压的可调性间接危险因素之一，调节血脂有利于控制血压[6]。鉴于柳茶有降低血脂、减肥的功效，课题组根据以往研究推测：柳茶是否也能降压？如果有降压作用，那么是由于降血脂而导致的间接作用还是有直接降压作用？降压作用是否显著？高密度脂蛋白（HDL）能刺激动脉内膜细胞前列环素的形成，降低内皮损伤导致的血管收缩反应。而柳茶提取物可明显降低大鼠血中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）含量，增加 HDL含量[7]，说明其可以增强HDL对动脉内膜的保护作用。以上研究为本课题的推测提供了理论依据。

1 实验对象与方法

1.1 实验材料

柳茶采自甘肃省甘南藏族自治州，经兰州大学药学院杨永建教授鉴定为蔷薇科鲜卑花属植物窄叶鲜卑花的叶。罗布麻购于兰州惠仁堂药店，由兰州旭康药业有限公司生产（批号20181023），经杨永建教授鉴定为夹竹桃科罗布麻属植物罗布麻的叶。实验动物为 Wistar大鼠，雄性，6 周龄，体重（200±10）g，由兰州大学医学实验动物中心提供。

1.2 实验方法

1.2.1 制备供试品 柳茶浸膏的制法：称取窄叶鲜卑花叶300 g，粉碎后用95%乙醇1 600 W超声提取3次，每次20 min。用旋转蒸发仪浓缩乙醇提取液，得102 g浸膏备用。按参考文献给药[8]。罗布麻浸膏的制法：称取罗布麻300 g，粉碎后用60%乙醇回流2 h。用旋转蒸发仪浓缩乙醇提取液，得80.7 g浸膏备用。按临床等效剂量给药。

1.2.2 实验动物分组 雄性Wistar大鼠30只，购入后饲养观察3天，随机分为5组，每组6只，分别编号（见表1）。

表1 实验动物分组及处理方法

1.2.3 高血压大鼠模型的建立 用动物无创测压仪连续测定血压3天后，对B、C、D、E组大鼠每日皮下注射丙酸睾丸素2 mg/100 g[9]，同时给予5%盐水，常规饲料喂养，14天后，测得大鼠血压明显升高（与造模前比较，收缩压P<0.001，舒张压P<0.01），此时进行实验治疗。

丙酸睾丸素溶液的配制方法：将花生油于165℃干热空气灭菌2 h，作为溶剂。将460 mg丙酸睾丸素加入34.5 mL灭菌花生油中，超声振荡40 min，完全溶解。每只大鼠的给药量为2 mg/100 g ，即 0.15 mL/100 g。

1.2.4 实验性治疗方法 治疗开始后，大鼠给药量为2 g生药/200 g·d，给药方法为灌胃。连续14天，每7天测一次血压。空白对照组和模型对照组给蒸馏水。

柳茶治疗组给药量：每只大鼠给药量为2 g生药/200 g·d，即0.68 g浸膏。将浸膏配成0.34 g/mL的水溶液，则每只大鼠的给药量是 2 mL/200 g·d。

罗布麻治疗组给药量：每只大鼠给药量为2 g生药/200 g·d，即0.538 g浸膏。将浸膏配成0.269 g/mL的水溶液，则每只大鼠的给药量是2 mL/200 g·d。

复方治疗组给药量：柳茶和罗布麻按1︰1的比例混合，每只大鼠给予柳茶1 g/200 g·d、罗布麻1 g/200 g·d，即将配好的柳茶水溶液和罗布麻水溶液各1 mL/200 g·d混合后给予。

1.3 检测指标

1.3.1 血压 用多通道动物无创测压仪测大鼠的尾动脉压，比较治疗后大鼠血压的变化。

1.3.2 血清中生化指标NO、NOS 治疗结束后，将大鼠4.5 mL/kg腹腔注射10%水合氯醛，待进入麻醉状态后，心脏采血，离心 10 min（3 000转/min），分出血清，于-20 ℃保存。

用试剂盒法测定血清中NO含量和NOS活力，操作步骤按试剂盒说明书进行。

1.4 统计学处理

大鼠的血压、NO含量和NOS活力采用SPSS 16.0软件进行统计分析，计量资料采用（±s）表示，组间比较采用t检验。

2 结果

2.1 治疗结束后各组大鼠的血压

各组大鼠血压变化显示：造模成功后至治疗结束，模型对照组大鼠的血压维持在较高水平；柳茶治疗组大鼠的血压明显下降（P<0.001），说明柳茶对实验性高血压大鼠具有降压作用，且与罗布麻疗效相当。

复方治疗组大鼠血压下降显著（P<0.001），但与单方比较，疗效并无差异，初步提示治疗高血压时，柳茶与罗布麻还是单用为好（见表2）。

表2 柳茶对实验性高血压大鼠血压的影响（±s，mmHg）

表2 柳茶对实验性高血压大鼠血压的影响（±s，mmHg）

注：与空白对照组比较，***P<0.001，**P<0.01；与模型对照组比较，▲▲▲P<0.001

组别治疗结束后的血压SBP DBP空白对照组（2 mL/200 g·d）模型对照组（2 mL/200 g·d）柳茶治疗组（2 mL/200 g·d）罗布麻治疗组（2 mL/200 g·d）复方治疗组（2 mL/200 g·d）110.67±8.17 133.32±5.912***113.57±5.66▲▲▲116.27±8.83▲▲▲111.95±9.06▲▲▲85.0172±10.70 99.43±4.29**89.33±3.12▲▲▲89.20±1.99▲▲▲88.37±2.94▲▲▲

2.2 NO试剂盒测试结果

紫外分光光度计用蒸馏水调零，于550 nm处，0.5 cm光径，测各管吸光度，计算各样品中NO含量，见表3。

表3 柳茶对高血压大鼠血清中NO含量的影响（±s，μ mol/L）

表3 柳茶对高血压大鼠血清中NO含量的影响（±s，μ mol/L）

注：大鼠血清中的 NO含量参考值为（38.0±23.4）μmol/L。与空白对照组比较，**P<0.01；与模型对照组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01，▲▲▲P<0.001；与复方治疗组比较，★★P<0.01，★P<0.05

组别NO含量空白对照组（2 mL/200 g·d）模型对照组（2 mL/200 g·d）柳茶治疗组（2 mL/200 g·d）罗布麻治疗组（2 mL/200 g·d）复方治疗组（2 mL/200 g·d）48.15±12.15 33.70±11.94**45.74±11.01▲★★56.11±9.05▲▲★65.18±19.19▲▲▲

2.3 NOS试剂盒测试结果

紫外分光光度计用蒸馏水调零，于530 nm处，1 cm光径，测各管吸光度，每毫升血清每分钟生成1 nmol NO为一个酶活力单位。

计算TNOS（总一氧化氮合酶）空白管吸光度为0.083，iNOS（诱导型一氧化氮合酶）空白管吸光度为0.046。各组大鼠血清中TNOS活力和iNOS活力见表4。

表4 各组大鼠血清中TNOS活力和iNOS活力（±s，U/mL）

表4 各组大鼠血清中TNOS活力和iNOS活力（±s，U/mL）

注：与模型对照组比较，▲P<0.05

组别TNOS iNOS空白对照组（2 mL/d）模型对照组（2 mL/d）柳茶治疗组（2 mL/d）罗布麻治疗组（2 mL/d）复方治疗组（2 mL/d）22.205±1.454 28.640±4.476 29.652±2.294 30.713±4.303 29.328±1.689 8.843±1.737▲12.822±3.664▲16.798±2.449▲15.427±3.894▲17.064±2.639▲

3 讨论

3.1 柳茶提取物对高血压大鼠有降压作用

通过实验观察，发现柳茶提取物对实验性高血压大鼠的血压有显著降低作用（P<0.001），疗效与罗布麻相当。

与罗布麻合用后，与单方相比，降压效果并无增强，提示治疗高血压时，柳茶与罗布麻还是单用为好。

3.2 柳茶提取物能改善高血压大鼠的生化指标

柳茶提取物能升高高血压大鼠血清中扩血管物质NO的含量，并提高iNOS活力（P<0.05），使其催化NO合成的能力增强，说明对动脉内皮有保护作用。

3.3 展望

本实验研究证明柳茶提取物对高血压大鼠有降压作用，并对考察的生化指标（NO、NOS）有所改善。在今后的研究中，将观察柳茶治疗高血压的长期疗效以及内皮素（ET）、硫化氢（H2S）等与高血压有关的其他生化指标的变化，论证将其进一步开发为有降压功效的保健茶饮，作为高血压治疗的辅助产品的可行性。