人激肽释放酶10、DJ-1、糖类抗原125、人附睾蛋白4在卵巢癌患者血清中的表达及其临床意义

李娜，薛惠英，裴慧慧

安阳市人民医院妇产科，河南 安阳 455000

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，早期 临床症状不明显，大多数患者确诊时已处于晚期，5年生存率低于30%[1]。因此，早期诊断和早期治疗对改善卵巢癌患者预后和延长患者的生存期具有积极意义。寻找有效的血清标志物对卵巢癌进行早期诊断是目前临床研究的重点。糖类抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）是诊断卵巢癌最常用的指标，但仅将CA125作为初始筛选指标可能会引起漏诊和误诊[2]。人附睾蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）是近年来新发现的卵巢癌标志物，其灵敏度和特异度均优于CA125[3]。人激肽释放酶10（human kallikrein 10，HK10）属于丝氨酸蛋白酶家族，基因芯片技术发现HK10在卵巢癌中异常表达[4]。DJ-1是在上皮性卵巢癌中特异表达的蛋白质，被认为是诊断卵巢癌的潜在标志物[5]。但目前关于HK10、DJ-1与卵巢癌的关系仍缺乏足够的证据。本研究探讨了HK10、DJ-1、CA125、HE4在卵巢癌患者血清中的表达及其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月至2020年4月于安阳市人民医院接受治疗的卵巢癌患者。纳入标准：①经病理学检查确诊为卵巢癌；②初治患者；③未进行过放化疗等治疗。排除标准：①合并其他系统恶性肿瘤；②合并肝肾功能障碍、自身免疫性疾病、凝血功能障碍等疾病；③妊娠期或哺乳期女性。依据纳入和排除标准，本研究共纳入86例卵巢癌患者，年龄31～71岁，平均（55.40±7.20）岁；国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期：Ⅰ～Ⅱ期55例，Ⅲ～Ⅳ期31例；肿瘤直径2～8 cm，平均（5.01±1.00）cm；病理类型：浆液性腺癌38例，黏液性腺癌32例，内膜样腺癌16例；分化程度：中高分化50例，低分化36例。另选取同期收治的卵巢良性病变患者50例，年龄30～68岁，平均（53.21±8.04）岁；病理类型：卵巢肌瘤31例，卵巢囊肿19例。卵巢癌和卵巢良性病变患者的年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者均知情并签署知情同意书。

1.2 检测方法

抽取患者的空腹肘静脉血5 ml，3000 r/min离心5 min，离心半径为9 cm，-80℃冰箱保存待测。采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清 HK10、DJ-1、HE4水平。HK10试剂盒购自北京方程嘉鸿科技有限公司，DJ-1试剂盒购自武汉博士康生物工程有限公司，HE4试剂盒购自瑞典康乃格诊断公司。采用化学发光法检测血清CA125水平，试剂盒由北京生物制品研究所提供。严格按照试剂盒说明书进行整个操作过程。用于检测的酶标仪购自美国Thermo Fisher Scientific公司。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验；采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析血清HK10、DJ-1、CA125、HE4单独及联合检测对卵巢癌的诊断价值，采用Pearson相关分析法进行相关性分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢癌和卵巢良性病变患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的比较

卵巢癌患者的血清 HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均明显高于卵巢良性病变患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 卵巢癌和卵巢良性病变患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的比较

2.2 不同临床特征卵巢癌患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的比较

不同年龄、肿瘤直径、病理类型卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。不同分化程度卵巢癌患者的血清CA125、HE4水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均明显高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期的卵巢癌患者，差异均有统计学意义（t=5.155、6.165、3.879、2.827，P＜0.01）；低分化卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1水平均明显高于中高分化卵巢癌患者，差异均有统计学意义（t=7.077、5.710，P＜0.01）。（表2）

表2 不同临床特征卵巢癌患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的比较（n=86）

2.3 卵巢癌患者血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平的相关性分析

对卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平进行相关性分析，结果显示，HK10和DJ-1水平呈正相关（r=0.648，P＜0.05），余未见相关性。

2.4 血清HK10、DJ-1、CA125、HE4单独及联合检测对卵巢癌的诊断价值

血清HK10、DJ-1、CA125、HE4单独检测诊断卵巢癌的ROC曲线下面积分别为0.857、0.873、0.852、0.794，P＜0.05，截断值分别为 1.00 mg/L、10.50 μg/L、195.60 IU/L、130.50 pmol/L，灵敏度分别为74.00%、76.00%、74.50%、71.20%，特异度分别为70.00%、74.00%、69.50%、65.50%。联合检测诊断卵巢癌的ROC曲线下面积为0.930，灵敏度和特异度分别为79.50%和76.00%。（图1）

图1 血清HK10、DJ-1、CA125、HE4单独及联合检测诊断卵巢癌的ROC曲线

3 讨论

卵巢癌发病初期无明显临床症状，卵巢的胚胎发育和内分泌功能较为复杂，大多数卵巢癌确诊时已处于晚期，患者的病死率很高，因此提高卵巢癌的早期诊断率并采取及时有效的临床干预和治疗对提高患者的生存率具有重要意义[6]。目前卵巢癌的诊断方法主要包括妇科检查、肿瘤标志物检测、影像学检查、细胞学和组织学检查等，但这些检查或检测具有局限性[7]。临床中常通过检测卵巢癌标志物提高诊断和治疗效果，改善患者预后。CA125是胚胎上皮细胞分泌的一种高分子糖蛋白，在正常情况下其血清含量较低，当卵巢中发生恶性病变时，CA125水平会显著增加，可用于上皮性卵巢癌的诊断[8]。CA125与卵巢癌细胞的产生和转移密切相关，对晚期卵巢癌更加敏感，但卵巢良性病变（如子宫内膜异位症）、乳腺癌、肺癌和其他病理变化也可能使CA125水平异常升高[9]，在单独使用其诊断卵巢癌时特异度差且准确度低，需要联合其他较为灵敏和特异的标志物进行卵巢癌的早期诊断。

HE4是一种新的潜在肿瘤标志物，其在正常女性的生殖道、乳腺、呼吸道、肾远曲小管、结肠和唾液腺中均表达，在正常卵巢组织中不表达，当卵巢组织发生癌变时，血清HE4水平异常升高[9]。研究发现，与CA125相比，HE4诊断卵巢癌的特异度较高，但灵敏度较低[10]。HK10是由KLK10基因编码的相对分子量为30 kD的分泌型丝氨酸蛋白酶，包含276个氨基酸。HK10可调节细胞表面受体介导的细胞生长和凋亡。在正常细胞的生长过程中，HK10主要在母乳和脑脊液等生物液体中表达，但在心脏、胸腺、骨骼肌、肝脏和肾脏等部位低表达或不表达[11-12]。研究表明，HK10的异常表达与乳腺癌和其他内分泌恶性肿瘤的发生和发展有关，并且与恶性肿瘤细胞的脱落、迁移和侵袭密切相关，其主要机制可能与雌激素受体和孕激素受体有关[13]。DJ-1基因位于1p36染色体上，长度为24 kb。DJ-1蛋白单体在人的肾脏、胰腺、肝脏、肌肉组织和其他组织中广泛表达，其二聚体形式在细胞转录、相互转化和氧化应激等生理活动中具有重要作用[14-15]。

本研究结果显示，卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均明显高于卵巢良性病变患者（P＜0.01）。提示卵巢癌和卵巢良性病变患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平存在差异，上述指标可能参与了卵巢癌的发生发展过程，与有关研究结果一致[16-18]。目前有关血清标志物与卵巢癌患者临床特征关系的研究较少。本研究分析了血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平与卵巢癌患者临床特征的关系，结果发现，FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125和HE4水平均明显高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期的卵巢癌患者，低分化卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1水平均明显高于中高分化卵巢癌患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。提示HK10、DJ-1、CA125、HE4均参与了卵巢癌的发生发展。HK10、DJ-1、CA125、HE4水平越高，患者的预后越差。因此及早对患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平进行监测有助于临床评估卵巢癌的严重程度。本研究对卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平进行相关性分析，结果显示，HK10和DJ-1水平呈正相关。表明这两种标志物可能通过表达上调发挥协同作用，并参与卵巢癌的发生和发展。推测可能通过信号通路的交叉点，HK10和DJ-1共同促进肿瘤细胞的侵袭和转移。目前临床对早期卵巢癌诊断的研究主要集中于寻找灵敏度和准确度较高的血清标志物，常用的血清标志物CA125、HE4不能令人满意[19-20]。因此本研究通过联合检测多种血清标志物以提高阳性检出率和灵敏度。本研究进一步评估血清 HK10、DJ-1、CA125、HE4单独及联合检测对卵巢癌的诊断价值，结果显示，4种指标联合诊断时灵敏度和准确度均明显提高，提示早期的联合检测可以最大程度地降低漏诊率和误诊率，提高卵巢癌早期诊断的准确性。然而本研究病例数较少，以后将加大样本量，并分析上述血清标志物与卵巢癌患者预后的关系。

综上所述，卵巢癌患者的血清HK10、DJ-1、CA125、HE4水平均较高，并与患者的临床特征有关。