Yes 相关转录调节因子1、程序性死亡受体1在上皮性卵巢癌中的表达及其与肿瘤侵袭程度的相关性分析

白小英，赵瑾，闫飞艳，陈琳

西安医学院第二附属医院妇科，西安 710038

上皮性卵巢癌是临床妇科常见疾病之一，近年来，发病率呈上升趋势，且逐渐年轻化，严重威胁女性健康与生命安全[1]。上皮性卵巢癌早期多无特异性临床症状，多数患者就诊时已是晚期，治疗效果不甚理想。相关报道指出，卵巢癌患者5年生存率不足30%[2]。故寻找有助于卵巢癌早期筛查特异性生物分子标志物及新治疗靶点对患者尤其重要，是改善其预后的关键。Yes相关转录调节因子1（Yes associated transcriptional regulator 1，YAP1）是HIPPO信号通路家族重要成员之一，可通过激活HIPPO信号通路提高卵巢上皮细胞的转录活性[3]。程序性死亡受体1（programmed cell death 1，PDCD1，也称PD-1）是CD28家族成员之一。相关报道发现，PD-1与疾病预后密切相关[4]。但目前有关YAP1、PD-1在上皮性卵巢癌中的表达及其与肿瘤侵袭程度的相关性报道较少见。故本研究通过检测上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1的表达，探讨上述因子表达与肿瘤侵袭程度的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018年9月至2020年12月西安医学院第二附属医院收治的上皮性卵巢癌患者的病历资料。纳入标准：①符合上皮性卵巢癌相关诊断标准[5]；②具有完整的临床资料；③依从性良好，无中途退出；④无其他恶性疾病。排除标准：①术前进行放疗、化疗等治疗；②合并意识障碍、交流障碍或心理障碍；③合并先天性心脏疾病；④心、脑、肝、肾等脏器功能严重不全。根据纳入、排除标准，共纳入106例上皮性卵巢癌患者，年龄34～61岁，平均（48.16±6.85）岁；国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期73例；淋巴结转移39例；分化程度：G1级 61例，G2～3级 45例；浸润深度：T1～2期 32 例，T3～4期 74 例。另选取接受手术治疗的62例生殖系统良性疾病患者作为对照组，年龄33～62岁，平均（47.69±5.47）岁。两组患者年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。取上皮性卵巢癌患者的上皮性卵巢癌组织及对照组患者的正常卵巢组织。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 检测方法

兔抗人YAP1、PD-1多克隆抗体均购自英国Abcam公司；SP免疫组化试剂盒、二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。标本均在手术后立即采集，用10%甲醛溶液固定后，常规脱水石蜡包埋。根据SP免疫组化染色法对YAP1、PD-1蛋白进行检测，检测过程严格按照说明书进行。一抗阴性对照使用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）代替。

结果判断：YAP1阳性染色定位于细胞核或细胞质，PD-1阳性染色定位于细胞质或细胞膜。每张切片取5个高倍视野，根据染色程度和阳性细胞百分比进行评分。染色程度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分；阳性细胞百分比：无阳性细胞为0分，阳性细胞＜10%为1分，10%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。两项分数相乘，总分＜3分为阴性，≥3分为阳性。

1.3 观察指标

①比较上皮性卵巢癌组织及正常卵巢组织中YAP1、PD-1表达情况。②分析不同临床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达情况。③分析上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达的相关性及与肿瘤侵袭程度的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数及率（%）表示，组间比较采用χ2检验；相关性分析采用Pearson相关分析法；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 YAP1、PD-1表达情况的比较

上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1阳性表达率均明显高于正常卵巢组织，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表1）

表1 上皮性卵巢癌组织与正常卵巢组织中YAP1、PD-1表达情况的比较[n（%）]

2.2 不同临床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达情况的比较

FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为G1级、有淋巴结转移、浸润深度为T3～4期上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YAP1阳性表达率分别明显高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为G2～3级、无淋巴结转移、浸润深度为T1～2期患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）；FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、浆液性肿瘤、浸润深度为T3～4期上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中PD-1阳性表达率分别明显高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、非浆液性肿瘤、浸润深度为T1～2期患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表2）

表2 不同临床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达情况的比较（n=106）

2.3 上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达相关性及与肿瘤侵袭程度的相关性

上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达无相关性（r=1.175，P＞0.05）；但YAP1、PD-1与肿瘤侵袭程度均呈正相关（r=0.657、0.671，P＜0.05）。

3 讨论

上皮性卵巢癌主要由上皮细胞异常病变或癌基因突变引发[6]。有关其发病机制尚未明确，认为可能与遗传、环境等因素有关。上皮性卵巢癌患者整体预后较差，经治疗后，仍有部分患者预后无明显改善，尤其是晚期患者。故及时诊治对患者尤其重要。

YAP1是HIPPO信号通路中较为关键的调节蛋白，当HIPPO被激活后，YAP1会发生磷酸化，主要聚集在细胞质中[7-8]。当HIPPO信号通路失活后，YAP1会转移至细胞核中，促进双调蛋白、结缔组织生长因子等生长相关基因的表达[9]。陈晗等[10]研究发现，YAP1具有调节器官大小、维持细胞增殖与凋亡动态平衡等作用。本研究中，上皮性卵巢癌组织中YAP1阳性表达率明显高于正常卵巢组织，且与分化程度、临床分期、淋巴结转移及肿瘤浸润程度有关，提示YAP1可能与上皮性卵巢癌发生发展有关，分析其原因可能是因为HIPPO信号通路失活，导致YAP1转移至细胞核，进而促进靶基因表达、肿瘤细胞增殖与转移[11]。

PD-1属于一种免疫抑制分子，其配体有程序性死亡受体配体1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也称PD-L1）、PD-L2，最初是由凋亡小鼠T细胞杂交瘤克隆而来，与细胞凋亡密切相关。PD-1信号通过多种机制抑制T细胞免疫[12]。Dwivedi等[13]发现，阻断PD-1/PD-L1后可增加效应T细胞活性来增强肿瘤抑制。病理状态下，肿瘤微环境可诱导PD-1表达增高，其配体通过与PD-1结合，使PD-1通路在肿瘤微环境中持续激活，抑制T细胞活化，诱导T细胞凋亡。在乳腺癌、肾癌等多种恶性肿瘤中PD-1的高表达介导了肿瘤的免疫逃逸及患者不良预后[14]。本研究结果显示，上皮性卵巢癌组织中PD-1阳性表达率明显高于正常卵巢组织，且其阳性表达率与上皮性卵巢癌患者临床分期、肿瘤组织类型及浸润程度有关，说明PD-1在上皮性卵巢癌进展中具有重要作用，可作为诊断卵巢癌的有效指标之一。进一步分析上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达相关性发现，两者在上皮性卵巢癌组织中的表达无相关性，但由于本研究样本量偏少，后续需进一步扩大研究证实。而分析YAP1、PD-1表达与肿瘤侵袭程度的相关性发现，YAP1、PD-1与肿瘤侵袭程度呈正相关。推测其原因可能是由于YAP1表达增高可促进HIPPO信号通路激活，PD-1高表达抑制肿瘤浸润淋巴细胞的增殖与活化并诱导效应T细胞凋亡，进而加剧肿瘤细胞增殖，肿瘤浸润程度加深[15]。

综上所述，上皮性卵巢癌中YAP1、PD-1呈异常表达，且与肿瘤浸润程度有关，可能参与了肿瘤细胞发生、发展，可作为临床诊断上皮性卵巢癌的辅助诊断指标。