多发性骨髓瘤患者骨髓活检组织中IL-8、CD56的表达及临床意义

黄裕林

重庆市开州区人民医院检验科，重庆 405400

多发性骨髓瘤(MM)为恶性血液系统疾病，其临床发病机制主要与骨髓微环境、DNA甲基化、基因突变等有关[1]。近年来，随着MM新兴疗法的临床运用，该类患者的生存率得到显著提高，但该病仍难以治愈[2]。因此，寻找其早期诊断标志物意义重大。目前，临床对于MM的诊断主要依据骨髓细胞检验、血清指标检验联合影像学检查[3]。有研究显示，CD56可介导骨髓瘤细胞的黏附，其在浆细胞上呈高表达[4]。另有研究报道，白细胞介素-8(IL-8)能够促进肿瘤进展，其可诱导血管生成[5]。为进一步探讨IL-8、CD56与MM的关系，本文对67例MM患者进行了研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年1月至2021年5月本院收治的67例MM患者作为MM组。纳入标准：均为初发病例，经骨髓形态学、X线、免疫球蛋白(Ig)检查，符合《中国多发性骨髓瘤诊治指南(2015年修订)》[6]中的诊断标准。排除标准：合并自身免疫性疾病、严重感染性疾病、其他恶性肿瘤及近期接受放化疗治疗等患者。MM组中男41例，女26例；年龄46～73岁，平均(55.26±3.54)岁；Durie-Salmon(D-S)分期[7]：Ⅰ期17例，Ⅱ期38例，Ⅲ期12例。另选取同期于本院就诊的35例骨髓象检查正常的患者作为对照组，其中男18例，女17例；年龄43～75岁，平均(56.15±2.89)岁。2组性别构成、年龄差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 收集2组骨髓组织，经石蜡包埋备用，应用免疫组织化学法检测标本中IL-8、CD56的表达。具体操作步骤：(1)将骨髓切片脱蜡后水化，经温室孵育15 min后，采用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗骨髓切片3次，每次2 min，滴加一抗(兔抗人IL-8单抗、鼠抗人CD56单抗)，于37 ℃孵育2 h；(2)用吸水纸擦干切片后滴加聚合物辅助剂，于室温下孵育20 min；(3)滴加辣根酶标记的二抗(羊抗兔IgG)，于室温下孵育20 min，采用PBS冲洗骨髓切片3次，每次2 min，经二氨基联苯胺染色后清洗切片；(4)经苏木精复染、脱水、封固后，于显微镜下进行观察。

1.3评价标准[8]随机选取10个高倍视野(×400)进行观察，每个视野计数100个细胞。细胞阳性表达评分：阳性细胞占比<10%计0分，阳性细胞占比10%～25%计1分，阳性细胞占比>25%～50%计2分，阳性细胞占比>50%计3分。细胞染色强度评分：无染色计0分，呈淡黄色计1分，呈黄色或棕黄色计2分，呈棕褐色计3分。以细胞阳性表达评分与细胞染色强度评分之和为总分，总分≤1分为阴性(-)，总分2～3分为弱阳性(+)，总分4～5分为中强阳性(++)，总分≥6分为强阳性(+++)。

2 结 果

2.12组骨髓组织中IL-8、CD56表达情况比较 与对照组比较，MM组骨髓组织中IL-8和CD56的阳性表达率明显更高(P<0.05)，见表1。

表1 2组骨髓组织中IL-8、CD56表达情况[n(%)]

表2 IL-8、CD56与MM患者临床特征的关系

2.3IL-8和CD56对MM的诊断效能 根据浆细胞表面免疫表型表达情况对MM进行诊断，以1-特异度为横坐标，以灵敏度为纵坐标，绘制IL-8及CD56诊断MM的ROC曲线，结果显示，IL-8单独检测诊断MM的AUC为0.788(95%CI：0.621～0.907，P=0.027)，灵敏度为87.43%，特异度为80.15%；CD56单独检测诊断MM的AUC为0.754(95%CI：0.596～0.879，P=0.041)，灵敏度为85.03%，特异度为77.93%；IL-8和CD56联合检测诊断MM的AUC为0.836(95%CI：0.711～0.953，P=0.008)，灵敏度为91.14%，特异度为83.29%，见图1。

图1 IL-8、CD56单独及联合诊断MM的ROC曲线

3 讨 论

MM患者常伴发肾功能异常、骨骼受损、免疫功能低下等症状，目前，临床对于该病的治疗，虽可改善患者预后，但完全治愈较为困难[9]。临床资料显示，MM患者存在B、T细胞免疫缺陷，尤其是在B细胞向浆细胞分化过程中，存在细胞膜表面Ig、表面抗原大量丢失现象[10]。CD56为跨膜Ig，其在细胞的生长、迁移过程中发挥重要作用[11]。有研究报道，CD56在MM肿瘤细胞中表达水平较高，可能成为髓外病变的预测指标[12]。IL-8为炎症趋化因子，临床资料显示，IL-8表达于MM患者骨髓基质细胞中，可诱导骨髓瘤细胞趋化[13]。

本研究发现，与对照组比较，MM组骨髓组织中IL-8和CD56的阳性表达率明显更高(P<0.05)，提示IL-8和CD56在MM患者骨髓组织中呈高表达。通过分析IL-8和CD56与MM患者临床特征关系，本研究发现，不同D-S分期的MM患者骨髓组中IL-8、CD56的阳性表达率不同，Ⅱ期和Ⅲ期MM患者骨髓组织中IL-8、CD56的阳性表达率均高于Ⅰ期(P<0.05)，Ⅲ期MM患者骨髓组织中CD56的阳性表达率高于Ⅱ期(P<0.05)，提示骨髓组织中IL-8、CD56阳性表达率随MM的D-S分期增高而升高。分析其机制可能为：(1)IL-8可能通过影响骨髓瘤浆细胞增殖及骨髓环境，刺激浆细胞繁殖、迁移；(2)CD56可能在骨髓瘤细胞分化过程中脱落，致使骨髓瘤细胞与基质细胞不能黏附，骨髓瘤细胞进入血浆，致骨髓瘤细胞转移。陈思衍等[14]研究发现，MM患者骨髓组织中IL-8的阳性表达率较高，且骨髓瘤分期越高，IL-8阳性表达率越高。张彩霞等[15]研究报道，CD56在MM细胞表面呈阳性表达。孙欢等[16]研究发现，CD56的表达与MM患者临床分期有关。以上研究结果提示，IL-8和CD56对评估MM的病情变化、临床分期等具有一定参考价值。

本研究显示，IL-8和CD56联合检测诊断MM的AUC为0.836，高于IL-8、CD56单独检测诊断MM的0.788、0.754，提示IL-8和CD56联合检测诊断MM的效能更高，IL-8、CD56可作为MM的临床诊断评价指标。黄垚等[17]研究报道，CD56与MM的免疫特征、临床分期有关，其可作为评价MM Ig分型的指标。

综上所述，MM患者骨髓组织中IL-8、CD56的阳性表达率较高，且其表达与MM的D-S分期有关，IL-8和CD56联合检测可用于MM的临床诊断。