苏州地区呼吸道感染未成年住院患者常见呼吸道病毒IgM抗体检测及分析*

张 馨，李 阳，李 丹，缪美华，何 萍，花盛浩，邵雪君，闵兰芳△

1.苏州大学附属儿童医院检验科，江苏苏州 215025；2.苏州大学附属第二医院检验科，江苏苏州215004；3.苏州大学附属儿童医院儿研所，江苏苏州 215025

急性呼吸道感染是儿童最常见的感染性疾病。超过90%的急性呼吸道感染由呼吸道病毒引起[1]。呼吸道病毒感染对儿童健康有较大影响[2]，是引起儿童发病和死亡的主要原因[3]。研究发现，呼吸道病毒的流行趋势与季节、性别、年龄、气候等因素相关[4-6]，而且不同环境下的呼吸道病毒常存在一定差异，因此进行呼吸道感染病毒的流行病学调查对该地区呼吸道感染的预防和临床治疗意义重大。基于以上背景，本研究利用间接免疫荧光法对2016年3月至2021年2月在苏州大学附属儿童医院住院的临床诊断为呼吸道感染的未成年患者血清标本进行了5种常见呼吸道病毒IgM抗体的检测，包括腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒A型(IVA)、流感病毒B型(IVB)、人类副流感病毒(HPIVS)，并进行流行病学分析，旨在了解常见呼吸道病毒的感染情况及流行趋势。

1 资料与方法

1.1一般资料 根据《实用儿科学》[7]中的诊断标准，将2016年3月至2021年2月在苏州大学附属儿童医院住院的有急性呼吸道感染呼吸道症状、发热时间较长，临床诊断为呼吸道感染的未成年患者纳入研究，共42 429例。其中男性24 525例，女性17 904例，男、女比例为1.37∶1。根据我国南方季节特征，每年春季为3～5月，夏季为6～8月，秋季为9～11月，冬季为12至次年2月(将1、2月份计入前一年进行数据统计)。参考王卫平主编的《儿科学》[8]，将纳入研究的未成年患者按年龄段分组：新生儿组(0～<28 d)、婴儿组(28 d至<1岁)、幼儿组(1～<3岁)、儿童组(3～<14岁)、青少年组(14～<18岁)。纳入研究的未成年患者性别及临床科室分布情况见表1。本研究经苏州大学附属儿童医院医学伦理委员会审查通过。

表1 纳入研究的未成年患者性别及临床科室分布情况(n)

1.2仪器与试剂 5种呼吸道病毒IgM抗体检测试剂盒为比尔赛有限公司产品。荧光显微镜为德国LEICA公司产品，型号为LEICA DM 2000。

1.3方法

1.3.1标本采集 采集纳入研究患者急性期外周静脉血3 mL，注入促凝管，以4 000 r/min离心10 min，收集血清备用。

1.3.2标本检测 采用间接免疫荧光法，参照试剂盒说明书分别检测ADV、RSV、IVA、IVB、HPIVS 5种呼吸道病毒IgM抗体。(1)在干燥、洁净的EP管中加入15 μL PBS、15 μL吸附剂和15 μL血清，彻底混匀后，13 000 r/min离心10 min去除沉淀，以防干扰检测。(2)载玻片3孔中分别加入15 μL经步骤(1)处理过的血清、15 μL阳性对照、15 μL阴性对照，并于37 ℃孵育90 min后清洗两次自然晾干。(3)上述3孔每孔加入15 μL抗人IgM FITC结合物溶液，于37 ℃温育30 min，清洗并自然晾干。最后加适量封闭介质并加盖玻片，用荧光显微镜在400倍放大率下观察每孔的荧光强度。

1.3.3结果判断 阳性：观察到1%～15%细胞的细胞核、胞质或胞膜出现苹果绿色荧光(在RSV和HPIVS中能同时观察到着色的合胞体)；阴性：观察到细胞呈现红色。

1.4统计学处理 采用Microsoft Office Excel 2003、SPSS20.0、GraphPad软件对所收集的数据进行分析，计数资料用频数或百分率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.15年间5种呼吸道病毒抗体检出情况 呼吸道病毒IgM抗体检出率在不同年份之间的差异有统计学意义(χ2=602.02，P<0.05)，见表2。5种呼吸道病毒中，IVB和HPIVS的总检出率居前两位，分别为6.55%和5.35%。

2.2不同性别人群5种呼吸道病毒的检出情况 男性和女性人群比较：呼吸道病毒IgM抗体检出率差异有统计学意义(P<0.05)；IVB、HPIVS IgM抗体的检出率差异有统计学意义(P<0.05)；而ADV、RSV、IVA IgM抗体的检出差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 不同性别人群5种呼吸道病毒IgM抗体的检出情况分析[n(%)]

2.3不同季节5种呼吸道病毒的检出情况 5种呼吸道病毒IgM抗体在不同季节之间的检出率差异均有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 不同季节5种呼吸道病毒IgM抗体检出情况分析[n(%)]

2.4不同年龄段分组的5种呼吸道病毒检出情况 不同年龄段分组的5种呼吸道病毒IgM抗体检出率比较差异有统计学意义(P<0.05)。RSV在婴儿组中的检出率最高(P<0.05)。见表5。

表5 不同年龄段人群5种呼吸道病毒IgM抗体检出率分析[n(%)]

2.5不同年份、季节、年龄段分组的5种呼吸道病毒IgM抗体检出情况 综合分析不同年份、季节、不同年龄段分组中检出的5种呼吸道病毒IgM抗体的分布情况，见表6。

表6 不同年份、季节、年龄段分组中检出的5种病毒IgM抗体的分布情况[n(%)]

续表6 不同年份、季节、年龄段分组中检出的5种病毒IgM抗体的分布情况[n(%)]

3 讨 论

急性呼吸道感染主要由呼吸道病毒感染引起，不同病毒感染的临床症状相似，但治疗用药却各有不同[9]，未成年人免疫系统尚不完善、易感染，是呼吸道病毒主要侵犯对象[10]。因此对急性呼吸道感染未成年患者进行呼吸道病毒检测，对疾病的早期诊断、干预以及治疗具有重要的指导意义。呼吸道病毒IgM抗体检测具有简便、快速、成本低等优点[11]，通常在发病后一周内可在血清中被检测到，因此IgM抗体可作为急性感染期的诊断指标，适合临床快速筛查呼吸道病毒感染，指导临床早期准确用药。

本研究分析了2016年3月至2021年2月有急性呼吸道感染症状的42 429例住院未成年患者血液标本中的5种常见呼吸道病毒IgM抗体检测结果，总检出率为13.40%，结果低于国内一些文献的报道[12-13]，这可能与地域、检出病毒的种类、检测方法与时间(IgM产生的窗口期)等因素有关[6]。5种常见呼吸道病毒中，IVB和HPIVS的IgM抗体检出率位居前列，这和文献[14-15]的报道基本一致。2020年病毒抗体检出率显著降至8.69%，这可能跟全民响应国家号召，积极做好新冠疫情防护措施有关，如勤洗手、戴口罩、多通风、少接触等。本研究中，呼吸道病毒IgM抗体检出率，男性(11.92%)明显低于女性(15.42%)，这与文献[16]报道的结论相符。不同性别人群中检出率的差异可能与男女气道结构差异，激素水平及抵抗力不同有关。5种常见呼吸道病毒感染呈现一定季节性，主要集中在春冬交替季节，结果与文献[17]报道的一致。IVB主要流行于春冬季；HPIVS主要流行于夏秋季。春冬季由于气温低，室内开窗通风时间较短，学校、幼儿园等聚集场所易引起群发性病毒感染，从而导致未成年人发生急性呼吸道感染的风险显著增加。年龄偏小的新生儿组、婴儿组易感染HPIVS，而幼儿组、儿童组以及青少年组则以IVB感染为主。RSV在婴儿组中的检出率最高。不同年龄段呼吸道病毒IgM抗体检出率随着年龄的增长先增加后降低，3～14岁的儿童组最高，这与文献[18]的报道一致，这可能与儿童接触范围大且接触人群复杂，儿童机体免疫系统尚未发育完全，抵抗力低下等因素有关。本研究还发现，不同各年份、季节、年龄段分组中，均以IVB或HPIVS抗体的检出率最高。2016、2017年HPIVS较为流行，2018、2019年IVB较为流行，2020年又以HPIVS流行为主，笔者推测IVB和HPIVS两种病毒以两年为周期交替暴发流行。

综上所述，因地区、气候、检测方法、时间、研究对象等因素的不同，本研究与其他文献报道的研究结果不完全相同，但根据苏州大学附属儿童医院呼吸道病毒IgM抗体检测结果，儿童急性呼吸道感染以IVB、HPIVS感染为主，好发于春冬两季，3～14岁的女童为易感人群。故针对易感人群，积极开展预防接种、健康教育、卫生宣教等活动，加强家长及儿童防护意识非常必要。血清IgM抗体检测的结果虽与抗原检测的结果有所差异，但对儿科呼吸系统疾病的早期快速诊断具有重要价值，如将二者联合运用，可显著提高疾病检出率，为临床诊疗提供快速、准确的诊断依据。本研究也存在一定的不足：(1)未涉及呼吸道病原体其他检测方法，缺乏对呼吸道病原体检测更深入的分析；(2)呼吸道病原体的研究种类偏少，在后续的研究中将进一步扩大研究范围，更全面地探讨呼吸道病原体的分布规律以及流行趋势。