一支箭黄酮类化学成分研究*

2022-04-11曾碧涛

广州化工 2022年6期

曾碧涛

(宜宾职业技术学院，四川宜宾 644003)

一支箭为瓶尔小草科(Ophioglossaceae)瓶尔小草属蕨类植物[1]，在四川、贵州、云南、西藏等西南各省均有分布[2-3]。现在药材市场上流通的三个种为瓶尔小草(Ophioglossum vulgatum Linn.)、狭叶瓶尔小草(Ophioglossum thermale Kom.)和尖头瓶尔小草(Ophioglossum pedunculosum Desv.)。一支箭是重要的民间中草药，具有多种药用价值，主要治疗毒蛇咬伤、跌打损伤、烧伤烫伤、瘀血疼痛、肝炎等[4-7]。由于近年来过度采挖、农药使用和环境变化等因素，使其分布范围日益缩减，数量越来越稀少[8]。

黄酮类化合物作为一支箭的主要物质基础，具有重要的药理活性[9-11]，为了进一步开发该药材资源提供依据，我们对一支箭(Ophioglossum vulgatum Linn.)的黄酮类成分进行系统研究，共分离得到了5个化合物，化合物1～4首次从该植物中分离得到。其结构见图1。

图1 化合物1～5的结构图

1 仪器与材料

Thermo Scientific LTQ Orbitrap XL型高分辨质谱仪；Agilent 400 MHz 核磁共振仪(TMS为内标)；FS-9200T中压制备色谱仪，天津博纳艾杰尔科技有限公司；半制备型高效液相色谱仪，Waters公司；薄层色谱硅胶、柱色谱硅胶，青岛海洋化工厂；乙腈、甲醇(色谱纯)，其余试剂为国产分析纯。

实验所用药材一支箭2020年5月采自四川宜宾市，经西南民族大学民族药物研究所张志锋教授鉴定为一支箭Ophioglossum vulgatum Linn.，样品保存于宜宾职业技术学院(标本号：CN20201032)。

2 提取与分离

将一支箭药材1.5 kg粗粉，加10倍体积的95%乙醇。加热回流提取3次，第一次2 h，第二次2 h，第三次1.5 h，合并三次提取液，减压回收溶剂，加入2倍体积的水混匀。过滤，滤渣用50%乙醇洗涤2次，合并滤液。将滤液上经过处理活化的聚酰胺，控制流速为0.2 L·min-1，完成后水洗至流出液无色，用20%、70%和95%乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得各粗提取物，称重分别得到3 g、11 g和2 g。TLC检测发现用70%乙醇洗脱得到的粗提取物斑点最多。将70%乙醇洗脱部分(10 g)甲醇溶解后用硅胶拌样(60～80目)，硅胶湿法装柱(200～300目)进行分离。洗脱剂用二氯甲烷-甲醇 (20∶1→2∶1)，约500 mL收集一份，共收集33份。以5%三氯化铝-乙醇溶液为显色剂进行TLC检测，对相同部分进行合并后得到Fr. A～F。将Fr. B(0.3 g)进行再次硅胶柱层析，洗脱剂为二氯甲烷-甲醇(8∶1)，TLC监控，收集主要斑点部分用半制备反相色谱再次分离，以乙腈-0.1%磷酸水(35∶65)为流动相，检测波长为254 nm，得到化合物5(17 mg)；对具有明显斑点的Fr. C(0.7 g)进行再次硅胶柱色谱分离，洗脱剂为二氯甲烷-甲醇(6∶1)，用TLC过程监控，收集相对单一部分Fr. C1，用半制备反相色谱分离，流动相为乙腈-0.1%磷酸水(32∶68)，得化合物4(15 mg)，将Fr. D(1.0 g)用常压反相硅胶柱色谱再次粗分，甲醇-水(50∶50→90∶10)梯度洗脱，TLC监控，得Fr. D3、Fr. D4，Fr. D6三个相对单一样品，再用半制备高效液相对样品进行精制，乙腈-0.1%磷酸水为流动相，检测波长254 nm，得化合物1(13 mg)、化合物3(16 mg)，Fr. F(0.4 g)再次进行硅胶柱色谱分离，洗脱剂为二氯甲烷-甲醇(5∶1)，TLC监控，得相对单一的组分Fr. F1，将其用半制备反相色谱分离，以乙腈-0.1%磷酸水(25∶75)为流动相，检测波长254 nm，收集主要目标物，减压抽干，甲醇溶解后过滤，滤液用凝胶色谱精分，用纯甲醇为洗脱剂，得到化合物2(12 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：δ7.56 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，7.52 (1H，dd，J=8.4，2.5 Hz，H-6′)，7.26 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.80 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.43 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.07 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1‴)，4.84 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1″)，3.79 (1H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：148.2 (C-2)，138.9 (C-3)，178.6 (C-4)，161.3 (C-5)，99.7 (C-6)，163.4 (C-7)，95.0 (C-8)，156.5 (C-9)，101.6 (C-10)，124.2 (C-1′)，116.1(C-2′)，146.9 (C-3′)，156.0 (C-4′)，116.2 (C-5′)，120.7 (C-6′)，100.1 (C-1″)，73.5 (C-2″)，76.8(C-3″)，69.9(C-4″)，77.5(C-5″)，61.0(C-6″)，106.3 (C-1)，73.6 (C-2)，76.3 (C-3)，70.2 (C-4)，77.7 (C-5)，61.1 (C-6)，60.2(-OCH3)。与文献[12]报道基本一致，故鉴定为 3-O-甲基槲皮素7-O-β-D-葡萄糖基-4′-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物2：淡黄色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：δ7.40 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.35 (1H，d，J=15.6 Hz，H-7″″′)，7.27 (1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-6′)，6.93 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2″″′)，6.88 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.85 (1H，dd，J=8.0，1.6 Hz，H-6″″′)，6.67 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.66 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5″″′)，6.39 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6. 13 (1H，d，J=16.0 Hz，H-8″″′)，5. 50 (1H，br s，H-1‴)，5.48 (1H，br s，H-1″″)，4.26 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1)，1.10 (3H，d，J=6.0 Hz， H-6″″)，0. 91 (3H，d，J=6.0 Hz，H-6″)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：157.6 (C-2)，135.0 (C-3)，178.4 (C-4)，161.3 (C-5)，99.8 (C-6)，162.1 (C-7)，94.8 (C-8)，156.4 (C-9)，106.0 (C-10)，120.8 (C-1′)，116.0 (C-2′)，145.6 (C-3′)，149.2 (C-4′)，116.0 (C-5′)，121.5 (C-6′)，101.1 (C-1″)，82.1(C-2″)，70.6 (C-3″)，72.1 (C-4″)，70.8 (C-5″)，18.3 (C-6″)，106.6 (C-1)，74.1 (C-2)，76.3 (C-3)，69.6 (C-4)，74.0 (C-5)，63.1 (C-6)，98.8 (C-1″″)，70.2 (C-2″″)，70. 6 (C-3″″)，72.0 (C-4″″)，70.5 (C-5″″)，17.8 (C-6″″)，125.9 (C-1″″′)，115.8 (C-2″″′)，145.5 (C-3″″′)，148.6 (C-4″″′)，116.0 (C-5″″′)，121.5 (C-6″″′)，145.6 (C-7″″′)，114.2 (C-8″″′)，166.7 (C-9″″′)。与文献[13]报道基本一致，故鉴定为槲皮素3-O-(6-O-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖基-(1→2)-α-L-鼠李糖-7-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物3：淡黄色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：12.7 (1H，br s，H-5-OH)，7.19 (1H，d，J=8.4 Hz，H-4′)，6.90 (1H，d，J=8.4 Hz，H-3′)，6.73 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.40 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.20 (2H，s，H-7′)，5.03 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：149.8 (C-2)，133.1 (C-3)，174.1 (C-4)，161.1 (C-5)，99.2 (C-6)，162.5 (C-7)，94.6 (C-8)，155.4 (C-9)，106.1 (C-10)，119.9 (C-1′)，114.2 (C-2′)，114.6 (C-3′)，149. 9 (C-4′)，140.5 (C-5′)，115.2 (C-6′)，63.1 (C-7′)，100.1 (C-1″)，77.2 (C-2″)，69.5 (C-3″)，72.9 (C-4″)，76.4 (C-5″)，60.6 (C-6″)。文献[14]报道基本一致，故鉴定为瓶尔小草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物4：淡黄色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：7.75 (1H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，7.34 (1H，d，J=15.6 Hz，H-7″″′)，6.91(1H，d，J=2.0 Hz，H-2″″′)，6.88 (1H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′)，6.83 (1H，dd，J=8.4，2.0 Hz， H-6″″′)，6.67 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.65(1H，d，J=8.4 Hz，H-5″″′)，6.40 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.10 (1H，d，J=16.0 Hz，H-8″″′)，5.58 (1H，br s，H-1″)，5.50 (1H，br s，H-1″″)，4.28 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1)，4.13 (1H，m，H-6)，4.12 (1H，br s，H-2″)，3.84 (1H，br s，H-2″″)，3.63 (1H，dd，J=9.2，3.2 Hz，H-3″″)，3.55 (1H，dd，J=9.6，3.2 Hz，H-3″)，3.43 (1H，m，H-5″″)，3.37 (1H，m，H-5″)，3.28 (1H，m，H-4″″，5″″)，3.20(1H，m，H-3)，3.19 (1H，m，H-4)，3.12 (1H，t，J= 9.6 Hz，H-4″)，3.06 (1H，t，J=8.0 Hz，H-2)，1. 10 (3H，d，J=6.0 Hz，H-6″″)，0.88 (3H，d，J=6.0 Hz，H-6″)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：157.6 (C-2)，135.0 (C-3)，178.3 (C-4)，161.4 (C-5)，99.9 (C-6)，162.1 (C-7)，94.9 (C-8)，156.4 (C-9)，106.5 (C-10)，120.6 (C-1′)，131.0 (C-2′)，115.8 (C-3′)，160.6(C-4′)，116.0 (C-5′)，131.0 (C-6′)，101.0 (C-1″)，81.9 (C-2″)，70.6 (C-3″)，72.0 (C-4″)，70.9 (C-5″)，18.3 (C-6″)，106.1 (C-1)，74.1 (C-2)，76.4 (C-3)，70.2 (C-4)，74.1 (C-5)，63.3 (C-6)，98.9 (C-1″″)，70.3 (C-2″″)，70.6 (C-3″″)，72.1 (C-4″″)，70.5 (C-5″″)，18.2 (C-6″″)，125.8 (C-1″″′)，115.3 (C-2″″′)，145.9 (C-3″″′)，148.6 (C-4″″′)，115.8(C-5″″′)，121.4 (C-6″″′)，145.5 (C-7″″′)，114.1 (C-8″″′)，166.7 (C-9″″′)。与文献[15]报道基本一致，故鉴为山柰酚3-O-(6-O-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖基-(1→2)-α-L-鼠李糖-7-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物5：淡黄色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)：7.56 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2′)，7.43 (1H，dd，J=8. 4，2.4 Hz，H-6′)，6.90 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.74 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.42 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.06 (1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，3.78 (3H，s，-OCH3)，3.67 (1H，br d，J=10.4 Hz，H-5″)，3.45 (1H，dd，J=6.0，12.0 Hz，H-6″)，3.37 (1H，m，H-5″)，3.30(1H，t，J=7.2 Hz，H-6″)，3.20 (1H，dd，J=7.2，8.8 Hz，H-2″)，3.17(1H，t，J=9.0 Hz，H-4″)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：155.9 (C-2)，137.9 (C-3)，178.1 (C-4)，160.9 (C-5)，99.2 (C-6)，162.9 (C-7)，94.4 (C-8)，156.2(C-9)，105.8 (C-10)，120.7 (C-1′)，115.6 (C-2′)，145.2 (C-3′)，148.9 (C-4′)，115.7(C-5′)，120.7(C-6′)，99.8 (C-1″)，73.1(C-2″)，76.4(C-3″)，69.5(C-4″)，77.1 (C-5″)，60.6 (C-6″)，59.7 (-OCH3)。与文献[16]报道基本一致，故鉴定为 3-O-甲基槲皮素 7-O-β-D-葡萄糖苷。