金银花配方颗粒中绿原酸提取工艺的研究

上官同强 孟令江 滕海达 刘爽

关键词：金银花配方颗粒;绿原酸;提取工艺条件

【中图分类号】 R28 【文献标识码】 A       【文章编号】2107-2306（2022）06--02

中药配方颗粒是以符合炮制规范的中药饮片为原料，经现代工业的提取、浓缩、干燥、精制成颗粒，其性味功效与原饮片一致，不含糖、防腐剂和其他赋形剂。用其代替中药饮片供中医饮片临床辨证讨论，随证加减，配方使用，既能保持原中药饮片的药效，又保证了中医临床的用药特色[1]。

金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬的干燥花蕾，为常用药，具有清热解毒，抗病毒等功能，其功能性成分主要包括挥发油类、有机酸类、黄酮类、环烯醚萜苷类、三萜皂苷类等成分。，其中绿原酸类物质是金银花有机酸的主要有效成分[2]，绿原酸（CGA）是由咖啡酸的羧基和奎尼酸的羟基缩合而成的缩酚酸，是植物细胞通过莽草酸途径合成的一种苯丙素类物质，其分子结构中有酯键、不饱和双键、多元酚和邻二酚羟基，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降血脂、降血糖和免疫调节等多方面的药理作用，在食品、医药和化工等领域都有广泛的应用[3]。本试验以绿原酸提取量、出膏率、为指标，采用正交试验对人参配方颗粒提取工艺进行优化。

1工艺研究资料

1.1剂型选择

配方颗粒要求即为颗粒，故本品为颗粒剂

1.2提取工艺研究

1.2.1材料与仪器

仪器：美国Agilengt 1260 Infinity II高效液相色谱系统，G7129A 1260 Infinity II样品瓶进样器，G7129A 1260 ICC集成式柱温箱，G7114A 1260 Infinity II紫外检测器，G7111A 1260 Infinity II四元梯度泵，8301AA工作站数据处理系统OpenLAB CDS ChemStation Workstation;TP-A500电子天平;日本Shimadzu UV-2600紫外可见分光光度计;电热恒温水浴锅（DK-98-Ⅱ）;电热恒温干燥箱（WGLL-125BZ型）。

材料：金银花对照药材：批号为121060-201608，购买于中国食品药品检定研究院。

绿原酸对照品：批号为110753-201716，购买于中国食品药品检定研究院。供试品：供试品：批号171801701、171801702、171801703。试剂：乙腈为色谱纯（Fisher Chemicals），水为娃哈哈纯净水，其余试剂为分析纯。

1.2.2提取工艺路线的设计

根据原国家食品药品监督管理总局发布的《中药配方颗粒管理办法（征求意见稿）》第一章第三条的规定，配方颗粒的定义为：中药配方颗粒是由单味中药饮片经水提、浓缩、干燥、制粒而成，在中医临床配方后，供患者冲服使用。故采用水提取法。

1.2.3观察指标：以绿原酸提取量和出膏率为指标，分别对加水倍量、提取次数、提取时间等工艺参数进行考察，通过对正交试验结果进行综合分析，选取与绿原酸含量和出膏率与标准煎剂最接近的提取工艺参数作为人参配方颗粒的最优提取工艺。

1.3含量标准

参考《中国药典》2015年版一部金银花绿原酸含量限度为1.5%，木犀草苷含量限度为0.050%。为了保證产品质量，内控绿原酸含量规定为不得少于1.5%，木犀草苷含量规定为不得少于0.050%。

2方法与结果

2.1样品的测定方法

2.1.1吸水量测定

取金银花100g，加入10倍量水浸泡，直至药材完全浸透，滤出未被吸收的水，称量浸润后药材重量，计算药材吸水量，结果为373ml/100g。

2.1.2绿原酸的含量测定方法：照高效液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）为流动相;检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算，应不低于1000。

对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得（10℃以下保存）。

供试品溶液的制备取本品，研细，取粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（200W，45kHz）30分钟，放冷。再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇定容至刻度摇匀，即得

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.1.3木犀草苷的含量测定：照高效液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性试验用苯基硅烷键合硅胶为填充剂（Agilent ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm，5μm），以乙腈为流动相A，以0.5%冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱;检测波长为350nm。理论板数按木犀草苷峰计算应不低于20000。

对照品溶液的制备取木犀草苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品，研细，取粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率45kHz）1小时，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.1.4出膏率的测定将提取液浓缩至约100ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，取出置干燥器中冷却30min，迅速精密称重，按下式计算出膏率。

出膏率（%）=W＼WO×100%式中：W为浸膏重量;WO为药材重量。

2.2提取工艺条件的研究

2.2.1 水提工艺的正交试验

对提取工艺影响较大的因素有加水倍量、提取时间、提取次数。药材吸水量测定结果显示吸水量等于药材总量的3.73倍，因此选择加水倍量为10、12、14。以干膏绿原酸提取量作为评分标准，采用L9（34）正交表进行提取工艺的优化筛选，因素水平见表1。

方法：分别称取金银花9份，每份100g，按正交表进行试验，加水回流提取，滤过，滤液浓缩干燥后、测定干膏重量及水分，照中国药典2015年版一部金银花含量测定项下方法测定绿原酸含量，以每1g饮片绿原酸的提取量作为综合评分标准，并对其进行方差分析，实验安排及结果见表2，方差分析见表3。

结果表明，以绿原酸提取量为评分指标，影响提取工艺的因素作用顺序为提取次数>加水量>提取时间，由表3可知，A（提取时间）、B（提取次数）、C（加水量）因素均无显著性影响，结合生产实际考虑，确定金银花最佳提取工艺为A1B2C3，也即加水14倍，提取2次，每次0.5小时。

2.2.2最佳提取工艺验证试验

根据正交试验结果筛选的最佳工艺条件进行验证试验。取金银花，共3份，分别加水14倍提取2次，每次提取0.5小时，提取液滤过，减压浓缩，干燥，称重，计算出膏率并测定绿原酸提取量，结果见表4。

由表4结果可知，三批金银花中绿原酸的提取量分别为11.95mg/g、11.23mg/g、11.12mg/g，RSD值为3.94%，筛选出的提取工艺稳定可行。确定金银花配方颗粒的提取工艺为：金银花加水14倍，提取2次，每次0.5小时。

2.2.3金银花质量的含量检测

照正文色谱条件，对三批金银花配方颗粒进行含量测定，结果见表19。

根据测定结果，结合实际情況，拟定本品按干燥品计算，每1g含绿原酸（C16H18O9）不得少于20.0mg，含木犀草苷（C21H20O11）不得少0.40mg。符合《中国药典》2015年版一部金银花绿原酸含量限度为1.5%，木犀草苷含量限度为0.050%。

3结论

通过正交实验，确定最佳提取工艺为：金银花加水14倍，提取2次，每次0.5小时。经重复试验提示，筛选得到的金银花配方颗粒绿原酸最佳提取工艺条件稳定可行，且绿原酸提取量与出膏率都较高。

4讨论

中药配方颗粒克服了中药饮片煎煮时、服用量大的缺点，避免了因煎煮费时、服用量大的缺点，避免了因煎煮方法不当而直接影响药物药效。有利中药工业化、产业化、，进一步加深与国际市场的联系。中药剂型的进步为全人类的发展提供了便利[4]。但我们也要认识到中药配方颗粒的研究和发展还不成熟，还有很多我们没有攻克的难题，如中药配方颗粒成本较高、复方合煎与单煎混合液化学成分的异同等等[5]，因此加快推进中药颗粒配方技术的进步，是现阶段需要解决的问题。

绿原酸和木犀草苷是金银花中两种有效的生理活性物质，绿原酸是抗菌解毒，消炎利胆的主要活性物质，而木犀草苷则具有抗肿瘤、抗诱变、抗感染等药理活性。2005年新版中华人民共和国国药典将忍冬（Lonicera japonica Thunb）作为金银花药材的唯一来源，规定绿原酸和木犀草苷作为金银花的质量检测指标。因此研究金银花颗粒中绿原酸的最佳提取工艺时，要充分考虑木犀草苷的提取量。

绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸形成的酯，其分子结构中有酯键、不饱和双键及多元酚三个不稳定部分。在从植物提取过程中，往往通过水解和分子内酯基迁移而发生异构化。由于绿原酸本身的不稳定性，提取时不能高温、强光及长时间加热。因此，生产金银花配方颗粒时，尽量做到提取后立刻浓缩，即使需要放置，需对储液罐增加冷却系统。以减少绿原酸的损耗。

参考文献：

[1]陈平.中药配方颗粒对丰富、发展传统中药汤剂的作用与意义[J].中华中医药杂志，2005，20（5）：2.

[2]朱文卿，任汉书，郑媛媛，等.金银花的功能性成分及其生物活性研究进展[J].食品工业科技，2021，42（13）：412-426.

[3]王庆华，杜婷婷，张智慧，等.绿原酸的药理作用及机制研究进展[J].药学学报，2020，55（10）：2273-2280.

[4]陈平.中药配方颗粒对丰富、发展传统中药汤剂的作用与意义[J].中华中医药杂志，2005，020（005）：314-315.

[5]纪昌青.中药配方颗粒剂临床应用的优势和局限性[J].内蒙古中医药，2013，032（023）：44.

基金项目：内蒙古自治区科技计划项目，项目名称：蒙中药配方颗粒提取工艺与质量标准研究