膀胱癌病人癌组织中Dickkopf相关蛋白2的表达及与预后的相关性

李玉柱 夏连杰

膀胱癌是临床中常见的泌尿系统恶性肿瘤，其具有多病灶、易复发、易转移等特点，预后较差，病死率较高[1-2]。Dickkopf相关蛋白2(DKK2)是近年来新发现的与膀胱癌紧密相关的一种癌基因，在细胞内可通过激活拮抗Wnt通路发挥抑癌活性[3-4]。有研究表明，DKK2表达与膀胱癌的发生发展关系密切[5]。本研究探讨膀胱癌病人DKK2的表达及与预后的关系。现将结果报道如下。

对象与方法

一、对象

2016年5月～2018年6月我院收治的行手术治疗的膀胱癌病人86例，其中男54例，女32例；年龄42～76岁，平均年龄(52.75±10.72)岁。本研究经本院医学伦理委员会批准同意。纳入标准：符合膀胱癌诊断标准[6]，并经组织病理学检查确诊；符合手术指征并均拟行全膀胱切除治疗；术前未进行放疗、化疗等治疗；临床资料完整。排除标准：心、肝、肾等重要脏器功能障碍；合并肝癌、胃癌等其他肿瘤疾病；妊娠或哺乳期女性；合并精神疾病或认知功能障碍；合并免疫系统或血液系统疾病。

二、方法

1.DKK2检测：术中收集所有研究对象膀胱癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)，并快速进行病理检查。采取免疫组化法对膀胱组织DKK2表达进行检测，标本石蜡包埋后切片，行HE染色和免疫组织化学染色；染色结果判断[7]：阳性细胞数得分×染色强度得分≤3分为DKK2表达阴性，若阳性细胞数得分×染色强度得分>3分为DKK2表达阳性。

2.观察指标：术后随访，截止时间2021年5月31日，所有膀胱癌病人术后以门诊、电话等多种方式进行随访，每3个月1次，以研究对象失访、死亡或随访时间截止为终点事件。收集影响膀胱癌病人预后的临床资料，包括性别、年龄、体质量指数(body mass index，BMI)、肿瘤最大径、吸烟、饮酒、临床分期、淋巴结转移、分化程度、脉管侵犯。

三、统计学方法

结果

1.膀胱癌组织、癌旁组织中DKK2表达情况比较见表1。结果表明，膀胱癌组织DKK2阴性表达率高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 膀胱癌组织、癌旁组织中DKK2表达比较

2.癌组织中DKK2表达与临床病理特征的关系见表2。结果表明，不同性别、年龄、BMI、吸烟、饮酒、肿瘤数量膀胱癌病人癌组织中DKK2阴性表达率比较，差异无统计学意义(P>0.05)；肿瘤最大径≥3 cm、临床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化、脉管侵犯膀胱癌病人癌组织中DKK2阴性表达率分别高于肿瘤最大径<3 cm、临床分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、中/高分化、无脉管侵犯病人，差异有统计学意义(P<0.05)。

表2 癌组织中DKK2在不同临床病理特征中的表达情况(例，%)

3.影响膀胱癌病人预后的多因素分析见表3。86例膀胱癌病人术后随访期间共失访5例，81例病人中19例死亡，病死率23.46%(19/81)；Cox回归分析显示，临床分期、淋巴结转移、分化程度、DKK2阴性表达是影响膀胱癌病人预后的独立影响因素，差异有统计学意义(P<0.05)。

表3 影响膀胱癌病人预后的单因素、多因素分析

4.癌组织中DKK2表达与膀胱癌病人预后的关系见图1。截止随访结束，DKK2阳性病人失访1例，剩余18例，其中死亡1例，总存活率为94.44%(17/18)；DKK2阴性病人失访4例，剩余63例，其中死亡18例，总存活率为71.43%(45/63)。DKK2阳性表达病人与DKK2阴性表达病人生存曲线比较，差异有统计学意义(χ2=4.131，P=0.042)。

图1 膀胱癌组织DKK2阳性表达、DKK2阴性表达病人生存曲线

讨论

膀胱癌具有浸润性生长的特征，手术切除后部分病人会出现复发、远处转移等，严重影响了病人的预后[8-9]。有研究表明，膀胱癌细胞的异常增殖、侵袭致使病灶浸润性生长的恶性生物学行为是肿瘤复发、转移的病理基础，不利于病灶的彻底清除，直接影响了病人的预后[10-11]。有研究表明，DKK2表达与膀胱癌的增殖、侵袭相关，其参与病灶的生长[12]。

本研究结果表明，膀胱癌组织DKK2阴性表达率高于癌旁组织，提示膀胱癌组织DKK2阴性表达率较高。本研究结果表明，肿瘤最大径≥3 cm、临床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化、脉管侵犯膀胱癌病人癌组织中DKK2阴性表达率分别高于肿瘤最大径<3 cm、临床分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、中/高分化、无脉管侵犯病人，提示DKK2表达与肿瘤最大径、临床分期、淋巴结转移、分化程度及脉管侵犯病理特征具有一定的相关性。DKK2为DKK家族的主要成员之一，其已被证实与胃癌等多种恶性肿瘤的发生发展有关[13-15]。有研究表明，DKK2表达水平增加可使膀胱癌细胞的细胞周期、增殖及侵袭发生停滞，对膀胱癌细胞的生物学行为具有一定的调控作用[16]。Cox回归分析显示，临床分期、淋巴结转移、分化程度、DKK2阴性表达率是影响膀胱癌病人预后的独立影响因素，提示在临床中需逐一对以上危险因素进行防控。癌细胞的异常增殖是膀胱癌病灶内主要的生物学特征，其增殖过程受多种基因的调控，其中细胞周期素D1(CyclinD1)、癌症myc基因(c-myc)等相关基因的产物可通过促进细胞周期由G0期向G1期的转化，加速细胞周期的进程，促进细胞的增殖；增殖抑制基因(HSG)对癌细胞增殖具有抑制作用，可通过阻碍细胞周期进程，致使细胞增殖发生停滞[17-19]。拓志勇等[20]研究表明，DKK2与CyclinD1、c-myc的表达量呈负相关，与p16、HSG的表达量呈正相关。因此推测，DKK2表达可能是通过影响CyclinD1、c-myc等基因的表达影响癌细胞的增殖，影响预后。截止随访结束，DKK2阳性表达病人生存率高于DKK2阴性表达病人，提示DKK2阳性表达膀胱癌病人生存率较高，在临床中对膀胱癌病人癌组织中DKK2表达检测结果为阴性时，应给予高度警惕。

综上所述，膀胱癌病人癌组织中DKK2呈异常阴性表达，DKK2与临床病理特征及预后均具有一定的相关性，其水平检测对膀胱癌病人预后评估具有重要参考价值。本研究的病例数较少，随访时间较短，后续还应联合多中心扩大样本容量、延长随访时间。