Daxx蛋白、HSP90α、转铁蛋白受体TfR在儿童急性髓细胞白血病中诊断价值的ROC分析

刘 斌 王盛华 王 倩

（河北医科大学附属河北省儿童医院，河北 石家庄 050031）

儿童急性髓细胞白血病是较为常见的造血系统恶性肿瘤，在临床中又称为血癌[1]。通常情况下，患儿祖细胞及造血干细胞多存在一定的恶性病变，导致细胞出现正常分化和增殖能力丧失，引起无控制性持续增殖并逐渐取代正常骨髓组织，且可随血液分布于全身各处组织器官[2-3]。有学者指出，肿瘤细胞自噬与体内铁代谢关系密切，铁蛋白降解与转铁蛋白受体（TfR）水平密切相关[4-5]。近年来，在神经退行性疾病的临床研究中发现，铁蛋白降解是通过自噬溶酶体途径的观点受到临床的高度重视，这一观点正好和急性白血病当中的自噬活性异常有关。Daxx、HSP90α（热休克蛋白）在其他肿瘤疾病的诊断中被证实具有重要的临床价值。但现阶段Daxx、HSP90α及TfR在诊断鉴别评估儿童急性髓细胞白血病中的应用仍鲜有报道，因而笔者对我院收治的儿童急性髓细胞白血病患儿作为研究对象，绘制ROC曲线分析Daxx蛋白、HSP90α、TfR在儿童急性髓细胞白血病中诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 经我院伦理委员会批准，选取我院2016年10月至2020年6月我院收治的84例儿童急性髓细胞白血病患儿作为观察组，同期选择84例 健康体检者作为对照组，观察组中患儿男53 例（63.10%）、女31例（36.90%），年龄1～9岁，平均年龄（5.79±1.42）岁，形态学分布情况：M16例（7.14%）、M29例（10.71%）、M328例（33.33%）、M 47 例（8.33%）、M 524 例（28.57%）、M65例（5.95%）、M75例（5.95%），危险度分布情况：低危15例（17.86%）、中危24例（28.57%）、高危45例（53.57%）。对照组中男52例（61.90%），女32例（38.10%），年龄1～10岁，平均年龄（6.73±1.45）岁。患儿及家属均自愿参与研究，并签署知情同意书，经本院伦理委员会批准本研究。两组儿童的年龄、性别一般资料无明显差异（P＞0.05），分组合理，具有可比性。本次所选84例研究对象，均在化疗治疗前统一支撑骨髓制备标本，接受治疗病例均进行标准诱导方案化疗。

1.2 纳排标准 纳入标准：①急性髓细胞白血病患儿经病理学检查确诊。②年龄均＜18岁。③患儿入组间未接受化疗、放疗或手术方案等治疗方法进行治疗。④受试者均对本研究知情并签署知情同意书。排除标准：①合并出现其他恶性肿瘤。②精神异常无法有效配合本研究。③存在严重内分泌系统疾病。⑤受试者主动申请退出本研究，未参与到整个的化疗治疗中或直接放弃治疗。⑥诊断结果显示患儿为急性早幼粒性细胞白血病。

1.3 方法 本组研究中在所有受试者入组后采集其空腹静脉血，操作步骤严格按试剂盒中提供的说明书进行。在清晨空腹时采用EDATA-K抗凝管收集两组患者静脉血约2 mL，随后进行离心处理，离心条件为：5000 r/ min，4 ℃。离心10 min后搜集血清，置于-20 ℃ 冰箱保存待测。离心收集的血清采用酶联免疫吸附法检测受试者血清中HSP90α及Daxx蛋白。使用密度梯度离心法筛选外周血中单核细胞，后制备细胞混悬液采用PCR法检测细胞中TfR蛋白及β-actin水平，以 TfR/β-actin表示TfR蛋白表达水平，以患儿依照病理检测结果的分组标准作为金标准，绘制ROC曲线分析各指标单独及联合诊断儿童急性髓细胞白血病的价值。

1.4 观察指标 对比两组患儿的血清Daxx、HSP90α、TfR水平，并对比不同危险度患儿的血清Daxx、HSP90α、TfR水平。统计各指标单独应用与联合应用时在鉴别儿童急性髓细胞白血病结果，并分析各指标单独应用与联合应用时鉴别儿童急性髓细胞白血病的敏感度、特异度及AUC。

1.5 统计学方法 本研究中采用SPSS 20.0行统计学分析，采用[n（%）]及（±s）表示和分析计数资料，采用百分率及均值±标准差表示和分析计量资料，采用Logsitic回归模型分析三指标联合应用的诊断价值，绘制ROC曲线分析各指标单独及联合应用的诊断价值，P＜0.05则差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Daxx、HSP90α及TfR水平检测结果 研究结果显示，观察组患儿血中Daxx、HSD90α及TfR水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组患儿血中Daxx、HSP90α及TfR水平检测结果对比（±s）

表1 两组患儿血中Daxx、HSP90α及TfR水平检测结果对比（±s）

2.2 不同危险度患儿的血清Daxx、HSP90α、TfR水平 不同危险度患儿的血清Daxx、HSP90α、TfR水平存在明显差异（P＜0.05），按照从低至高顺序排列为低危＜中危＜高危。见表2。

表2 不同危险度患儿的血清Daxx、HSP90α、TfR水平对比（±s）

表2 不同危险度患儿的血清Daxx、HSP90α、TfR水平对比（±s）

2.3 各指标鉴别儿童急性髓细胞白血病结果 研究结果显示，Daxx检测鉴别为儿童急性髓细胞白血病共64例，HSP90α检查鉴别为儿童急性髓细胞白血病共68例，TfR检查鉴别为儿童急性髓细胞白血病共66例，联合应用鉴别为儿童急性髓细胞白血病共79例。见表3。

表3 各指标鉴别儿童急性髓细胞白血病结果对比

2.4 各指标诊断儿童急性髓细胞白血病价值结果对比 本组研究结果显示，各指标联合应用鉴别诊断儿童急性髓细胞白血病鉴别诊断敏感度、特异度及AUC均明显高于Daxx、HSP90α及TfR单独应用，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4及图1。

图1 各指标诊断儿童急性髓细胞白血病价值的ROC曲线图

表4 各指标诊断儿童急性髓细胞白血病价值结果对比

3 讨 论

急性髓细胞白血病是较为常见的严重恶性肿瘤，其给患儿本人及家庭均造成严重的心理和经济负担[6]。据相关研究报道，2014年至2019年，儿童急性髓细胞白血病的发病例数呈现波动上升的趋势；在形态学分布上，以M3型与M5型多见，分别为31.91%、28.19%；患儿发病年龄的高峰期集中在2岁左右；患儿在发病性别上的差异不大；冬季为儿童急性髓细胞白血病的高发季节；在危险度上，高危患儿占比最高达46.67%；放弃治疗率从2014年的34.78%下降至2019年的23.73%，可见各家长对儿童急性髓细胞白血病治疗的需求不断升高[7]。目前临床中在对该病进行治疗时主要以消灭体内恶性肿瘤细胞为主要原则，有效控制患儿体内病变细胞数有效防止肿瘤细胞浸润等[8]。早发现、早治疗是目前临床中对儿童髓细胞白细胞干预治疗的重要途径，如何有效实现尽早诊断具有十分重要的临床意义[9-10]。

3.1 DAXX对儿童急性髓细胞白血病鉴别诊断的价值 细胞凋亡是促进体内细胞正常发育、分化及成熟的一个关键步骤，同时也在肿瘤疾病的发生及信息传递当中反映出相应的临床信息。DAXX对白血病细胞凋亡调控基因的分析，对白血病的发病原理及临床治疗都有着重要影响，DAXX蛋白免疫反应的产物在细胞核内，在检测过程中结果一般呈阳性表现，对患者的临床疗效及反应有着密切联系，甚至关系到患者的预后康复效果[11]。DAXX全称为death domain-associated protein，是细胞重要的功能蛋白，其与细胞的生长发育、转录调控、细胞凋亡及病毒感染等多种过程密切相关[12]。并且DAXX还能够防止β-淀粉样蛋白和α-突触核蛋白的错误折叠、缠结以及胞外斑块和胞内包涵体的形成。有研究指出，Daxx是细胞中Fas下游重要通路，Daxx还可有效提高Fas的功能，调节细胞敏感性[11]。此外，有研究指出，Daxx是体内重要的信号分子，其可有效传导肿瘤坏死因子受体超家族成员的凋亡信号转导[13]。在本次研究中显示，与健康儿童相比，急性髓细胞白血病患儿血清Daxx水平明显升高，分别为（6.12±0.92）μg/L、（3.11±0.78）μg/L，且随着危险度的升高而升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示急性髓细胞白血病的发生可促使血清Daxx水平升高。白细胞与众多细胞一样，也会受到Daxx蛋白的影响而增殖与生长，因此，在儿童的急性髓细胞白血病中发挥了至关重要的作用。有学者采用乙酰化抑制剂对急性髓性白血病细胞株干预后，结果显示胞内Daxx水平均处于异常降低状态。

3.2 HSP90α对儿童急性髓细胞白血病鉴别诊断的价值 HSP90家族为可溶性胞质蛋白，是由具有不同基因编码的两种蛋白构成，分别为HSP90与GP96。其中HSP90的C末端具有较小的含有丰富负电荷的区域，其分布情况与DNA双螺旋中的磷酸基团相似，正是这一区域决定了HSP90是否通过影响DNA的结构来进行激素受体以及癌基因产物的调节。在人体中，通过判断是否具有丰富谷氨酰胺片段将其划分两种异构体，分别为HSP90α与HSP90β。HSP90α在细胞的生长发育调控过程中扮演重要角色，可有效调控肿瘤细胞内多种蛋白功能，并参与肿瘤细胞的增殖、存活、凋亡及侵袭转移等多个过程。HSP90α在体内具有免疫佐剂效应，能够和多种肿瘤抗原肽相互结合，激发特异性主动免疫的活性状态[14]。HSP90α（热休克蛋白）在临床中又称之为应激蛋白，是机体细胞在一些理化因素刺激后高效表达的一组蛋白质，不能直接判断是癌症表现。如对检测结果抱有疑虑，可配合化验血，以及影像学检查等方式才能判断有无癌变，可以通过胃肠镜、胸片、腹部彩超等检查确定有无肿瘤包块，必要时可筛查肿瘤标志物、病理穿刺活检确诊，不必引起盲目恐慌。此外，有研究结果显示在肿瘤细胞内的IKK、PI3K/Akt及NF-KB等信号转导过程中均扮演十分重要的角色[15]。在本次研究中，观察组患儿血清HSD90α水平（3.93±0.64）μg/mL明显高于对照组（0.32±0.07）μg/mL，且随着危险度的升高而升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。这提示着急性髓细胞白血病的发生可促使血中HSD90α水平升高。在急性髓细胞白血病患儿体内，因机体受到疾病刺激，激发特异性主动免疫的活性，使得患儿血中HSD90α水平升高。

3.3 TfR对儿童急性髓细胞白血病鉴别诊断的价值 铁是体内多种蛋白的辅助关键分子，有效参与体内多种蛋白的代谢活动及功能。一般情况下，铁代谢平衡在机体内扮演十分重要的角色，当机体出现钙超载后可导致白血病细胞生长，出现铁剥夺后则可促进细胞凋亡。铁是体内许多蛋白质的关键辅助分子，是维持人体疾病新陈代谢的关键因素，如果铁超载可促进白血病细胞的生长，抑制其凋亡，是肿瘤发生和信息传递的重要媒介[16-17]。转铁蛋白（Tf）的主要作用是携带铁运输，由肝细胞与单核巨噬细胞合成，将铁元素输送至全身的各个组织，并将暂时不同的铁元素输送至储存部位。TfR属于膜受体，形成TfR-Tf-Fe复合物，通过胞饮方式进入细胞后，释放铁元素，随后TfR-Tf回到细胞表面，TfR的数量反映着机体对铁元素的需求量。血清中可溶性TfR绝大部分是以TfRTf的复合形式存在。因此，在铁的转运、吸收及代谢过程中，TfR扮演十分重要的角色，TfR可介导铁的内化过程，当体内出现多余的铁后通过TfR将其内化吸收并以铁蛋白形式在细胞内保存，因而TfR常被作为评估细胞代谢水平的重要指标。有研究结果显示，铁超载是导致肿瘤发生及发展的重要高危因素，在乳腺癌、头颈肿瘤等多种肿瘤中均可见铁代谢异常，因而TfR常被作为评估机体蛋白代谢平衡和预测肿瘤的重要指标[18-19]。急性白血病的发病和体内铁代谢紊乱及白血病细胞自噬活性的转变有着一定联系，但在以往的临床研究中，对于急性白血病发病中铁代谢紊乱的信号转导机制尚不明确。本次研究显示，观察组患儿血中TfR水平（1.89±0.34）mg/L明显高于对照组（0.25±0.07）mg/L，且随着危险度的升高而升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示着急性髓细胞白血病的发生可促使血中TfR水平升高。该结论与许惠敏[20]等的研究结果具有相似之处，在其研究中显示，白血病患儿与健康儿童的血清TfR水平分别为（3.26±0.62）mg/L、（2.13±0.19）mg/L。急性髓细胞白血病患儿机体铁处于高度代谢的状态，肿瘤细胞增殖与分化的过程中需要消耗患儿体内的大量铁元素，故而急性髓细胞白血病患儿的血清TfR水平显著升高，促进铁元素向肿瘤细胞内的转运。

3.4 Daxx、HSP90α、TfR联合对儿童急性髓细胞白血病鉴别诊断的价值 研究结果显示，观察组患儿血中Daxx、HSP90α及TfR水平明显高于对照组。表明相比于正常的健康儿童，急性髓细胞白血病患儿存在明显的Daxx、HSP90α及TfR水平升高现象，这3项指标对诊断急性髓细胞白血病具有一定价值。绘制ROC曲线分析发现，Daxx、HSD90α及TfR各指标联合应用鉴别诊断儿童急性髓细胞白血病鉴别诊断敏感度、特异度及AUC分别为94.05%、95.24%、0.988，均明显高于Daxx、HSP90α及TfR单独应用（敏感度分别为76.19%、80.95%、78.57，特异度分别为82.14%、79.76%、78.57%，AUC分别为0.831、0.815、0.822），且差异有统计学意义（P＜0.05）。表明3项指标单独应用于对急性髓细胞白血病的鉴别诊断时具有其一定的局限性，而各项指标均有其各自优势，联合用于急性髓细胞白血病鉴别诊断时可提升诊断效果。分析认为，通过联合检测患儿血中Daxx、HSP90α及TfR水平的检测分别在评估患儿体内细胞代谢、肿瘤细胞增殖、铁代谢及内分泌系统功能时具有各自的优势，进而3项指标联合诊断时发挥了各项指标的评估优势作用，使得对儿童急性髓细胞白血病鉴别诊断的效果显著提升，提高其临床诊断价值。但是急性髓细胞白血病的发病过程较为复杂，参与机制较多。在后续的临床研究当中，还需要进一步探索白血病的发病机制，寻找到新的治疗靶点，反复对白血病患者的发病机制和耐药性质进行深入研究，对反复发作的患者进行远期跟踪，记录患者经治疗后的预后恢复状况和生存率，为日后的白血病临床治疗提供进一步的临床参考。

综上所述，联合检测Daxx蛋白、HSP90α、TfR在儿童急性髓细胞白血病鉴别诊断中可有效提高诊断价值。但本研究临床样本数较少，有待后续继续深入确认分析。