用不同的免疫检验方法检测乙肝病毒感染血清标志物的效果分析

田仁凤

（贵州省思南县民族中医院，贵州 思南 565100）

乙型肝炎病毒（乙肝病毒）属于嗜肝DNA 病毒科。乙型肝炎（乙肝）是我国乃至全世界最主要的传染病之一。乙肝病毒主要存在于乙肝患者的血液及体液中。据估计，全球范围内目前约有3 亿多乙肝病毒携带者。感染乙肝病毒可引起急、慢性乙肝。流行病学研究表明，肝细胞癌的发生与患者存在乙肝病毒感染密切相关。在感染乙肝病毒后，人体会产生各种不同模式的血清学免疫应答反应[1]。通过检测相关的血清标志物，可诊断乙肝病毒感染，并可判断患者病情的进展和预后。在本文中，笔者主要是比较用磁微粒化学发光法和酶联免疫法检测乙肝病毒感染血清标志物的效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2020 年2 月至8 月思南县民族中医院接诊的162 例乙肝患者作为本次研究的对象。这些患者的年龄为12 岁至70 岁，平均年龄（40.27±2.17）岁。其中排除合并有血液疾病的患者。

1.2 仪器和试剂

本研究中所用的检测仪器包括：Autolumo 全自动化学发光测定仪；上海科华ST-360 酶标仪。本研究中所用的检测试剂包括：郑州安图生物工程有限公司生产的乙肝病毒检测试剂盒( 磁微粒化学发光法）；上海科华生物工程股份有限公司生产的乙肝病毒检测试剂盒( 酶联免疫法）。

1.3 检测方法

对这162 例乙肝患者均进行乙肝病毒感染血清标志物检测，方法是：采集患者的血液样本。使用普通管采集的血液样本，离心前在37℃下孵育1 h。使用促凝管采集的血液样本，离心前在37℃下孵育0.5 h。样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响检测结果，因此应对样本进行充分的离心处理。在完成样本采集后，若不能及时进行检测，应将其置于2 ～8℃的冰箱中保存。若需保存48 h以上，应先提取出血清标本，并将其冻存于-20℃以下的环境中。应注意避免反复冻融。使用前应使标本恢复至室温，并轻轻摇动混匀[2]。分别采用磁微粒化学发光法、酶联免疫法检测血清标本中HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBeAg、HBcAb 的含量。严格按照试剂操作说明书进行检测，并使用质控物进行室内质控[3]。两种检测结果的判定标准见表1。

表1 两种检测结果的判定标准

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计学软件对本研究中的数据进行分析。计量资料用均数± 标准差（±s）表示，采用t检验，计数资料用百分比（%）表示，采用χ² 检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

进行磁微粒化学发光检测所得HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 的阳性检出率分别为74.07%（120/162）、32.10%（52/162）、17.90%（29/162）、30.86%（50/162）、69.75%（113/162）, 进行酶联免疫检测所得HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 的阳性检出率分别为62.96%（102/162）、17.90%（29/162）、19.75%（32/162）、14.81%（24/162）、77.16%（125/162）。与进行酶联免疫检测相比，进行磁微粒化学发光检测所得HBsAg、HBsAb、HBeAb 的阳性检出率均较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。进行酶联免疫检测与磁微粒化学发光检测所得HBeAg、HBcAb 的阳性检出率相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表2。

表2 进行两种检测所得各项乙肝病毒感染血清标志物阳性检出率的对比[%( 例)]

3 讨论

有研究显示，部分乙肝病毒携带者血清HBsAg 的水平较低，采用酶联免疫法对其血清HBsAg 的水平进行检测易出现检测结果呈假阴性的情况[4]。相关的研究指出，采用磁微粒化学发光法检测乙肝病毒感染血清标志物的敏感度高于采用酶联免疫法，这与上述两种检测方法的检测原理不同有关。在采用磁微粒化学发光法检测乙肝病毒感染血清标志物时，主要是利用双抗体夹心原理检测HBsAg、HBsAb、HBeAg，即用已知的抗体或抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记相应的抗体或抗原，然后制备酶结合物，并通过免疫反应形成抗体- 抗原- 酶复合物或抗原-抗体- 酶标抗原复合物。上述复合物可催化发光底物发出光子，其发光强度与相应抗原或抗体的水平成正比[5]。在采用磁微粒化学发光法检测乙肝病毒感染血清标志物时，主要是利用竞争原理检测HBeAb、HBcAb，即用已知的抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记相应的抗体，然后制备酶结合物，并通过免疫反应形成抗体- 抗原酶标抗体复合物。该复合物可催化发光底物发出光子，其发光强度与相应抗原或抗体的水平成反比[6]。有研究指出，采用酶联免疫法检测乙肝病毒感染血清标志物具有操作简单、检测时间短、检测成本低等优点。但有研究发现，在采用酶联免疫法检测乙肝病毒感染血清标志物时，若抗原或抗体酶结合物的浓度、吸光度较低，易出现检测结果呈假阴性的情况。若酶结合物的浓度过高、吸光度过大，超出敏感范围，检测结果同样会受到影响。在采用酶联免疫法检测乙肝病毒感染血清标志物时，检测相关操作通常以手工操作为主，这使得检测结果易受实验室条件和人为因素的影响。标本采集、实验室人员操作、试剂、仪器设备等多种因素都会影响检测结果。在对HBsAg 浓度较小的标本进行检测时，不易准确判断其检测值[7]。而采用磁微粒化学发光法检测乙肝病毒感染血清标志物通常可避免假阴性检测结果的出现。这主要是由于，采用磁微粒化学发光法检测乙肝病毒感染血清标志物时主要是使用全自动检测仪进行检测操作。这样可以提高检测的敏感度、精密度和准确度，避免人为因素引起的误差，使检测结果稳定可靠[8]。有研究指出，与采用酶联免疫法相比，用磁微粒化学发光法检测乙肝病毒感染血清标志物的效果较好[9]。但需要注意的是，用磁微粒化学发光法检测乙肝病毒感染血清标志物的检测成本较高[10]。笔者认为，若想提高用磁微粒化学发光法与酶联免疫法检测乙肝病毒感染血清标志物的准确性，需要注意以下几点：1）采集和处理标本时应尽量避免相关干扰因素的影响；2）应选择质量有保证的试剂；3）应做好检测仪器设备的日常保养和定期校准；4）应加强对检测人员的培训；5）应制定严格的实验室操作规程；6）应选择合适的质控物进行室内质控，减少外在影响因素，使检测结果更准确[11]。本研究的结果显示，与进行酶联免疫检测相比，进行磁微粒化学发光检测所得HBsAg、HBsAb、HBeAb 的阳性检出率均较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。进行酶联免疫检测与磁微粒化学发光检测所得HBeAg、HBcAb 的阳性检出率相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

综上所述，与采用酶联免疫法相比，用磁微粒化学发光法检测乙肝病毒感染血清标志物的效果较好。此法值得在临床上推广应用。