从小肠炭末推进率观察摩法的补泻效应

李 哲，王继红，孙 瑞，贾文瀚

（广州中医药大学，广州 510405）

摩法是推拿中最基础的手法之一，也是最早应用于推拿治疗的手法之一，早在《黄帝内经》中就记载，《素问·病能论篇》：“其中手如针也，摩之切之”[1]。摩法具有理气活血、消肿退热、消积导滞、温中健脾等作用[2]，广泛应用在临床治疗中，特别是其调理肠胃功能的作用。补泻是中医治疗的核心概念之一，《灵枢·经脉》曰：“盛则泻之，虚则补之”、《灵枢·邪气脏腑病形》曰：“补泻反则病益笃”，均阐明了中医治疗应遵循“据病之虚实以决补泻之分”的基本原则。摩法在临床应用中也遵循这一补泻原则，而明·周于蕃曰：“急摩为泻，缓摩为补”，论述了手法缓急（频率）与补泻密切相关[3]。本实验前期研究已表明[4]，不同频率的摩法存在频率—效应差异，每分钟100～150次为最佳补益频率段，而频率在每分钟200次以上则起到泻实的作用。基于此，本实验通过观察脾虚家兔炭末推进率来探析上述两个频率段摩法的效应关系及其实现的作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物及分组

选用成年新西兰家兔72只[山东康大生物科技有限公司，许可证编号：SCXK（鲁）2016 0002]，体质量（2.0±0.5） kg，雌雄各半，分笼饲养，兔笼贴标签编为1-72号，1-36号为雄兔，37-72号为雌兔。家兔置于温度24 ℃，相对湿度50%～70%的环境中适应性喂养7 d后，从1～36号、37～72号中随机各抽取6只组成1组，每组12只，共6组，分别为：空白组（K组）、模型组（P组）、摩法低频组（A组，频率每分钟101～150次）、摩法高频组（B组，频率每分钟201～250次）、抑制剂组1（I-1组，A组方法+腹腔注射ML-9）、抑制剂组2（I-2组，B组方法+腹腔注射ML-9）。K组继续常规饲养，其余进行脾虚造模，其中A组、B组、I-1组、I-2组进行手法治疗干预。

1.2 动物造模

实验采用灌饲小承气汤和饥饱失常法造脾虚家兔模型[5-6]。1）将190 g大黄放入900 mL水中浸泡20 min，大火煎至沸腾后改小火再煎10 min，液体量补至1 140 mL，用纱布过滤。2）将190 g番泻叶加入1 140 mL沸水中搅拌浸泡5 min，用纱布过滤。3）将大黄液和番泻叶液各1 140 mL混合，加入152 g芒硝溶化，汤液最终浓度为12 mL含大黄4 g、番泻叶2 g、芒硝0.8 g（大黄5：芒硝1）。连续灌胃7 d，根据家兔体质量，灌胃量为24 mL·kg-1；同时喂饲量减半，自由饮水，造模同时记录家兔体质量、进食量变化，观察临床表现及大便情况，家兔便溏后改灌胃量为18 mL·kg-1。

1.3 实验仪器试剂及手法频率、压力值校对

1）实验主要仪器：实验采用上海邑成测试设备有限公司生产的调制器和校对器、动态数据采集器、Tekscan研制的MFF多点薄膜压力测试系统压力传感器、疆越科技研制730C型人工智能机械臂。2）实验主要试剂：ML-9、含5%炭末和2%CMC-Na的炭末混悬液。3）压力值校对：本次实验选取10名测试者，每名测试10次，选取10次中手法压力曲线均值较接近的5组为样本，根据以上方法求得平均值，再将10名操作者的平均值作为机械臂操作的压力标准操作值。将数据采集器连接电脑，调制器连接采集器，传感器连接调制器，将传感器置于家兔腹部进行手法操作，频率控制在低频每分钟150次、高频每分钟200次，同等压力值下操作1 min并观察电脑压力曲线变化，建立力—电压之间的拟合函数模型y=a+bx，并通过校对器得出曲线的标准力量值和频率值。将本次实验全部治疗组手法压力均值、实际频率及整个过程的平均频率都提前在电脑Dobot Studio系统上设置，采用智能机械臂模拟摩法操作，采用MFF多点薄膜压力传感器对手法操作过程的幅度、压力和频率进行监控，以保证机械臂模拟摩法的频率和力度严格控制在标准值上下不超过5%。

1.4 干预方法

1.4.1 穴位定位 采用比较解剖学和模拟人体经穴定位法结合进行新西兰家兔穴位定位[7]。中脘的腹中线上，脐与剑状软骨连线中点处；天枢的脐旁开3 cm处。

1.4.2 手法操作 家兔仰卧束缚在操作台上，2名助手握持住动物前后肢，剃除家兔腹部毛发，充分暴露穴位，并用标记笔标识穴位，将传感器用医用胶布固定在穴位上。在电脑上打开Dobot Studio软件输入机械臂力值参数，使机械臂远端人体拇指模型与家兔腹部皮肤表面垂直，于中脘、天枢（双）上行摩法操作，操作时观察电脑显示的压力曲线变化以保证手法力量与波形稳定。每穴操作5 min，共15 min，每日1次，连续10 d。K组、P组不进行手法干预，A组、I-1组使用频率每分钟150次进行手法操作，B组、I-2组使用每分钟200次进行手法操作，I-1组、I-2组每次手法干预前进行腹腔注射ML-9（2 mg·kg-1）。

1.5 取材阶段

所有新西兰家兔炭末灌胃前24 h予禁食不禁水，24 h后用含5%炭末和2%CMC-Na的炭末混悬液2.5 mL灌胃，30 min后将家兔麻醉、采血、处死、解剖，测量小肠总长度、炭末前沿长度，取胃称胃全重，将胃体剪开（沿胃大弯），将胃内残留物洗净，滤纸拭干称胃净重。

1.6 观察指标

1）脾虚观察指标：记录所有新西兰家兔每日的精神状态、毛色、体质量、饮食、二便等情况。2）小肠推进率：在最后1次干预治疗后照前法继续饲养，第2天晨起所有家兔禁食不禁水24 h，第3天早晨用含5%炭末和2%CMC-Na的炭末混悬液2.5 mL灌胃，30 min后将家兔麻醉、腹主动脉采血法采血，处死家兔，剖开腹腔，将幽门至回盲部的肠管取出并测量其长度，此即小肠的总长度，然后测出炭末推进长度，即幽门部到炭末前沿的长度，计算小肠推进率，计算公式为：小肠推进率（%）= 炭末前沿的长度（cm）÷小肠总长度（cm）×100%。

1.7 统计学方法

采用SPSS 26.0软件进行统计学分析，组间比较用t检验，多组间比较用方差分析，统计资料以均数±标准差（±s）表示，计量资料选择Bonferroni法检验。

2 结果

2.1 脾虚观察指标

造模前各组精神良好，动作敏捷，毛发光滑润泽，饮食正常，大便成形；造模后家兔精神萎靡，反应迟钝甚至胆怯易惊，毛发枯燥无光泽，体质量减轻，进食减少，大便或干硬或稀溏，难以成形；通过10 d的摩法干预治疗后A组、I-1组、I-2组家兔反应较前灵敏，毛发逐渐恢复光泽，体质量、饮食较前好转，大便成形。

2.2 摩法对脾虚家兔小肠推进率的影响

各组小肠总长度、炭末前沿长度如表1所示。摩法对各组小肠推进率的影响如表2、图1所示，其中：1）K组、A组、I-1组、I-2组小肠推进率均优于P组，差异有统计学意义（P＜0.05）；2）K组、A组、I-1组、I-2组两两之间无统计学差异（P＞0.05）；3）B组与K组存在统计学差异（P＜0.05），与P组、A组、I-1组、I-2组没有统计学差异，且B组小肠推进率高于P组但低于K组、A组、I-1组、I-2组；4）I-2组与P组存在统计学差异（P＜0.05），B组与P组无统计学差异（P＜0.05）。

图1 各组小肠推进率组间比较

表1 各组小肠总长度、炭末前沿长度 cm

表2 摩法对各组小肠推进率的影响

3 讨论

功能性消化不良（Functional Dyspepsia，FD）是指存在上腹痛、餐后饱胀不适、早饱感、食欲不振、嗳气等症状的功能性肠胃疾病[8]。FD在中医属“痞满”“胃脘痛”，其病机为脾虚气滞、胃失和降[9]。本实验通过苦寒泻下饥饱失常法对成年新西兰家兔进行造模，造模后家兔出现精神萎靡，反应迟钝甚至胆怯易惊，毛发枯燥无光泽，体质量减轻，进食减少，大便或干硬或稀溏，难以成形等症状，且K组、A组、I-1组、I-2组小肠推进率均优于P组，提示造模成功。

近年来已有相关研究表明[10-18]，不同频率的手法临床效应不同，对于FD家兔最适宜频率段为每分钟101～150次，在每分钟201～250次则治疗效果不佳。本实验上述两频率段进行对照，结果显示K组、A组、I-1组两两之间没有统计学差异（P＞0.05）；B组与K组存在统计学差异（P＜0.05），与P组、A组、I-1组、I-2组没有统计学差异，且B组小肠推进率高于P组但低于K组、A组、I-1组、I-2组，表明每分钟101～150次频率摩法能促进脾虚家兔消化功能恢复；而每分钟201～250次频率摩法不能使脾虚家兔恢复正常水平，且部分呈现损害效应。临床研究表明[19]，较低频率手法具有补益作用，较高频率手法具有泻实作用，符合“急摩为泻，缓摩为补”的中医理论，本实验B组使用高频率摩法对脾虚家兔进行手法干预，即虚者用了泻的手法，故家兔治疗无法起效，甚至有恶化效应，阐明了“补泻反则病益笃”的中医治疗原则。

推拿对于改善脾虚型FD家兔在临床和实验中已得到证实[20]。FD的病理机制主要是肠胃运动功能障碍，胃肠动力源自胃肠道平滑肌收缩，目前研究证实肌球蛋白轻链激酶（MLCK）通路与控制消化道平滑肌的收缩与舒张密切相关[21]，其他已知的信号通路还包括：PKC、c-kit/SCF及PAR-2介导的信号通路[22-23]、NF-κB炎症信号通路等。MLCK通路发挥作用主要是通过平滑肌细胞（smooth muscle cell，SMC）胞浆中的游离Ca2+与钙调蛋白（calmodulin，CaM）结合，形成Ca2+-CaM复合物，Ca2+-CaM激活MLCK催化肌球蛋白（Myosin），肌球蛋白磷酸化激活ATP酶，该酶水解ATP产生的能量使肌球蛋白和肌动蛋白相互作用，引发肌肉的收缩，故MLCK信号通路中包含了Ca2+、CaM、MLCK，以及肌球蛋白、ATP酶等多个靶点[24]。本实验基于MLCK信号通路探讨摩法对脾虚家兔胃肠功能的影响，采用智能机械臂对造模家兔进行摩法干预治疗，治疗后家兔反应较前灵敏，毛发逐渐恢复光泽，体质量、饮食较前好转，大便成形。且K组、A组、I-1组、I-2组两两之间没有统计学差异（P＞0.05），表明A组、I-1组、I-2组均起到治疗效果，脾虚家兔恢复至正常水平。ML-9是MLCK的特异性抑制剂，通过使用ML-9阻断MLCK信号通路的表达后，I-1组、I-2组仍能起到治疗作用，摩法仍能明显影响脾虚家兔的胃肠传输功能，表明其产生效应的机制可能是通过其他通路和靶点发挥作用。

本实验证明频率在每分钟101～150次的摩法对脾虚家兔症状有改善作用，能促进其胃肠蠕动功能，而超过每分钟200次的摩法对脾虚家兔治疗效果不佳，甚至有损害效应；摩法治疗的作用效应可通过MLCK信号通路实现，也可以通过一个或多个靶点、多个通路发挥作用，该结果可为下一步相关分子蛋白信号通路研究提供参考。