HS-GC法测定盐酸苯达莫司汀原料药中5种残留溶剂

杜 超，卓秋琪

1.山东罗欣药业集团股份有限公司(山东 临沂 276000)

2.深圳万乐药业有限公司(广东 深圳 518000)

盐酸苯达莫司汀，4-{5-[双-(2-氯乙基)氨基]-1-甲基-2-苯并咪唑基}-丁酸盐，是水溶性双功能烷化药物。其机制是通过烷基化，使DNA的单链与双链交联，干扰DNA的功能与合成，从而发挥抗肿瘤作用。盐酸苯达莫司汀合成是20世纪60年代一位德国科学家提出，并在苯丁酸氮芥的基础上进行改造，从而拥有3个活性基团，其独特的结构使其具有烷基化和抗代谢双重治疗作用[1-5]。虽然目前国内多家医药公司已对盐酸苯达莫司汀进行仿制与研究。但其使用与推广的程度却远远不够。相对于其它化疗药物，盐酸苯达莫司汀及其制剂产品价格更加低廉，在医药市场的竞争下更具优势[6-13]。

目前盐酸苯达莫司汀相关研究主要涉及药理、临床疗效以及体内代谢的研究而体外质量研究的相关报道较少。同时，在本产品的制备工艺中，残留溶剂是检验成品质量优劣的一个重要指标。在残留溶剂检验方法中，气相色谱法(GC)具有准确度高、分析速度快、操作简便且检测数据直观、清晰等优势。所以建立测定盐酸苯达莫司汀中残留溶剂的顶空气相色谱法(HS-GC)，以便有效检测其残留量情况，确保产品安全性[14-18]。

1 仪器与试剂

1.1主要仪器电子天平(METTLER TOLEDO，型号：XP205)；气相色谱仪(Agilent Technologies Inc，型号：Agilent 7890A)。

1.2主要试剂盐酸苯达莫司汀(批号：Y191201、Y191202、Y191203，厂家：深圳万乐药业公司)；二甲基亚砜(Fisher Chemical，批号：170606)；甲醇(Fisher Chemical，批号：182704)；乙醇(Merck，批号：K50144627815)；二氯甲烷(OCEANPAK ALEXATIVE CHEMICAL，批号：Di0010798)乙酸乙酯(Fisher Chemical，批号：166509)；四氢呋喃(Avantor Performance Materials，批号：0000186814)。

2 方法与结果

2.1色谱条件Agilent DB-624毛细管柱为色谱柱；流速1.0 mL/min；分流比10∶1；起始温度40 ℃，维持4 min，以30 ℃/min的速率升温至180 ℃，维持10 min；检测器为火焰离子化检测仪(FID)；检测器温度250 ℃；进样口温度220 ℃；平衡温度80 ℃，平衡时间30 min。

2.2溶液的制备

2.2.1 供试品溶液 取盐酸苯达莫司汀0.2 g，置顶空瓶中，加二甲基亚砜(DMSO)2 mL溶解，即得。

2.2.2 对照品溶液 分别称取甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯与四氢呋喃各适量，加DMSO稀释制成每1 mL中含甲醇300 μg、乙醇500 μg、二氯甲烷60 μg、乙酸乙酯500 μg、四氢呋喃72 μg的混合贮备溶液。取1 mL贮备液至10 mL量瓶中，并用DMSO定容至刻度，即得。

2.3专属性试验和系统适用性分析按“2.2.1”项制备对照品溶液，取空白溶剂(即DMSO)和对照品溶液各2 mL，分别置顶空瓶中，密封，记录图谱，考察系统适用性和测定方法的专属性(表1，图1～2)，分离度>1.5即为合格。甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯与四氢呋喃5种有机溶剂在确定的毛细管气相色谱条件下获得良好地分离，溶剂DMSO不存在干扰5种残留溶剂测定的成分，样品中其它成分也不影响相应5种残留溶剂的检测结果。各相邻色谱峰的分离度分别为9.84、13.74、19.36、2.80、52.20；5种有机溶剂的理论塔板数分别为14 867、21 328、38 620、143 959、147 040。

图1 溶剂DMSO气相典型色谱图

图2 对照品溶液气相典型色谱图

表1 对照品溶液气相数据

2.4线性、定量限、检测限分析按“2.2.2”项制备混合溶剂贮备溶液，依次精密量取0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 mL，分别置于10 mL量瓶中，定容至刻度，取2 mL置顶空瓶中，密封，分析，结果显示各残留溶剂在各浓度范围内线性关系良好，见表2。按“2.2.2”项制备混合溶剂贮备溶液，取上述各贮备溶液，逐级稀释，当S/N≥10时，即为定量限，当S/N≥3时，即为检测限，见表2。其试验结果符合测定结果。

表2 5种残留溶剂线性关系、定量限、定量限试验结果

2.5准确度分析精密称取样品1.0 g共9份，分别至10 mL量瓶中，分别精确移取0.8、0.8、0.8、1.0、1.0、1.0、1.2、1.2、1.2 mL线性贮备液(含甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃分别为3.01，5.01，0.61，5.01，0.73 mg/mL)至各量瓶中，定容至刻度。取2 mL置顶空瓶中，密封，分析，各残留溶剂的RSD在0.40%～0.90%之间，符合准确度的要求，见表3。

表3 盐酸苯达莫司汀回收率试验结果

2.6精密度

2.6.1 日内、日间精密度 按“2.2”项下制备混合溶剂贮备溶液，取2 mL置顶空瓶中，连续进样6次，记录图谱，连续3 d，同法操作，日内精密度(共3 d)5种残留溶剂的RSD分别为0.52%、0.78%、1.14%、1.13%、1.08%，符合日内精密度RSD<2.0%的要求，见表4～6。

表4 日内精密度试验结果(第1 d)

表5 日内精密度试验结果(第2 d)

表6 日内精密度试验结果(第3 d)

2.6.2 重复性 精密称取本品约1.0 g，共6份，分别置于10 mL量瓶中，并依次加入“2.2.2”项下混合对照品贮备液各1 mL，混匀并定容至刻度。量取供试液2 mL，顶空进样，记录图谱，结果显示，各残留溶剂的RSD均<2.0%，重复性良好，见表7。

表7 盐酸苯达莫司汀重复性试验结果

2.7耐用性分析将原始色谱条件中的一项改动，柱温设定为(40±2) ℃，流速调为(1.0±0.2)mL/min；进样口温度设定为(220±10) ℃，分流比设定为(10±2)∶1；检测器温度设定为(250±10)℃；顶空瓶平衡温度设定为(80±5)℃；将原始色谱条件中的色谱柱DB-624(320 μm×30 m，0.18 μm)更换为ZB-624(530 μm×30 m，3.00 μm)，然后对样品进行测定，结果显示当设定的色谱条件略有变化时，各成分相对保留时间，理论塔板数基本稳定，且各成分分离度良好，该法耐用性良好，见表8。

表8 盐酸苯达莫司汀耐用性分析

2.8供试品中残留溶剂的测定按“2.1”项下色谱条件与测定法，进行测定，结果显示3批供试品中各残留溶剂均未检出，此法适用于盐酸苯达莫司汀的残留溶剂的检查。

3 讨论

化学原料药的合成过程中不可避免会使用各种有机溶剂溶解各种反应原料，有时选择合适的溶剂还可在产品精制过程提高产量、决定药物的纯度、晶型。然而，有机溶剂残留在药物中，如果超出安全阈值时，就会对人体产生危害。根据该方法的检测结果，原料药合成过程中使用的有机溶剂均未检出，符合中国药典对有机残留物的要求，可为药品的生产上市提供有效技术支持。

对于色谱柱的选择，本次测定中因5种有机溶剂极性相差较大，且为使待测溶剂得到最大兼容和让系统适应性得到最优化，故选择中性色谱柱(DB-624)。

对于平衡温度的选择，为了兼顾效率和灵敏度，一般选择被测有机溶剂沸点偏高的温度作为平衡温度。本实验5种溶剂，沸点约在39.75～78.5 ℃，本研究选择了80 ℃作为平衡温度。平衡时间，只需所有溶剂峰面积增加并趋于平缓时即可；对于空白溶剂的选择，为了准确测定各残留溶剂含量，需选择原料药(API)和待测溶剂能够完全溶解的溶剂，并且不干扰其他色谱峰。DMSO具有极性高、沸点高、热稳定性好，可溶于大多数有机物质。同时，在测定时并不干扰其他主成分，因此选择DMSO作为溶剂。

本实验建立的HS-GC准确、灵敏，可用于盐酸苯达莫司汀中残留溶剂的测定。