血清ANA及AMA在自身免疫性肝病患者中的表达

(郑州市第一人民医院检验科，河南 郑州 450000)

自身免疫性肝病(ALD)主要包括自身免疫性肝炎(AIH)、原发性胆汁性胆管炎(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)三种类型，不同类型患者的治疗方法存在一定差异。AIH以泼尼龙、硫唑嘌呤等糖皮质激素药物治疗为主；PBC治疗重点为保护胆管细胞及肝细胞，其中熊去氧胆酸为首选药物；而PSC治疗重点在于控制并发症及监测肝损伤，多用抗生素、熊去氧胆酸、胆汁酸螯合剂等联合治疗[1]。因此，明确ALD患者类型十分必要。抗核抗体(ANA)是一组对细胞核内脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、蛋白或这些物质的分子复合物产生的自身抗体，可特征性出现于许多自身免疫性疾病中[2]。抗线粒体抗体(AMA)是一种无器官特异性及种属特异性的自身抗体，常用于黄疸及肝病病因的辅助诊断[3]。而ALD是机体自身免疫异常所引起的一组肝胆损伤性疾病，因此，推测血清ANA、AMA可能对ALD患者类型具有一定诊断价值，本研究对此进行了相关分析。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性收集2019年8月—2021年2月本院收治的76例ALD患者临床资料及31例健康人群体检资料。纳入标准：ALD诊断符合参考文献[4]中相关标准，且经肝生化、影像学、肝穿刺活检确诊；资料完整；ALD患者均为单一疾病分型。排除标准：伴艾滋病病毒及丙型、戊型肝炎病毒等感染者；合并系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等其他自身免疫性疾病者；有服用肝毒性药物史者；非酒精性脂肪肝病史者；反复住院的重复病例。ALD患者：男23例，女53例；类型：AIH 30例，PBC 22例，PSC 24例；年龄30-58岁，平均(44.13±8.15)岁。健康人群：男11例，女20例；年龄31-57岁，平均(44.27±9.30)岁。

1.2方法 采集纳入研究者清晨空腹外周肘静脉血5 mL，以3500 r/min速率离心10 min，离心半径10 cm，取血清，采用间接免疫荧光法测定血清ANA、AMA表达情况。将人喉癌上皮细胞系(HEp-2)细胞、猴心肌与肝脏组织及大鼠胃、肝、肾组织的冰冻切片作为抗原，以生物薄片技术将带有细胞与组织的切片组成一个反应区，将每个患者血清平均分为3份，分别以1∶100、1∶320、1∶1000的比例稀释后与各种组织细胞薄片中的细胞反应，以室温孵育30 min，特异性抗体与相应抗原结合后，用磷酸盐缓冲盐水冲洗3次，浸泡5 min后加入异硫氰酸荧光素标记的羊抗人IgG抗体，室温孵育30 min，磷酸盐缓冲液冲洗3次，浸泡5 min后排除多余液体，甘油封片后使用荧光显微镜观察组织、细胞中是否出现特异性荧光。将组织、细胞中出现特异性荧光且血清稀释度≥1∶100判定为检测结果为血清ANA、AMA表达呈阳性。

1.3数据处理 采用SPSS 25.0软件处理数据。绘制受试者工作特征曲线(ROC)并计算曲线下面积(AUC)值，以检验血清ANA、AMA阳性表达对ALD患者不同类型的诊断价值；检验水准α=0.05。

2 结果

2.1不同类型ALD患者血清ANA、AMA阳性表达情况 ALD患者血清ANA、AMA阳性表达率均高于健康人群，其中AIH患者血清ANA阳性表达率最高，PBC患者血清AMA阳性表达率最高。见表1。

表1 不同类型ALD患者血清ANA及AMA阳性表达情况[n(%)]

2.2血清ANA、AMA阳性表达对ALD患者不同分型的诊断价值 分别将纳入人群AIH、PBC、PSC患病情况作为状态变量，将患者血清ANA、AMA阳性表达情况作为检验变量，绘制ROC曲线，结果显示，血清ANA、AMA阳性表达诊断AIH的AUC分别为0.917、0.534，血清ANA阳性表达对AIH具有一定诊断价值，血清AMA阳性表达对AIH无诊断价值；血清ANA、AMA阳性表达诊断PBC的AUC分别为0.643、0.916，血清AMA阳性表达对PBC具有一定诊断价值，血清ANA阳性表达对PBC无诊断价值；血清ANA、AMA阳性表达诊断PSC的AUC分别为0.546、0.526，二者对PSC均无诊断价值。见表2。

表2 血清ANA、AMA阳性表达对ALD患者不同类型的诊断价值

3 讨论

ALD可引发乏力、嗜睡、黄疸、皮肤瘙痒等症状，若未及时治疗，疾病可进展至肝硬化、肝衰竭，部分患者甚至可进展为恶性肿瘤[5]。但ALD类型较多，不同类型的发病原因不同，治疗方法也存在一定差异。因此，临床需对ALD患者类型进行准确判断，以便制定科学、有效的治疗方案。

ALD患者可出现正常免疫耐受机制的破坏，体内可出现多种自身抗体阳性[6]。ANA、AMA均为自身抗体的一种，正常情况下呈阴性，在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、原发性、胆汁性肝硬化等自身免疫性疾病中呈不同程度的阳性表达。因此，推测血清ANA、AMA可用于诊断ALD患者的疾病类型。本研究结果显示，ALD患者血清ANA、AMA阳性表达率均高于健康人群，其中AIH患者血清ANA阳性表达率最高，PBC患者血清AMA阳性表达率最高，PSC患者血清ANA、AMA阳性表达率均较低。提示血清ANA、AMA阳性表达对ALD类型具有一定诊断价值。分析原因在于：血清ANA是自身免疫性疾病的重要血清学指标，其阳性表达可能会与细胞膜上的蛋白相结合，启动细胞毒性作用，破坏肝细胞，导致肝脏炎症性坏死，破坏肝小叶的正常结构，降低肝脏代谢功能，并能促进纤维母细胞增生及合成胶原纤维，导致肝纤维化，从而诱发AIH[7]。因此，当血清ANA阳性表达率较高时，提示AIH发生风险较高。血清AMA阳性表达可特异性攻击肝内胆管上皮细胞的线粒体抗原，促进胆管上皮细胞凋亡，而胆管上皮细胞是固有免疫系统中抵御胆管内病原体刺激的第一道防线，当其受损时可能会引发肝脏胆汁代谢障碍，诱发胆管炎症；且胆管上皮细胞凋亡还会导致细胞内自身抗原释放，激活机体固有免疫系统，促进巨噬细胞分泌相应的细胞因子进一步损伤肝内胆管细胞，从而形成恶性循环，诱发PBC[8-9]。因此，当血清AMA阳性表达率较高时，提示PBC发生风险较高。为验证假说，进一步绘制ROC曲线，结果显示，血清ANA阳性表达对AIH具有一定诊断价值，血清AMA阳性表达对PBC具有一定诊断价值。

综上所述，血清ANA、AMA在ALD患者中的阳性表达率较高，其中血清ANA阳性表达对AIH具有一定诊断价值，血清AMA阳性表达对PBC具有一定诊断价值，建议临床可通过检测ALD患者血清ANA、AMA阳性表达情况对疾病类型进行鉴别诊断。