高危型HPV阳性患者血清中miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平对宫颈癌发生的临床意义

刘 铭 吴坤英 郭宝芝 宋芷霜

宫颈癌(cervical cancer)作为常见的妇科恶性肿瘤，发病率以及死亡率均占世界癌症前五，多发生于发展中国家[1]。人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV) 持续感染是宫颈癌发生的主要危险因素，其中高危型HPV(HPV16和HPV18)与宫颈癌密切相关[2]。MicroRNA(miRNA)作为非编码内源性小RNA，参与细胞的增殖、分化以及凋亡等生物过程，有研究报道miRNA在恶性肿瘤中起到关键性作用[3]，其中miR-130b-5p和miR-142-5p在宫颈癌中异常表达，并参与肿瘤的发生发展，有望成为宫颈癌的生物性指标[4]。但是目前关于miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平与高危型HPV阳性患者以及对宫颈癌的预测的相关研究较少，具体机制尚不明确。本研究通过对高危型HPV阳性患者的表达水平的检测以及对宫颈癌的临床价值研究，旨在为寻找高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的预测指标提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取2017年6月至2019年6月我院收治的高危型HPV阳性宫颈癌患者76例，年龄22～81岁，平均(58.31±9.54)岁。纳入标准：①患者符合《宫颈癌及癌前病变规范化诊疗指南(试行)》[5]，经病理确诊为宫颈癌；②采用第2代杂交捕获技术(HC 2)检测患者高危型HPV，结果呈阳性；③患者的临床资料完整；④患者及家属已签署知情同意书。排除标准：①合并患有妇科炎症患者；②合并其他恶性肿瘤；③合并处于妊娠状态患者。另选取同期因良性宫颈病变行手术切除的高危型HPV阳性患者80例作为对照组。

1.2 血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平检测

采集患者外周静脉血5 ml，分离血清，并于-20 ℃保存待检。采用RNA提取试剂盒，严格按照产品说明书步骤提取样本RNA，使用ABI 7500型荧光定量 PCR仪进行荧光定量PCR反应。以下为RT-PCR扩增条件：95 ℃预变性10 min，95 ℃ 变性15 s，60 ℃ 复性60 s，以上步骤共重复45个循环。采用2-ΔΔCt法计算miR-130b-5p和miR-142-5p的相对表达水平。引物送上海生工生物有限公司合成，引物如下：miR-130b-5p：F:5'-CGUGUUCACAGCGGACCUUGAU-3'，R:5'-AUCAAGGUCCGCUGUGAACACG-3'；miR-142-5p：F:5'-AACAAATCG GACTGC TTC TAC-3'，R:5'-AGC CACCATCATCCATAA A-3'。

1.3 高危型HPV检测方法

通过使用一次性取样毛刷插入患者宫颈管，并以顺时针方向旋转 5 圈后，取出沾有宫颈分泌物的一次性取样毛刷，将其放置在特定的保存液中待检。采用HC 2法检测13种高危型HPV(包括HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-68)。最后检测结果通过相对光单位/临床阈值(Rlu/Co)表示，若化验比值Rlu/Co≥1.0则为阳性，若Rlu/Co<1.0为阴性。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的单因素分析

高危型HPV阳性患者发生宫颈癌与年龄、是否绝经、有无分娩史、HPV分型无关(P均>0.05)，与血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平有关(P均<0.05)，宫颈癌患者血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平显著高于对照组(P均<0.05)，见表 1。

表1 高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的单因素分析(例

2.2 高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的多因素分析

多因素分析结果发现血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平是影响高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 高危型HPV阳性患者与宫颈癌发生的多因素分析

2.3 血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平对宫颈癌的诊断价值

根据ROC曲线分析可知，血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平评估宫颈癌发生AUC分别为0.737，0.746，联合检测AUC为0.833，见表3及图1。

表3 血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平以及联合检测对宫颈癌的诊断价值ROC分析结果

图1 血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平以及联合检测对宫颈癌的诊断价值ROC曲线

2.4 血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平与宫颈癌患者临床特征的关系比较

高危型HPV阳性宫颈癌患者血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平与年龄、是否绝经、有无分娩史、HPV分型无关(P均>0.05)，见表4。

表4 血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平与患者临床特征的关系

3 讨论

宫颈癌作为妇科恶性肿瘤，发病率和死亡率均高，虽然目前临床的诊断技术如宫腔镜、超声等在不断进步，但是依然针对的是中晚期的宫颈癌患者，而中晚期患者治疗效果往往不佳[6]。HPV是双链DNA病毒，是以含遗传物质的闭环双链DNA组成核心，72个壳粒组成外围，形成20面体[7]。根据生物特性以及致癌性，分为高危型和低危型HPV[8]。高危型HPV以HPV 16、18、31、33等亚型为主，可引起宫颈上皮内瘤以及宫颈癌的发生，低危型HPV是以HPV6、11、44等亚型为主，可引起尖锐湿疣的发生[9]。高危型HPV持续感染是导致宫颈癌变的重要原因之一[10]，对高危型HPV患者尽早筛查、治疗，可有效减少宫颈癌患者的死亡率，而关于预测高危型HPV患者是否发生宫颈癌的有效生物指标，是目前的临床研究所关注的热点。

MiRNA是一类小分子RNA，通过参与调控靶基因来影响细胞的增殖、分化以及凋亡等过程[11]，近年来已有研究报道指出miRNA参与肿瘤的发生发展以及癌变等进程[12]，其中也参与了妇科肿瘤的发生发展过程[13]，主要是通过靶向mRNA 3'UTR 区域来对基因表达量进行调控[14]。目前，关于miRNA水平的研究已成为肿瘤方向的研究热点。在宫颈癌的研究中也有miRNA的相关报道[15]。其中有研究表明miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平与宫颈癌均存在相关性[16]。有研究称miR-130b-5p参与了宫颈癌干细胞的增殖、分化以及凋亡的过程，促进了宫颈癌的发生发展[17]。还有miR-142-5p在宫颈癌中的过度表达增加了宫颈癌细胞增殖、迁移以及侵袭能力[18]。结合本研究发现高危型HPV阳性患者发生宫颈癌与年龄、是否绝经、有无分娩史、HPV分型无关，这说明年龄、绝经、分娩史以及HPV分型对宫颈癌发生的影响不显著，这与目前已有关于宫颈癌发生的危险因素的研究一致[17]。本研究还发现宫颈癌患者血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平显著高于对照组。多因素结果分析显示血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平是影响高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的独立危险因素，进一步验证了血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平在宫颈癌患者中出现表达失调，也为未来选择合适的宫颈癌预测指标提供了思路。

本研究还发现血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平诊断宫颈癌的AUC分别为0.737，0.746，联合检测AUC为0.833，联合检测的线下面积均高于单独选择miR-130b-5p或miR-142-5p水平进行评估的预测价值，这说明了在选择合适的生物标志物进行宫颈癌预测时可以考虑联合检测的方式，其预测效果可能比单独预测具有一定的优势。

综上，本研究证实了血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平对宫颈癌的临床价值，可作为一种有效预测宫颈癌的生物标志物。然而本研究依然有一定的不足，需要更具前瞻性以及大规模的研究来进一步验证。