HLA-F及miR-93在鼻咽癌中的表达及其对调强放疗预后评估的价值

王皓颖 赵一电 梁垲 王晓敏

【摘要】 目的 探究人類白细胞抗原F（human leukocyte antigen-F，HLA-F）及微小RNA-93（microRNA-93，miR-93）在鼻咽癌中的表达及其对调强放疗预后评估的价值。

方法 选取2017年1月～2018年1月安阳市肿瘤医院收治的鼻咽癌患者72例，给予调强放疗并获取患者治疗前后的HLA-F和miR-93的表达水平。对患者进行随访，分析HLA-F、miR-93表达水平与患者预后的关系。

结果 HLA-F高表达29例，低表达43例;miR-93高表达45例，低表达27例。HLA-F低表达患者的肿瘤直径≥5 cm、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期的比例明显高于HLA-F高表达患者（P<0.05）;miR-93低表达患者的肿瘤直径<5 cm、无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的比例高于miR-93高表达患者（P<0.05）。多因素Cox回归分析结果显示，肿瘤直径≥5 cm、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期均为鼻咽癌患者调强放疗后预后差的独立危险因素（P<0.05）。对所有患者持续随访3～36个月，72例患者中有19例死亡，存活53例，生存率为73.61%。生存组与死亡组患者的肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期比较有统计学意义（P<0.05）。ROC曲线分析显示，HLA-F预测鼻咽癌患者调强放疗后生存状态的AUC为0.600，准确性较低;miR-93预测的AUC为0.875，准确性良好;二者联合的预测AUC为0.930，准确性高。

结论 HLA-F的表达对鼻咽癌患者调强放疗预后评估价值较低，miR-93的评估价值良好，但二者联合的评估价值更高，可作为鼻咽癌患者预后评估的重要参考。

【关键词】 HLA-F;miR-93;鼻咽癌;调强放疗

中图分类号：R739.62   文献标志码：A   DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.01.004

Expression of HLA-F and miR-93 in nasopharyngeal carcinoma and their value in evaluating the prognosis of intensity-modulated radiotherapy

WANG Haoying， ZHAO Yidian， LIANG Kai， WANG Xiaomin

（Radiotherapy Department， The Fourth Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology—Anyang Cancer Hospital， Anyang 455000， Henan， China）

【Abstract】 Objective To explore the expression of human leukocyte antigen-F （HLA-F） and microRNA-93 （miR-93） in nasopharyngeal carcinoma and their value in evaluating the prognosis of intensity-modulated radiotherapy.

Methods 72 patients with nasopharyngeal carcinoma admitted to Anyang Cancer Hospital from January 2017 to January 2018 were selected to receive intense-modulated radiotherapy， and the expression levels of HLA-F and miR-93 before and after treatment were recorded. The patients were followed up to analyze relationship between the expression levels of HLA-F and miR-93 and the prognosis of the patients.

Results 29 cases had high expression of HLA-F and 43 cases had low expression; 45 cases had high expression of miR-93， and 27 cases had low expression. The proportion of tumor diameter≥5 cm， lymph node metastasis and clinical stage Ⅲ-Ⅳ in patients with low HLA-F expression was significantly higher than that in patients with high HLA-F expression （P<0.05）. The proportion of tumor diameter<5 cm， no lymph node metastasis and clinical stage Ⅰ-Ⅱ in patients with low miR-93 expression was significantly higher than that in patients with high miR-93 expression（P<0.05）. Multivariate Cox regression analysis showed that tumor diameter≥5 cm， lymph node metastasis， and clinical stage Ⅲ-Ⅳ were independent risk factors for the poor  prognosis of patients with nasopharyngeal carcinoma after intensity-modulated radiotherapy （P<0.05）. All patients were followed up for 3-36 months， 19 of 72 patients died， 53 patients survived， and the survival rate was 73.61%. There were statistically significant differences in the tumor diameter， lymph node metastasis， and clinical stage between survival group and death group （P<0.05）. ROC curve analysis showed that the AUC of HLA-F in predicting the survival state of patients with nasopharyngeal carcinoma after intensity-modulated radiotherapy was 0.600， which was low in accuracy; the AUC predicted by miR-93 was 0.875， which had good accuracy; combined prediction AUC of the two was 0.930， which had high accuracy.

Conclusion The expression of HLA-F is of low value in evaluating the prognosis of patients with nasopharyngeal carcinoma， and the evaluation value of miR-93 is good. The combined evaluation value of the two is higher， which can be used as an important reference for the prognosis evaluation of patients with nasopharyngeal carcinoma.

【Key words】 HLA-F; miR-93; nasopharyngeal carcinoma; intensity-modulated radiotherapy

调强放疗已经成为治疗鼻咽癌的常用治疗方式，但其治疗效果并未达到理想地步。通过对患者的预后效果进行评估，给予针对性的分流和疗效监测，可帮助提升治疗效果并节约医疗资源。鼻咽癌作为免疫相关性肿瘤之一，其表皮生长因子受体在肿瘤细胞浸润、转移均发挥着重要作用，而人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）已被证实与表皮生长因子受体存在相关性[1]。人类白细胞抗原F（human leukocyte antigen-F，HLA-F）为HLAI类分子之一，可体现患者体内免疫系统的情况，研究发现HLA-F在肿瘤患者中异常表达[2]，但是HLA-F与鼻咽癌发生、发展及预后的价值相关研究文献不多。微小RNA-93（microRNA-93，miR-93）被报道能通过靶向调控多种基因改善鼻咽癌肿瘤细胞的生长和侵袭[3]，但关于miR-93对于鼻咽癌预后价值的文献较少。为了解HLA-F和miR-93与鼻咽癌患者调强放疗预后的关系，并分析鼻咽癌患者调强放疗后的生存时间，故我们开展此次研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月～2018年1月在我院确诊为鼻咽癌的患者72例，所有患者均符合以下标准。纳入标准：（1）为首次确诊为鼻咽癌且经病理组织学确诊者;（2）为首次接受治疗且符合调强放疗指征者[4];（3）本研究经医院伦理委员会批准，且所有患者及家属均了解实验过程并签署知情同意书。排除标准：（1）合并患有其他重要脏器功能障碍类疾病者;（2）有化疗史或其他相关治疗史者;（3）中途失联、退出、资料不全或依从性差者。患者中男性52例，女性20例，年龄为41～72岁，平均（56.11±15.24）岁。

1.2 方法

所有患者均接受调强放疗，患者取仰卧体位，利用CT模拟机确定扫描中心，层厚3 mm;完成CT扫描后进行图像重建，放疗师以此为根据确定高危临床靶向体积和低危临床靶向体积;高危临床靶向体积和低危临床靶向体积的用药均为2.0 Gy/f，总量保持在55 Gy;首个疗程为28次/6周，随后根据患者情况适当放缓放疗的频率;患者每3个月进行一次复查。

对所有患者持续随访3～36个月，中位随访时间22个月，以了解患者的预后情况，以电话随访或门诊登记访问为主，死亡患者以死亡时间为随访截止时间。生存疗效评价指标：记录患者从随机化（random assignment）开始至因任何原因死亡（death）的时间（失访患者为最后一次随访时间;研究结束时仍然存活患者，为随访结束日），即记录总生存期（OS，overall survival）。中位总生存（mOS）：又称半数生存期，表示恰好有50%的个体尚存活的时间。由于截尾数据的存在，计算不同于普通的中位数，利用生存曲线，令生存率为50%时，推算出生存时间。

1.3 观察疗效指标及标准

所有患者均于入院当天（治疗前）和治疗结束后（治疗后）取病理学组织，采用免疫人HLA-F单克隆抗体化学试剂检测癌组织中HLA-F的表达，按试剂操作说明进行操作。miR-93检测：取患者外周血液5 mL放置在含有促凝剂的采血管中，并于1 h内放置低于4℃的环境中保存，随后进行常规离心15 min;取上层血清进行检测以了解患者血液中miR-93的表达水平，取血清标本，提取总RNA（Bioteke公司），纯化后紫外分光光度计测定RNA浓度、纯度，逆转录cDNA，应用miRNA茎环引物及PCR引物上实时定量PCR仪（ABI公司，美国）检測（U6为内参基因），条件95℃预变性10 min、95℃变性15 s、60℃ 1 min，40个循环。

由专业的病理科医师对每张切片5个400倍视野以染色强度结合阳性细胞的百分比进行综合积分，积分标准：（-）为阴性记0分，（+）为弱阳性记1～4分，（++）为中度阳性记5～8分，（+++）为强阳性记9～12分;将0～4分定为低表达，5～12定为高表达[5]。鼻咽癌分期参照标准为第八版美国癌症联合委员会/国际抗癌联盟鼻咽癌临床病理分析系统。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0进行数据统计分析。符合正态分布的计量资料以（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验，计数资料以[n（%）]表示，组间比较采用卡方检验。采用logistic回归分析鼻咽癌患者调强放疗后预后的影响因素，采用ROC曲线评价HLA-F、miR-93对调强放疗生存结局的预测价值。检验水准：α=0.05，双侧检验。

2 结  果

2.1 HLA-F和miR-93表达与患者临床病理特征的关系

72例鼻咽癌患者中HLA-F高表达29例，低表达43例;miR-93高表达45例，低表达27例。HLA-F、miR-93高表达与患者的性别、年龄无关（P>0.05）;HLA-F低表达患者的肿瘤直径≥5 cm、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期的比例明显高于HLA-F高表达患者（P<0.05）;miR-93低表达患者的肿瘤直径<5 cm、无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的比例明显高于miR-93高表达患者（P<0.05）。见表1、表2。

2.2 鼻咽癌患者调强放疗后预后的影响因素分析

肿瘤直径≥5 cm、有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期是鼻咽癌患者调强放疗后预后差的独立危险因素（P<0.05）。见表3。

2.3 预后与临床病理特征的关系

对所有患者持续随访3～36（20.37±4.88）个月，无患者失联或中途退出。72例患者中19例死亡，53例存活，生存率为73.61%。按照预后情况将患者分成生存组和死亡组。两组患者的年龄、性别等对比无统計学意义（P>0.05），但两组患者的肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期对比有统计学意义（P<0.05）。肿瘤直径≥5 cm的平均生存期为（25.63±1.11）个月，有淋巴结转移的平均生存期为（24.81±1.03）个月，临床分期为Ⅲ～Ⅳ期的平均生存期为（24.81±1.05）个月。见表4、表5及图1。

2.4 HLA-F和miR-93的ROC曲线分析

ROC曲线分析显示，HLA-F预测鼻咽癌患者调强放疗后生存状态的AUC为0.600，准确性较低;miR-93预测的AUC为0.875，准确性良好;二者联合预测的AUC为0.930，准确性更高。以ROC曲线cutoff预测HLA-F、miR-93二者联合预测死亡，结果显示，联合预测的敏感度和特异度分别为86.3%和93.1%。见表6、图2。

3 讨  论

目前肿瘤治疗已经进入免疫时期，即在给予调强放疗、靶向治疗等外力帮助的同时，注重提升患者自身的免疫力以达到增强消灭体内肿瘤细胞的效果[6]。本组案例中，生存组和死亡组患者一般资料比较，其临床分级之间存在明显差异。死亡组患者的Ⅲ～Ⅳ期的人数占比明显高于生存组的患者，可见患者的病情程度对其预后也会产生影响。除临床分期外，癌组织或血清中因子差异表达也可帮助临床医师评估鼻咽癌调强放疗的预后。

研究证实[7]，HLA参与了鼻咽癌免疫调节，HLA-F属非典型HLAI类抗原，可维持免疫耐受体系，改善免疫系统失调等情况。国内外大量研究表明[8～10]，HLA-F表达可反映肿瘤浸润、淋巴结转移、血管和淋巴管侵犯等，因此，其可作为鼻咽癌诊断或预后的预测指标。本研究发现，在HLA-F、miR-93低表达中，肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期分布比例均存在差异。综合回归分析结果看，HLA-F表达水平低、miR-93表达水平高患者病死率更高。这可能是死亡组患者经过治疗后，其自身免疫系统改善效果不佳，致使HLA-F表达量无明显变化。但也可能是由于死亡组患者的病例数较少，无法进行有效的统计学差异研究比较。为了进一步分析鼻咽癌患者预后与临床特征的关系，本研究随访发现，生存和死亡患者的肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期均存在差异。进一步说明鼻咽癌患者的肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期不仅影响HLA-F、miR-93表达水平，还与预后结果息息相关。做进一步预测分析，发现HLA-F可预测鼻咽癌患者调强放疗后死亡情况，其预测AUC为0.600，但预测准确性较低，敏感度和特异度分别为70.2%与87.9%。可见，如果仅观察HLA-F的表达情况是无法就鼻咽癌患者的预后情况进行有效的预测评估。

有研究显示[11～13]，miR-93在多种肿瘤中差异表达。本研究结果显示，生存组与死亡组在治疗前后的miR-93表达均有明显差异，且两组患者在治疗后miR-93均得到明显改善。经过ROC曲线分析，miR-93的预测AUC为0.875，预测准确性良好，敏感度和特异度分别为88.7%与84.2%。进一步表明，miR-93表达水平可对鼻咽癌患者的预后进行评估。但与HLA-F或miR-93单独诊断相比，二者联合诊断鼻咽癌调强放疗死亡的AUC高达0.930，特异度提升至93.1%。这可能是，HLA-F表达与肿瘤细胞逃逸机体免疫杀伤能力，HLA-F表达降低提示肿瘤细胞的转移[14]，miR-93表达则与鼻咽癌细胞的侵袭、增殖相关[15]，因此，综合考虑HLA-F或miR-93表达，既能反映鼻咽癌恶性生物学行为进程，又可以反映患者免疫功能，从而提高对预后不良结局的预测效果。

综上所述，鼻咽癌患者接受调强放疗后，单独观察HLA-F表达对其预后效果评估价值较低，而单独观察miR-93表达水平对其预后效果评估价值良好，二者联合有较高评估价值，对于鼻咽癌患者预后评估具有重要的参考价值。但由于此次实验研究对象较少，随访时间较短，无法就HLA-F与miR-93之间的协作机制进行更进一步的研究。

参 考 文 献

[1]  CHUA M L K， KAMIS H B， LOONG S L.Nasopharyngeal carcinoma[J].Am Soc Clin Oncol Educ Book， 2020， 3（1）：236.

[2]  NING L，KO J M，YU V Z，et al.Nasopharyngeal carcinoma MHC region deep sequencing identifies HLA and novel non-HLA TRIM31 and TRIM39 loci[J].Commun Biol，2020，3（1）：759.

[3]  LI J，ZHONG X Y，WANG X J，et al.miR-93 regulates liver tumor initiating cells expansion and predicts chemotherapeutic response of patients[J].Arch Biochem Biophys，2021，703：108871.

[4]  全国肿瘤防治研究办公室，中国抗癌协会.中国常见恶性肿瘤诊治规范.第五分册，鼻咽癌[M].北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1990：4-5.

[5]  王勇，吴波，孙华丽，等.鼻咽癌EGFR、HLA-F表达水平及调强放疗预后的影响因素分析[J].浙江医学，2019，41（17）：1826-1830，1914.

[6]  廖婷婷，杨丽，邱丽燕，等.鼻咽癌放化疗患者延续护理需求现状及其影响因素分析[J].中国护理管理，2019，19（7）：985-991.

[7]  ALOTAIBI A D，AHMED H G，ELASBALI A M.Nasopharyngeal cancer in Saudi Arabia：epidemiology and possible risk factors[J].J Oncol Sci，2019，5（1）：23-30.

[8]  RAMACHANDRAN D，SCHRMANN P，MAO Q，et al.Association of genomic variants at the human leukocyte antigen locus with cervical cancer risk，HPV status and gene expression levels[J].Int J Cancer，2020，147（9）：2458-2468.

[9]  IIIZUMI S，OHTAKE J，MURAKAMI N，et al.Identification of novel HLA class Ⅱ-restricted neoantigens derived from driver mutations[J].Cancers，2019，11（2）：266.

[10]  游紫聰，周炜均，罗云峰，等.乳腺癌HLA-A2限制性新抗原表位的生物信息学分析[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2020，27（4）：427-432.

[11]  YANG Y，JIA B，ZHAO X，et al.miR-93-5p may be an important oncogene in prostate cancer by bioinformatics analysis[J].J Cell Biochem，2019，120（6）：10463-10483.

[12]  WU L，ZHENG K，YAN C，et al.Genome-wide study of salivary microRNAs as potential noninvasive biomarkers for detection of nasopharyngeal carcinoma[J].BMC Cancer，2019，19（1）：843.

[13]  万祎，张映林，古广强，等.胆管癌患者miR-93的表达水平及其临床意义[J].现代消化及介入诊疗，2020，25（1）：46-50.

[14]  KOYRO T F，KRAUS E，LUNEMANN S，et al.Upregulation of HLA-F expression by BK Polyomavirus infection induces immune recognition by KIR3DS1-positive natural killer cells[J].Kidney Int，2021，99（5）：1140-1148.

[15]  GAO Y，DENG K，LIU X，et al.Molecular mechanism and role of microRNA-93 in human cancers：a study based on bioinformatics analysis，meta-analysis，and quantitative polymerase chain reaction validation[J].J Cell Biochem，2019，120（4）：6370-6383.

（收稿日期：2020-10-31 修回日期：2021-11-13）

（编辑：潘明志）