孕早期B超影像异常与胎儿绒毛染色体异常核型及多态变异关系

邓国生

(广西壮族自治区玉林市妇幼保健院 检验科，广西 玉林537000)

B超影像诊断是胎儿形态结构畸形常用检测方法，胎儿染色体检查是发现胎儿染色体异常核型胎儿缺陷检测方法[1-3]，胎儿形态结构畸形和胎儿染色体异常核型及多态变异均为胎儿缺陷不同表达方式，为了解孕早期B超影像异常胎儿与胎儿绒毛染色体异常核型及多态变异关系，对孕早期B超影像诊断胎儿异常采用胎儿绒毛染色体检查82例孕早期孕妇进行回顾性分析如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象选取2016年11月至2018年5月到玉林市妇幼保健院优生遗传科就诊，B超影像诊断胎儿异常(包括鼻骨显示不清、胎儿颈项透明层增厚、后颅窝池增宽、颈部水囊状淋巴瘤、露脑畸形、全前脑、心内结构异常、脐膨出、腹裂畸形、水肿综合症等)、自愿行绒毛产前诊断的孕妇82例。孕妇年龄(15-45)岁，孕周(10～13+6)周。

1.2 仪器与试剂蔡司全自动染色体扫描分析系统(Imager.Z2))1台、变焦体视显微镜(SZ2-ILST)1台、倒置显微镜(OLYMPUS IX51)1台、美国CO2培养箱(Forma3111)2台，江苏恒温水浴箱(HH-W600)1台，美国CHANG MEDIUMD®培养基和广州一生骏®培养基。

1.3 方法在绒毛穿刺前均告知孕妇及其家属进行绒毛染色体分析的产前诊断范围与风险，并签署知情同意书。在无菌条件下，经B超引导下经腹采取绒毛(10-20)mg，立即置于1支15 ml装有肝素和无菌生理盐水的离心管中，立即送检。在超净工作台中，将绒毛组织置于无菌的培养皿中，加入无菌生理盐水漂洗。除去血细胞和蜕膜，在变焦体视显微镜镜下挑取绒毛组织于另一无菌的培养皿中，剪成粥样，吸入15 ml离心管内，再用无菌生理盐水洗涤(2-3)次，加入1 ml 0.25%胰蛋白酶，无菌吸管吹打均匀，37℃消化6 min，加入2 ml羊水培养基终止消化，于1 500 rpm离心10 min，弃上清后分别加入5 ml两种不同厂家培养基，用无菌吸管吹打混匀，并分别放入两个不同厂家进口培养瓶于两个独立的37℃5%CO2培养箱培养7-8天，在倒置显微镜下观察贴壁细胞克隆大小并进行换液，继续培养1-2天后观察发现有(6-8)个集落均为圆形透亮的细胞时加入秋水仙素阻断，收获、制片和G显带，并进行核型分析。每例标本常规计数20个细胞，记录任何观察到的染色体数目或结构异常。如有可能有性染色体异常病例的标本，则应至少计数30个细胞，如疑嵌合体，计数50个以上细胞。并在蔡司染色体分析系统下分析5个核型，所有分析的细胞的染色体分辨率应达到320条带水平。根据人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN2016)标准进行描述染色体核型，并出具染色体核型分析报告。对于染色体多态性，均进行C带或N带验证。对于倒位、易位和缺失等结构异常者，应通知临床并建议胎儿父母行外周血染色体检查，以查明胎儿染色体异常是否来源于父母；对于嵌合体则建议抽取胎儿脐血进一步确诊。

2 结果

孕早期B超影像异常82例行绒毛染色体培养，培养成功79例，培养成功率96.34%。培养成功79例绒毛染色体核型中，胎儿绒毛染色体异常核型及多态变异检出率，21-三体为11.39%，18-三体为10.13%，特纳综合症为8.86%，嵌合体为3.80%，13-三体为3.80%，易位为2.53%，缺失为1.27%，多倍体为1.27%，多态变异(归正常染色体类)为2.53%；总计，异常核型34例,异常核型检出率43.04%(34/79)，正常核型(包含染色体多态变异2例)45例,正常核型检出率56.96%，见表1。

表1 孕早期B超影像异常与胎儿绒毛染色体异常核型及多态变异表[例(%)]

3 结论

本研究表明，孕早期B超影像异常与胎儿绒毛染色体异常核型检出率最高三位为21-三体、18-三体和特纳综合症。其中，染色体数目异常28例，染色体结构异常3例，嵌合体3例。孕早期B超影像异常与胎儿绒毛染色体异常核型检出率43.04%(34/79)。孕早期B超影像异常类别数量最多首位为胎儿颈项透明层(NT)增厚达35例,依次是后颅窝池增宽、露脑畸、颈部水囊状淋巴瘤、水肿综合症和鼻骨显示不清等检测成功例数较多，染色体异常核型(不包染色体多态变异)检出率较高。居首位的胎儿颈项透明层增厚染色体异常核型检出率40.00%(14/35)高于王挺等[4]B超影像检测颈项透明层增厚畸形胎儿绒毛染色体核型异常率为29.5%(41/139)，胎儿绒毛染色体核型主要为21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征，与本研究一致，作者检测结果还认为胎儿颈项透明层厚度高胎儿胎儿绒毛染色体核型异常率会增高。根据郭莉等[5]报道，B超影像检测畸形胎儿染色体异常率为41.8%(23/55)，染色体核型主要为21-三体比例最高，18-三体；根据饶腾子等[6]报道，B超影像检测淋巴水囊瘤畸形胎儿绒毛染色体异常率为72%(21/29)；根据李慧林[7]报道，B超影像检测畸形胎儿绒毛染色体异常率为75%(3/4)；根据宝日湖[8]报道，非B超影像检测畸形胎儿的产前诊断指征的孕妇，胎儿染色体异常率为11.11%(8/72)；上述文献表明,B超影像检测畸形胎儿染色体异常率远地远高于产前诊断指征胎儿染色体异常率。

本研究采用绒毛染色体培养检查胎儿染色体，胎儿绒毛染色体检查目前被认为是孕早期产前诊断安全可靠，为胎儿提供可靠的染色体异常核型证据，绒毛取材是早期妊娠胎儿染色体检查异常核型“金标准”[9-12]，结合B超影像及其他医学检查综评价，对孕早期胎儿能不能成为未来合格的打工仔、打工妹，农民工，可向孕妇提出终止妊娠，延迟中国老龄化社会年限，继续成为世界工厂，为不能先富起来的世界人民提供更多质好价低中国制造产品。

胎儿绒毛染色体培养检查技术要求较高，现在还不能做到低智商检查要求[13-15]，所用标本是人工创伤取来的，标本绒毛与母体蜕膜结合紧密，绒毛细胞培养要选用绒毛多分支且有活性强部分培养成功率会高，绒毛细胞培养容易受到母体蜕膜组织的影响，不能错取母体部分培养，绒毛组织还有多种细胞成分，要排除间质细胞等其他细胞，否则，绒毛细胞培养不成功，因此，操作工作人员不能是低智商者，本研究操作者按严格程序操作，还是有3例绒毛细胞培养未成功。其中1例标本在挑选、剪取绒毛过程污染，无贴壁细胞生长；另2例标本为绒毛采集量少，细胞生长缓慢，收获细胞计数少，不达标。为了更好的提高培养成功率，绒毛染色体培养应注意：①绒毛采集量至少达10 mg以上；②在变焦体视显微镜下鉴定绒毛枝，除去血细胞和蜕膜以及严格无菌操作；③绒毛生长最适宜的PH值为7.4，高于8.0和低于7.0均不适于绒毛细胞生长。

人类医学胎儿染色体检查在中国大陆开展检查医院慢慢增多，对检测染色体异常核型数据在增加，但检测标本中国大陆文献表达还是少，不能说服一种B超影像异常胎儿染色体异常核型检出率接近真实检出率，但检出率高是不可争议的事实。本研究表明，孕早期B超影像异常胎儿绒毛染色体异常核型检出率高，绒毛染色体异常核型依次为21-三体、18-三体、特纳综合症、嵌合体和13-三体，对孕早期B超影像异常胎儿绒毛染色体检查，为优生优育提供可靠依据。

作者简介：邓国生，本科，副主任技师，主要从事人类医学遗传学检验工作。