关于高效液相色谱同时测定鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留的研究

刘素军

（萍乡市农产品质量安全检测中心，江西萍乡 337000）

氟喹诺酮类药物（FQs）是近些年快速兴起的抗菌药物，具有价格低廉、抗菌谱广等诸多优点，成为医学、兽医学的热点药物。但是随着氟喹诺酮类药物的大范围使用，该药物的残留问题不容忽视，人们在食用后不仅会损害身体健康，也有可能导致耐药菌产生，影响临床疗效。因此为了能够切实实现食物安全目标，则需要寻找一种有效检测氟喹诺酮类药物残留的方法，这也是本文研究的主要目的。

1 材料与方法

1.1 仪器设备与试验材料

在本次研究中，使用美国WATERS公司生产的2695型高效液相色谱仪以及2475型荧光检测器；使用美国WATERS公司提供的WatersC18色谱柱，参数为：5，250×4.6 mm。

试验中的甲醇与乙腈等由Fish提供；在氟喹诺酮类标准物资采购中均采购于中国兽医药监察所，其中沙拉沙星的产品品号为H0181108，含量99.60%；环丙沙星批号为H0101310，含量99.8%；恩诺沙星的产品批号为H0081505，产品含量为99.50%；达诺沙星产品批号为H0201210，样品含量达到了95.1%。

试验中所使用的鸡蛋均为本地采购的物品。

1.2 色谱柱条件

本次试验中的色谱柱为WatersC18色谱柱，流动相0.05mol/L，柱温35℃；乙腈82∶18，流速0.8 mL/分钟；进样量为20。

1.3 样品提取方法

取2 g鸡蛋样本，在将样本的精度控制在±0.05 g范围内后，将其放置在50 mL离心管中并添加10mL磷酸盐缓冲溶液，在涡旋机中处理2分钟后再振荡10分钟，最后按照10000 r/分钟做长达10分钟的离心分离，并取上清液放置在另一个离心管中。试验中的残渣用10 mL磷酸盐缓冲液进行第二次提取，第二次提取的液体同样放置在离心管中。固相萃取C18小柱用磷酸盐缓冲液以及甲醇进行预洗，预洗的液体量均为2 mL，并提取1 mL提取液过柱，挤干后，取1 mL磷酸溶液和乙腈液体（按照70∶30比重配制）进行洗脱，并采集洗脱液。

1.4 制作标准曲线

在制作标准线过程中根据吸取储备液用流动相配制标准混合液，混合液的标准分别为0.005、0.01、0.05、0.1、0.2五个标准，设定进样量为20后，设定达诺沙星线性范围为0.001～0.040 mg/kg，其他三种药物的线性范围均为0.05～0.200 mg/kg。

2 试验结果分析

2.1 选择固相萃取小组

在试验过程中通过调整乙腈的比重并与标准液进行对比后，研究结果发现色谱峰发生了明显前移现象，并且随着乙腈量的增加，则这种前移现象表现得越明显；而相比之下，出峰越靠后，则出现的前移变化也更加明显。在试验中可以发现，C18柱在ACN40%位置发生变形，并呈现出展宽的变化，柱压大，出峰时间快。相比之下，传统的Phenomenex柱则在ACN40%的情况下出峰相对平稳，几乎无变化，因此在考虑到成本等因素的影响，本次研究中选择WatersC18柱展开试验分析。

2.2 绘制色谱图

在通过上文介绍的方法后，鸡蛋中的相关物质得到有效分离，本文研究发现，在本次设定的试验条件下四种药物的浓度与色谱峰面积之间呈现出良好的线性关系，根据试验随机选取普色谱图中基线并以3倍信噪比展开计算，最终的试验结果如图1所示。

图1 鸡蛋四种氟喹诺酮类药物的色谱图

2.3 线性范围

在本次试验中测定5个平行样计算出数据的标准偏差，针对4种氟喹诺酮药物的检测后所设定的信噪比为3与10时计算出检出限LOD与定量限LOQ。

2.4 精密度与回收率

试验期间在吸取20的标准工作液后，根据上文提出的色谱条件进行检测，最终发现药物的保留时间波动被控制在0.1分钟以内，按照峰面积来计算出标准偏差后，最终的数据计算结果显示环丙沙星的相对标准偏差为2.20%、恩诺沙星为2.95%、沙拉沙星为1.69%、达诺沙星为1.52%，这一数据证明该方法的精度密度较高，满足试验要求。

同时在鸡蛋空白试样的基础上通过添加四种氟喹诺酮类药物的标准工作液进行回收试验后，根据样品处理方法进行净化、色谱分析等方法后连续开展3次试验，根据试验结果统计回收率情况，最终的计算结果如表1所示。

表1 样品回收率（mg/kg）

根据表1所统计的相关资料可知，在本次试验中4种氟喹诺酮类药物的回收率被控制在90%～94%之间，符合要求。

2.5 实际样本检测

在本次试验中，为了判断本文所使用的高效液相色谱法在技术上是否科学可行，在本地区农贸市场上分别采购40个鸡蛋进行检测，在按照本文所介绍的方法进行检测后，每个鸡蛋样本分别设置2个平行样本，判断鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留情况，最终的试验结果发现，所采购的40个鸡蛋中仅有1例存在恩诺沙星残留现象，残留量达到了3.0，其余鸡蛋中未发现药物残留。

3 讨论

在本次研究中结合氟喹诺酮类药物所具有的酸碱性特征展开含量分析，在试验中，根据现有的研究可知，恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、达诺沙星作为常见的氟喹诺酮类药物，依托毒副作用小、抗菌作用强等优点而在农业生产中得到广泛使用，但是此类药物在动物体内的消散速度缓慢，可能会造成严重的药物残留而威胁人们的身体健康，因此为了能够更好地满足消费者健康要求，则需要寻找一种有效测量氟喹诺酮类药物的方法。而根据经验，针对此类药物残留的测量方法较多，常见的技术手段包括薄层色谱法、毛细管电泳法、微生物法等，但是在分别对比不同方法的应用效果后可以发现，操作最简单、效率最高的依然是高效液相色谱法，因此基于该方法寻找一种可以有效检测氟喹诺酮类药物残留的技术方案具有可行性。

本次研究是基于农业部781号公告-6-2006所采取的方法，考虑到鸡蛋本身略显酸性，在常规试验处理中采用了0.05 mol/L磷酸溶液：乙腈＝70∶30的方法。本文则将磷酸溶液∶乙腈占比调整为82∶18，因此洗脱液酸度较高，最终试验结果显示恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、达诺沙星的回收率分别为93%、93%、94%、90%，符合相关标准；而如果在试验过程中采用了国标方法，则上述四种药物的回收率则被限定在50%～60%之间。因此可以认为本文所介绍的高效液相色谱法在技术上具有可行性，能够有效检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留情况，值得推广。

4 结束语

本文所介绍高效液相色谱法能够快速测量鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留，作为一种高效的药物检测技术，通过该方法可以在短时间内检测鸡蛋的药物残留情况，作为一种高灵敏度、高准确性的检测方法，可以满足广大企业以及检测站点的鸡蛋安全管理要求，为未来禽蛋检测提供了新的技术渠道，在保证食品安全中发挥着积极作用，值得推广。