肺癌患者外周血中PTOV1的表达与肿瘤对化疗药物顺铂和多西紫杉醇的敏感性的关系

赵孟阳 高天慧 王怡君

化疗作为肺癌的综合性治疗中的首选，虽然近年来有所进展，但由于其毒性大，当患者对化疗药物的敏感性下降时，易出现不良反应，患者也易出现耐药反应[1-2]，因此，患者 5年内的生存率极低，仅为7%～14%[3]。近年来，关于肿瘤对化疗药物的敏感性试验已成为研究热点。前列腺癌过度表达1(PTOV1)在多种癌症中出现过度表达现象，包括前列腺癌，乳腺癌和肝癌[4-5]。还有研究发现PTOV1可通过激活乳腺癌的Wnt/β-catenin途径来促进癌症干细胞(CSC)的增殖，而CSC与肿瘤对化疗药物的敏感性有关[6-7]。因此本文通过研究肺癌患者外周血中PTOV1的表达情况与肿瘤对化疗药物顺铂和多西紫杉醇的敏感性的关系，进一步探讨肺癌对化疗药物的敏感性机制，为化疗药物的选择提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2019年8月至2020年8月于本院接受的56例肺癌患者作为研究对象，其中男性43例，女性13例，年龄42～73岁，平均年龄(60.34±8.14)岁。纳入标准：①符合《CSCO原发性肺癌诊疗指南(2016)》[8]肺癌的诊断标准，经细胞学检查、病理诊断确诊为肺癌；②患者可耐受放化疗治疗；③患者已行胸外科手术治疗，且就诊前未经过药物或放射性治疗。排除标准：①合并其他恶性肿瘤患者，②无重要脏器的严重损伤；③临床资料不全患者。研究对象及家属均签署研究知情同意书，本研究经医院医学伦理委员会审核通过。

1.2 化疗方法

化疗药物为多西紫杉醇注射液及顺铂注射液。肺癌患者化疗前1天及第1天口服地塞米松片5 mg；第1天，多西紫杉醇75 mg/m2静脉滴注1 h；顺铂75 mg/m2，每日2次，共3天，第2～4天，给予阿扎司琼针以及水化、利尿。

1.3 ECIA法检测化疗药物敏感性

在患者手术后适当修剪癌组织标本，于含青霉素、链霉素的生理盐水中浸泡，然后用生理盐水冲洗；切成1 mm×1 mm的组织块，将其放在细胞培养液浸泡的滤纸上，CO2培养箱培养，分为研究组和对照组。24 h后在计算机图像分析系统中测定组织块的初始点阵数(ILN)。然后加入药物或等量注射用水培养4天。加入MTT培养4 h后测定组织块被蓝染部分的终末点阵数(FLN)。抑制率=FLN/ILN=[(对照组存活率-实验组存活率)/对照组存活率]×100%存活率。标准为抑制率≥30%为敏感，<30%为不敏感。

1.4 RT-PCR检测PTOV1表达水平

使用Trizol法提取患者外周血中总RNA。使用Takara逆转录试剂盒(大连宝生物公司)合成cDNA模板，使用BIO-RAD荧光定量PCR仪检测PTOV1表达水平，以GAPDH为对照，通过2-ΔΔCt方法分析其相对mRNA水平。反应条件为94 ℃预变性5 min，94 ℃30 s、55 ℃30 s、72 ℃60 s，共35个循环，引物送上海生工生物公司合成。引物如下：PTOV1-F：5'-CCCAGTCCAGATCGT CAACA-3'；PTOV1-R：5'-GCCACCTCTTGGACCGACT-3'。

1.5 统计分析

2 结果

2.1 肺癌体外对不同药物敏感情况分析

根据药敏结果可知，肺癌对多西紫杉醇的体外敏感率为46.43%(26/56)，对顺铂的体外敏感率为25.00%(14/56)，其中肺癌对多西紫杉醇的敏感性显著高于顺铂(χ2=5.600,P=0.018)。

2.2 肺癌患者的体外药敏结果与临床资料的关系

结果显示多西紫杉醇和顺铂药物敏感率与患者性别、淋巴结转移情况、病理类型、分化程度无关(P>0.05)，而与患者年龄、PTOV1表达水平相关(P<0.05)，<6岁组的敏感率显著高于≤60岁组，敏感组的PTOV1表达水平显著低于耐药组，见表1。

表1 肺癌对化学药物的体外敏感结果与临床资料的关系/例

2.3 肺癌对化疗药物敏感性的多因素分析

根据Logistic多因素回归分析结果显示，年龄、PTOV1表达水平均是影响肺癌对化疗药物敏感性的独立危险因素(P<0.05)，见表2。

表2 肺癌对化疗药物敏感性的多因素回归分析

3 讨论

化疗是目前肺癌治疗的重要手段，铂类联合多西紫杉醇化疗可以有效改善术后患者的预后，通过与DNA结合，从而影响肿瘤细胞的DNA复制、转录等过程，达到杀伤肿瘤细胞的效果[9-10]，其中DNA损伤修复功能就是肺癌患者对化疗药物产生耐药性的关键[11]。目前，临床上由于缺少针对个体化的化疗方案，患者的治疗效果不佳，化疗缓解率偏低[12]。因此通过研究肺癌对化疗药物的敏感性，寻求最佳的个体化方案至关重要。根据本研究药敏结果可知，肺癌对多西紫杉醇的体外敏感率为46.43%，对顺铂的体外敏感率为25.00%，肺癌对多西紫杉醇的体外敏感率显著高于顺铂，说明在选择针对肺癌的化疗药物时可优先选择多西紫杉醇。

本研究结果发现药物敏感性与患者性别、淋巴结转移情况、病理类型、分化程度无关，而与患者年龄表达水平相关，其中<60岁组的敏感率显著高于≤60岁组，这与目前的研究结果不一致[13]，有研究证实药物敏感性与病理类型相关，但本研究中鳞癌和腺癌对药物的敏感性高于其他类型，但差异不显著，可能与样本量偏少有关系，可以在以后的研究中加大样本量来进一步验证结果。

PTOV1是一种大小为46 KDa的蛋白，由位于19号染色体(19q13)上的12外显子基因编码[14]。PTOV1也与多种癌症的预后不良相关，包括前列腺癌、乳腺癌等[15]。另外有研究指出PTOV1在肺癌患者中高水平表达[16-17]。CSC作为能够自我更新、自我繁殖的细胞，有助于肿瘤的复发以及转移。CSC存在在多数癌症包括肺癌中，与化疗药物的耐药性有关，靶向CSCs可以增加肺癌对化学药物的敏感性[18-19]。这说明PTOV1可能与患者化疗敏感性相关。本研究发现敏感组的PTOV1表达水平显著低于耐药组，以及多因素分析结果显示PTOV1表达水平是影响肺癌对化疗药物敏感性的独立危险因素。该研究进一步验证了PTOV1表达水平与化疗敏感性有关，可能可以通过靶向PTOV1来增加肺癌对化疗药物的敏感性。

综上所述，本研究发现肺癌患者外周血中PTOV1的表达情况与肿瘤对化疗药物顺铂和多西紫杉醇的敏感性存在相关性，为今后针对患者选择合适的化疗药物提供新的思路。但本研究存在一定的局限性，由于样本量较少以及中心单一等问题导致结果受到影响，需要在后续的研究中进一步完善。