胃癌患者的血清miRNA-93水平及与临床特征和预后的关系

杨茂省，杨到凤，李世杰，刘大宁

1濮阳市第二人民医院检验科，河南 濮阳 457000

2濮阳市人民医院检验科，河南 濮阳 457000

胃癌是消化系统中常见且高发的恶性肿瘤，全球范围内胃癌的病死率居全部恶性肿瘤第2位[1-3]。近年来中国胃癌的发病率呈逐年升高趋势[4-5]。随着中国全民健康意识和胃癌治疗水平的不断提高，中国胃癌的病死率得到有效控制，但中国欠发达地区的胃癌发病率和病死率仍然较高。早期胃癌多无典型症状，易与胃部良性疾病混淆，因此容易漏诊或误诊。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类非编码RNA，具有20～23个核苷酸序列，通过与靶mRNA的互补配对在转录后水平对基因的表达进行负调控[6-8]。miRNA在细胞的生长、分化等过程中具有重要作用，可影响多种恶性肿瘤细胞的增殖、浸润及转移。miRNA-93是miRNA家族成员之一，其高表达可促进胃癌细胞、食管癌细胞、骨肉瘤细胞、鼻咽癌细胞等多种恶性肿瘤细胞的增殖。miRNA-93高表达还与诸多恶性肿瘤的远处转移密切相关。本研究探讨胃癌患者的血清miRNA-93水平及与临床特征和预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月至2019年6月濮阳市第二人民医院收治的胃癌患者。纳入标准：①符合第8版《外科学》[9]和《胃癌病理分型和诊断标准的建议》[10]中胃癌的诊断标准；②经胃镜病理或手术病理确诊为胃癌；③临床资料完整。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②留存血样时处于感染性疾病急性期、心脑血管疾病急性期、重大外伤后14天以内；③合并血液系统疾病；④入院前3个月内有放化疗等抗肿瘤治疗史；⑤复发胃癌；⑥出现远处转移；⑦失访；⑧确诊后放弃治疗。依据纳入和排除标准，本研究共纳入82例胃癌患者，作为恶性组。选取同期接受治疗的82例胃部良性疾病患者，作为良性组。恶性组中，男56例，女26例；年龄45～76岁，平均（59.21±8.12）岁。良性组中，男49例，女33例；年龄46～73岁，平均（58.96±7.74）岁；疾病类型：慢性萎缩性胃炎47例，胃溃疡31例，反流性胃炎4例。两组患者的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 检测方法

采集两组患者的静脉血，3000 r/min离心10 min，获得血清，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测 miRNA-93相对表达量。依据miRNeasy Serum/Plasma Kit试剂盒说明书提取总RNA，使用分光光度仪测定总RNA浓度及纯度。按照逆转录试剂盒miScriptⅡRT Kit说明书步骤完成逆转录合成cDNA。使用miScript SYBR Green PCR Kit试剂盒进行实时定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）。反应条件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 10 s，60℃ 1 min，共45个循环。miRNA-93上游引物5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3'，下游引物5'-ACGUGACACGUUCGGAGAAATT-3'；U6上游引物5'-TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAGC-3'，下游引物5'-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3'。以U6为内参，采用 2-ΔΔCt法计算血清miRNA-93水平。

1.3 观察指标

比较良性组和恶性组患者的血清miRNA-93水平，分析其对胃癌的诊断价值。以血清miRNA-93水平的中位值为界，将胃癌患者分为miRNA-93高表达组和miRNA-93低表达组，比较两组患者的临床特征，分析血清miRNA-93水平与胃癌患者临床特征的相关性。随访3年，记录胃癌患者预后，以病情未进展为预后良好，病情进展或死亡为预后不良，分析血清miRNA-93水平与胃癌患者预后的关系。

1.4 统计学方法

采用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析，采用K-S检验分析计量资料的分布状态，符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线及曲线下面积（area under the curve，AUC）分析miRNA-93对胃癌的诊断价值，AUC＞0.9为较高诊断价值，0.7＜AUC≤0.9为中等诊断价值，0.5≤AUC≤0.7为较低诊断价值，AUC＜0.5为基本无诊断价值。相关性分析采用Spearman相关分析，以|r|≥0.3为具有相关性，越接近1，相关性越显著。采用Cox比例风险回归模型分析血清miRNA-93水平与胃癌患者预后的关系，OR＞1为危险因素，OR＜1为保护因素。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清miRNA-93水平的比较

恶性组患者的血清miRNA-93水平为（3.78±1.32），明显高于良性组患者的（2.10±0.42），差异有统计学意义（t=10.948，P＜0.01）。

2.2 血清miRNA-93水平对胃癌的诊断价值

血清miRNA-93水平对胃癌具有中等诊断价值，AUC为0.852（95%CI：0.781～0.923），其诊断胃癌的cut-off值为2.985，灵敏度为76.83%，特异度为95.12%。（图1）

图1 血清miRNA-93水平诊断胃癌的ROC曲线

2.3 miRNA-93高表达组和miRNA-93低表达组胃癌患者临床特征的比较

82例胃癌患者的血清miRNA-93水平中位值为4.055，据此划分为miRNA-93高表达组40例和miRNA-93低表达组42例。两组患者的年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；miRNA-93高表达组中肿瘤直径≥5 cm、低分化、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴转移的患者比例均高于miRNA-93低表达组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 miRNA-93高表达组和miRNA-93低表达组胃癌患者临床特征的比较

2.4 血清miRNA-93水平与胃癌患者临床特征的相关性

血清miRNA-93水平与胃癌患者的肿瘤直径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况均呈正相关（r=0.557、0.609、0.610、0.655，P＜0.01）。

2.5 血清miRNA-93水平与胃癌患者预后的关系

胃癌患者中预后不良39例，miRNA-93高表达组患者预后不良发生率为60.00%（24/40），高于miRNA-93低表达组患者的35.71%（15/42），差异有统计学意义（χ2=4.845，P=0.028）。Cox比例风险回归分析显示，血清miRNA-93高表达是胃癌患者预后不良的独立危险因素（OR=2.488，95%CI：1.717～3.604，P＜0.05）。

3 讨论

胃癌以中老年人为主要发病群体，起病隐匿，早期多无典型表现，因此早期诊断率有待提高。近年来中国胃癌的治疗水平不断提高，早期和中期胃癌患者多可通过规范化手术治疗获得理想预后，早诊断、早治疗对提高胃癌患者生存率具有重要意义。病理检查是胃癌诊断的金标准，但取材难度高，重复性不佳，适用范围受到一定限制。因此，寻找一种易于操作，灵敏度、特异度和准确度均较高的诊断方式对胃癌的诊断和治疗具有重要意义。

研究表明，miRNA参与恶性肿瘤细胞的生长、分化和侵袭过程[11-12]。由于miRNA是一类广泛存在于机体中的小片段非编码RNA，在血清中具有较高的稳定性，不易被酶降解，亦不易受外界因素的干扰，因此，血清miRNA可作为多种恶性肿瘤诊断与病情判断的分子标志物[13-15]。临床上已有诸多miRNA作为各种恶性肿瘤早期诊断、病情判断及预后评估的分子标志物[16-18]。王丹等[19]研究表明，血清miRNA-187-3p可作为肝细胞癌早期诊断、预后评估的生物标志物。王静等[20]研究发现，血清miRNA-223可为胃癌的临床诊断提供重要参考。但目前临床上关于诊断胃癌的血清miRNA标志物尚无统一定论。miRNA-93是miRNA-106b-25簇的一个重要成员，在消化系统恶性肿瘤中异常表达，其表达水平可能与胃癌患者的临床特征和预后有关。miRNA-93作为肿瘤基因可促进恶性肿瘤细胞生长。miRNA-93是一种致癌基因，可通过促进B细胞淋巴瘤-2等抗肿瘤细胞凋亡蛋白的合成发挥促进肿瘤生长、侵袭及肿瘤新生血管生成等作用。因此，抑制miRNA-93的表达能够促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖、迁移。

本研究结果表明，胃癌患者血清miRNA-93水平明显高于胃部良性疾病患者，提示miRNA-93在胃癌的发生发展过程中发挥重要作用。本研究结果显示，血清miRNA-93水平对胃癌具有中等诊断价值，AUC为0.852（95%CI：0.781～0.923），其诊断胃癌的cut-off值为2.985，灵敏度为76.83%，特异度为95.12%。miRNA-93高表达组中肿瘤直径≥5 cm、低分化、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴转移的患者比例均高于miRNA-93低表达组，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示血清miRNA-93高表达胃癌患者的肿瘤较大、分化程度较低、临床分期较高且易出现淋巴结转移。相关性分析结果显示，血清miRNA-93水平与胃癌患者的肿瘤直径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况均呈正相关（P＜0.01），提示检测胃癌患者的血清miRNA-93水平能够为评估患者临床特征提供必要参考。随访3年，miRNA-93高表达组患者预后不良发生率高于miRNA-93低表达组患者（P＜0.05）；Cox比例风险回归分析显示，血清miRNA-93高表达是胃癌患者预后不良的独立危险因素（OR=2.488，95%CI：1.717～3.604，P＜0.05）。说明血清miRNA-93异常升高可提示胃癌患者预后不良，为临床治疗方案的选择提供重要参考。

综上所述，血清miRNA-93水平对胃癌具有中等诊断价值，其与胃癌患者的临床特征具有相关性，其高表达是胃癌患者预后不良的危险因素。因此，临床上对于血清miRNA-93高表达的胃癌患者应根据其具体情况给予规范化综合治疗，以最大限度地改善患者预后，延长患者生存期。