聚乙二醇对微柱凝胶法检测不规则抗体的增强作用分析

刘晓骅 罗圆圆 赵嫚 李族军 汪德清 练正秋

聚乙二醇（PEG）是一种高分子多聚物，可以通 过降低抗体分子与水分子之间的排斥力，增加抗体与红细胞间的结合机会，促进抗原-抗体反应。国外首次在1987年介绍可利用PEG抗人球蛋白法提高对红细胞抗体的检出能力[1]。本文研究了70例患者标本，均因LISS微柱凝胶法（LISS-MGT）凝集弱造成结果不明确而加做PEG微柱凝胶试验（PEG-MGT），对比实验结果，为临床对不规则抗体的鉴定方法选择提供思路。

资料与方法

1 临床资料 选择2018年4月～2021年4月进行了至少LISS-MGT和PEG-MGT两种方法进行抗体鉴定的标本试验资料共70例，均因抗筛检测阳性但LISS-MGT抗体鉴定无反应或反应弱无确定格局加做PEG-MGT。

2 方法

2.1 仪器与试剂：DG Gel抗人球蛋白检测卡（Diagnostic Grifols，西班牙 ），LISS液（DG Gel Sol，西班牙），PEG 3350（北京中科科奥科技有限公司），抗体筛选红细胞试剂盒（BIO-RAD，美国），16系谱细胞（Sanquin，荷兰），DGSPIN卡式离心机（Grifols，西班牙），ID-Incubator 37S I达亚美卡式孵育器，KA-2200血清学专用离心机（Kubota，日本）。

2.2 4℃ LISS-MGT、LISS-MGT和PEG-MGT：①4℃LISS-MGT：3%～5%荷兰Sanquin16系谱细胞用LISS液稀释至1%的浓度，患者血浆25 μL和1%浓度的1～16号谱细胞各50 μL每孔加入反应仓，4℃孵育15 min，直接离心后观察结果。②LISS-MGT：3%～5%荷兰Sanquin16系谱细胞用LISS液稀释至1%的浓度，谱细胞和患者血浆的加样程序以及后续操作严格按照微柱凝胶卡使用说明书的要求进行，即患者血浆25 μL和LISS稀释至1%浓度的1～16号谱细胞各50 μL每孔加入反应仓，37℃孵育15 min，直接离心后观察结果。③PEG-MGT：20%PEG参照文献要求配制[1]。取16支洁净试管，做好标记，每管加患者血清2滴、20%PEG溶液4滴、3%～5%荷兰Sanquin16系谱细胞1滴（对应标记），混匀，37℃水浴箱内孵育15 min，分别用生理盐水洗涤红细胞4次，末次弃净上清液，LISS稀释反应产物至1%浓度，将50 μL反应产物加入反应仓中，直接离心后观察结果。

2.3 抗体凝集强度判定参照美国血库协会技术手册第17版，计分赋值见表1[1]。

表1 凝集强度计分赋值

结 果

1 鉴定结果分类 70例患者标本经PEG-MGT抗体鉴定，结果分为两类：格局明确可确定抗体特异性29例（41.4%）、无明显特异性反应格局41例（58.6%）。

2 PEG-MGT检出特异性抗体分布情况 患者标本经PEG-MGT检测格局明确29例，PEG-MGT对Rh系统相关抗体检出最多（20，69%），其次是Duffy系统相关抗体（5，17.2%）以及Kidd系统相关抗体（3，10.3%），Lewis系统抗体1例（表2）。

表2 PEG-MGT检出抗体特异性

3 PEG-MGT 与 LISS-MGT鉴定凝集强度对比PEG-MGT检测无明显特异性反应格局样本41例，比较PEG与LISS抗体鉴定凝集强度：反应增强16例，反应减弱 17 例，反应强度无变化 8 例。PEG-MGT检测无明显特异性反应格局样本中有13例三系抗筛盐水试管法均阳性，通过盐水试管法或4℃ LISS-MGT可确定抗体特异性，分别为抗-M抗体9例，抗-P1抗体2例，抗-Lea抗体和抗-Leb抗体各1例，反应强度增强7例，减弱3例，不变3例（表3）。

表3 PEG法与LISS法抗体鉴定强度比较

讨 论

红细胞血型抗原IgG类抗体的检测常需要增强介质辅助反应，如小牛血清白蛋白和实验室常用的凝聚胺、LISS液。1987年，NANCY和GARRATTY首次发现PEG间接抗人球蛋白可促进红细胞抗原-抗体反应，对比实验发现25例弱反应抗体（LISS介质中有镜下凝集到2+的反应强度）约64%在PEG中反应强度强于LISS或凝聚胺溶液，28%反应强度相等，8%在PEG中反应强度弱于LISS或凝聚胺[2]，表明PEG相较凝聚胺或LISS对大部分抗原抗体的结合具有更强的促进作用。

PEG和传统抗体检测方法对比实验中，WENZ、DE、TRKMLJIC等研究人员认为 PEG对抗体检出灵敏度优于小牛血清白蛋白[3-5]，SHIREY对比PEG和LISS抗人球蛋白试验，指出PEG对临床稀有抗体的检出灵敏度强于LISS[6]。不规则抗体的漏检有很大的临床输血风险，轻则仅表现为红细胞输注无效[7-10]，重则导致溶血性输血反应[11-12]。LIN等报告2例Rh血型抗体引起的溶血反应的罕见病例，LISS、盐水抗球蛋白法、酶法均未检出抗体，但PEG间接抗人球蛋白技术和凝聚胺法检出了相关Rh抗体[11]。这个案例提示酶法也可能漏检有临床意义的Rh血型系统抗体。

本文PEG-MGT检出29例抗体特异性，其中Rh系统相关抗体20例（69%），Duffy系统抗体5例（17.2%）以及Kidd系统抗体3例（10.3%），表明PEG-MGT对Rh系统、Duffy系统以及Kidd系统这些有临床重要意义抗体的检出灵敏度更高。本文显示，PEG-MGT明确检出抗-Lea1例，LISS-MGT和PEG-MGT均未检出抗体特异性的41例标本中有13例经盐水介质法或4℃微柱凝胶法确定抗体特异性，其中7例PEG反应增强（4例抗-M，1例抗-Lea，2例抗P1），3例PEG和LISS两种介质反应强度不变（3例均为抗-M），3例PEG反应减弱（2例抗-M，1例抗Leb）。由此可知，PEG微柱凝胶法虽不能普遍增强IgM类抗体的检出，但对该类抗体检出有一定帮助。Lewis血型系统中抗-Lea和抗-Leb、MNS血型系统抗-M，多为自然产生，P1血型系统抗-P1通常属于冷抗体，37℃多数没有活性，很少引起溶血性输血反应，临床意义不大。最终无法明确抗体性质28例，通过分析患者病史、用药史和近期实验室检测相关指标变化，怀疑药物抗体4例，抗-HLA抗体2例，怀疑低效价抗体19例，怀疑自身抗体3例。

综上所述，PEG-MGT对有临床重要意义的抗体检出比LISS-MGT更敏感，对LISS-MGT无法检出的MNS系统、Lewis系统、P1系统等抗体的判断也有一定参考意义，但对这类盐水抗体的鉴定建议首选常温或4℃盐水介质法。鉴于PEG孵育后有4次洗涤混合物的过程，对工作人员熟练程度要求较高，且整个流程消耗时间较多，不建议作为常规抗体鉴定方法。本研究表明经LISS-MGT结果不明确怀疑弱抗体的情况下加做PEG-MGT，对判断Rh血型系统、Kidd血型系统和Duffy血型系统这类有重要临床意义的不规则抗体非常有价值。

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