益生菌对妊娠晚期阴道B族链球菌定植、血清炎性因子及妊娠结局的影响

汪静，施后渊，刘娅，唐琳，叶涛

B族链球菌(group B streptococcus，GBS)又称无乳链球菌，是一种β-溶血性革兰阳性细菌，在孕妇阴道或直肠中的定植率为10%～30%， 妊娠晚期GBS感染率为7.51%～37.30%。GBS作为一种潜在的致病病原体，可导致阴道微生态紊乱，并可垂直传播给经阴道分娩的新生儿，导致新生儿败血症、肺炎和脑膜炎[1-3]。分娩时使用抗生素是降低GBS相关新生儿败血症风险的方法，但是并不能预防GBS母婴传播。体外研究显示，乳酸杆菌细胞壁的非蛋白质成分具有抗GBS活性，乳酸菌代谢产生的酸性环境可有效抑制GBS菌落生长[4]。口服补充含有乳酸杆菌菌株的益生菌可降低孕妇阴道和直肠GBS定植率[5]，但是益生菌对GBS定量值、血清炎性因子和妊娠结局的影响尚不清楚，鉴于此，本研究拟对妊娠晚期GBS感染孕妇进行口服含乳酸杆菌益生菌干预，探讨其临床效果，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2018年1月—2021年1月西南医科大学附属中医医院妇产科诊治的妊娠晚期GBS感染孕妇103例，按随机数字表法分为观察组(52例)和对照组(51例)。2组年龄、妊娠周期、孕产史、文化程度、体质量指数比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。本研究获得医院伦理委员会批准(20180612)，患者及家属知情同意并签署知情同意书。

表1 对照组及观察组患者临床资料比较 [例

1.2 病例选择标准[6](1)纳入标准：①单活胎妊娠；②妊娠35～37周采集阴道下1/3处阴道分泌物标本，实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检查提示GBS感染。(2)排除标准：①妊娠期合并高血压、甲亢、先天性心脏病等合并症；②异位妊娠、胎盘早剥、前置胎盘；③双胎或多胎妊娠，院外分娩者；④既往GBS感染病史；⑤入组前胎膜已破，妊娠期间抗生素药物应用史；⑥合并其他病原菌严重感染。

1.3 治疗方法 2组孕妇均指导定期产检，补充叶酸和维生素，合理搭配膳食，避免剧烈运动和过度劳累，注意外阴卫生。对照组孕妇不服用益生菌，分娩前4 h静脉滴注抗生素预防感染，抗生素根据过敏史、皮试结果选择青霉素、头孢或克林霉素。观察组孕妇服用双歧杆菌四联活菌片(杭州远大生物制药有限公司)0.5 g/次，30℃ 温水送服，3次/d，服用至分娩发动，分娩前4 h静脉滴注抗生素预防感染(抗生素治疗同对照组)。

1.4 观察指标与方法

1.4.1 阴道GBS定量值检测：治疗前、治疗后(分娩发动)由产科医生采集阴道下1/3分泌物标本放入保存液管中冷藏密封保存。采用RT-qPCR法检测GBS定量值，按照GBS核酸检测试剂盒(上海晖科生物科学有限公司)配制GBS-PCR 反应液(包含Taq DNA Polymerase 0.5 μl，Uracil N-Glycosylase 0.2 μl)加入离心管振荡混匀离心，分装至PCR 反应管避光保存备用。取阴道分泌物、阳性和阴性对照样品，95℃ 干浴和冰浴各2 min，离心取上清液加入PCR 反应管；反应条件：37℃ 2 min，94℃ 2 min，94℃ 15 s，55℃ 45 s，共进行10 个循环；再94℃ 15 s，55℃ 45 s，30个循环。采用SimpliAmp荧光定量PCR仪(美国赛默飞公司)检测GBS定量值。

1.4.2 血清炎性因子检测：治疗前、治疗后采集孕妇静脉血3 ml离心留取血清，采用Varioskan LUX 多功能酶标仪(美国赛默飞公司)检测血清白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，试剂盒购自美国赛默飞公司。

1.4.3 记录分娩方式及围产期结局：记录分娩方式(阴道分娩、剖宫产)、分娩时胎龄、新生儿出生体质量、新生儿出生1 min阿氏评分，5 min阿氏评分，胎膜早破、早产、宫内感染、产褥感染、新生儿感染等情况。

2 结 果

2.1 2组治疗前后GBS定量值比较 与治疗前比较，治疗后观察组阴道GBS定量值降低，且低于对照组(P<0.01)，而对照组治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 对照组及观察组孕妇治疗前后阴道GBS定量值比较

2.2 2组治疗前后血清炎性因子比较 与治疗前比较，治疗后观察组血清IL-6、CRP、TNF-α水平较治疗前降低，且低于对照组(P<0.01)，而对照组治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 对照组及观察组孕妇治疗前后血清炎性因子比较

2.3 2组孕妇妊娠结局比较 观察组孕妇胎膜早破、早产、宫内感染、产褥感染发生率低于对照组(P<0.05)，2组剖宫产率比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表4 对照组及观察组孕妇妊娠结局比较 [例(%)]

2.4 2组新生儿结局比较 观察组新生儿感染发生率低于对照组(P<0.05)，2组分娩时胎龄、新生儿出生体质量、1 min阿氏评分、5 min阿氏评分比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表5。

表5 对照组及观察组新生儿结局比较例(%)]

3 讨 论

GBS是一种常见的阴道细菌，也是导致侵入性胎盘感染的主要原因。阴道内GBS可通过宫颈侵入引起上行子宫胎盘感染，也可在阴道分娩时传染给新生儿，发生早产、死胎，以及新生儿败血症、肺炎、脑膜炎和脑病等严重不良妊娠结局[7]。2019年美国妇产科医师学会委员会推荐临产或破膜后GBS感染孕妇至少接受4 h的肠外抗生素治疗[8]，但是抗生素治疗对胎儿存在潜在危害，且广谱抗生素应用可增加耐药风险，因此，寻找更有效的减少GBS定植的治疗途径十分重要。

本结果说明，补充双歧杆菌四联活菌片可减少GBS定植，双歧杆菌四联活菌片主要成分为双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、蜡样芽孢杆菌，其中双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和粪肠球菌不低于0.5×106CFU，蜡样芽孢杆菌不低于0.5×105CFU，肠道杆菌是最常见的益生菌，属于一种无芽孢的杆菌，具有强代谢碳水化合物产酸能力，能拮抗致病菌，维持机体对抗原的细胞和体液免疫反应。一项随机对照研究显示，妊娠晚期GBS感染孕妇给予乳酸杆菌GR-1&RC-14胶囊干预3周后GBS转阴率42.9%，明显高于安慰剂组的18.0%[5]，Hanson等[9]发现，妊娠期间给予益生菌干预，妊娠36周时GBS菌落计数较未服用益生菌者明显降低，动物研究也显示，罗伊氏乳杆菌 CRL1324可显著降低小鼠阴道 pH，减少GBS数量[10]，以上结果提示口服补充益生菌有助于降低GBS定植率，与本结果一致。而刘映玲等[11]报道结果则显示，补充益生菌组GBS转阴率与未补充益生菌组无差异(30% vs. 23%)，分析原因可能与益生菌干预时间有关，本研究益生菌干预至分娩，平均治疗时间为3.12周，长于刘映玲等[11]干预时间(2周)。乳酸杆菌可维持机体细胞和体液免疫反应，阴道微生态失衡或乳酸杆菌消耗与女性妊娠晚期GBS感染有关，补充乳酸杆菌是根除阴道和直肠GBS定植的有效方法[12-14]。现有研究发现，乳酸杆菌产生的抗菌肽Lactocin160可抑制阴道加德纳菌生长，而阴道加德纳菌是阴道微生态失衡的主要致病菌，可促使GBS生殖道定植及子宫或胎盘逆行侵袭性感染[15]。Lactocin160 还可破坏细胞膜并诱导三磷酸腺苷产生，杀死细菌性阴道病相关的微生物，维持健康的阴道微生物群落。乳酸杆菌还可产生过氧化氢，与其他细菌竞争黏附上皮细胞并产生微菌酸，酸化阴道环境，恢复正常的阴道菌群[16]。口服含乳酸杆菌的益生菌可从肠道进入阴道，并通过屏障作用对抗病原微生物，治疗菌群失调及其介导的反复感染性疾病[17]。

本结果说明，补充益生菌可降低机体炎性反应。现有研究发现，妊娠晚期GBS阳性孕妇血清白介素-18、趋化因子CCL-1水平升高，且与妊娠不良结局有关，而补充益生菌被临床研究证实可抑制 T 细胞活性和辅助性T细胞1分化，抑制白细胞黏附和炎性因子的产生，降低炎性因子水平[18-20]。益生菌抑制炎性反应的机制可能与其改变肠道微生物群、加强肠道上皮屏障和调节免疫功能有关，越来越多研究也表明，益生菌可通过识别Toll 样受体和含有核苷酸结合寡聚化结构域的蛋白样受体，调节核因子-κB 和丝裂原活化蛋白激酶等炎性反应相关信号通路，抑制其下游炎性因子释放[21]。本结果说明，补充益生菌可降低母婴感染率及胎膜早破和早产发生率，分析原因为补充益生菌治疗有效抑制了GBS在阴道内定植，继而降低GBS上行感染和胎盘侵袭性感染几率，所以胎膜早破和早产发生率降低。

综上，口服益生菌可抑制妊娠晚期GBS定植，降低血清炎性因子水平和母婴围产期感染率，改善妊娠结局，优于单纯抗生素治疗。本研究局限性在于未观察益生菌对阴道微生态的影响，其是否能改善阴道微生态尚待进一步探讨。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

汪静：设计研究方案，实施研究过程，论文撰写及修改;施后渊、刘娅：资料搜集整理;唐琳：收集试验数据、统计学分析;叶涛：确定研究方案，分析试验数据、论文指导