IL-33在诊断慢性乙型肝炎肝纤维化中的应用评价*

慢性乙型肝炎(CHB)若不及时治疗可逐渐进展到肝纤维化

。肝纤维化是CHB向肝硬化及肝癌发展的关键环节，但肝纤维化在一定程度上可逆转，因此积极治疗和逆转肝纤维化对延长CHB患者的生存周期至关重要

。目前，肝组织学活检仍是评估肝纤维化严重程度的“金标准”，但因其属于有创检查且无法动态监测CHB肝纤维化的变化程度，故而对于部分临床患者应用较为局限。IL-33属于IL-1家族中的一种新型炎性因子

，近年来研究发现IL-33与CHB、肝硬化及肝癌的发病机制密切相关

。我们通过检测CHB患者血清IL-33的表达水平并探讨其诊断肝纤维化的临床效能，为CHB患者肝纤维化的诊断、治疗及动态检测提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月至2019年6月于新乡医学院第一附属医院感染科住院治疗的98例CHB患者作为研究对象，其中男性45例，女性53例，平均年龄(55.23±10.78)岁，病程(14.22±5.39)年。另纳入35例健康体检者作为对照组，其中男性20例，女性15例，平均年龄(54.25±8.93)岁，两组研究对象在性别、年龄方面比较，差异无统计学意义。上述所有研究对象对本研究均知情同意且签署知情同意协议书。

1.2 纳入标准 ①慢性乙型肝炎诊断符合2015年中华医学会肝病学分会制定的慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)

；②均完成肝脏穿刺组织学活检和B超检查者；③纳入研究时1年内未进行抗病毒和抗纤维化药物治疗者；④临床资料完整者。

1.3 排除标准 ①CHB近期急性加重者；②合并丙型肝炎、自身免疫性肝病、药物性肝损伤、脂肪肝、肝癌等患者；③哺乳、妊娠及精神类疾病者；④3个月内采用激素治疗者。

1.4 检测指标

1.4.3 肝组织活检 CHB患者入院时在B超引导下行肝脏穿刺活检，肝纤维化程度采用S0～S4分期评估，其中S0为无纤维化、S1～S2代表中度纤维化、S3～S4代表重度纤维化

。

“巴洛克”是一种代表欧洲文化的典型艺术风格，追求宏伟、奔放、夸张的效果，而巴洛克音乐的特色便是“速度与激情”！维瓦尔第是当时意大利巴洛克音乐的“高产大户”，他一生创作过六百多首作品，其中最出名、最有新意的就是《四季》。维瓦尔第给《四季》中的每首协奏曲都单独取了名字，分别是《春》《夏》《秋》《冬》，这就是最早的“标题音乐”。相传他还巧妙地为每首作品配上了唯美的十四行诗，这也是之前的音乐家没做过的（至于那诗到底是不是他本人写的，就无从知晓了）。

1.4.2 肝脏B超检查 CHB患者入院时采用超声仪检查肝脏的光滑度和肝实质回声情况。根据肝脏表面光滑、欠光滑、不光滑及有结节分别计0分、1分、2分和3分，肝脏实质回声均匀、略粗、较粗和粗糙分别计0分、1分、2分和3分

。通过B超检测结果计算肝纤维化程度评分，B超评分越高，说明肝纤维化程度越严重。

1.4.1 生化指标检查 检测各组研究对象血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、谷氨酰转肽酶(GGT)水平；检测各组研究对象血清肝纤维化指标如Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)水平；检测各组研究对象WBC和PLT水平；计算肝纤维化评估模型S指数=1000×GGT/PLT×WBC2，FIB-4=年龄×AST/PLT×ALT1/2。

洞庭湖地处长江中游荆江南岸，地跨湘、鄂两省，是我国第二大淡水湖，天然湖泊面积2 625km2，流域面积26.3万km2。洞庭湖生态经济区覆盖湖南省岳阳市、常德市、益阳市及长沙市望城区和湖北省荆州市33个县（市、区）。作为长江流域重要的调蓄性湖泊、生态净化池（前置库）和亚洲最大的内陆湿地，洞庭湖在调节长江径流、维护生态平衡、保护生物多样性等方面具有不可替代的重要作用，素有“长江之肾”之称。

2.3 CHB患者血清IL-33表达水平与肝纤维化指标的相关性 所有CHB患者B超评分、FIB-4和S指数分别为(2.81±0.34)、(1.57±0.47)和(0.21±0.11)。相关性分析结果显示，CHB患者血清中IL-33表达水平与PCⅢ、Ⅳ-C、HA、LN、B超评分、FIB-4和S指数均呈显著正相关性，结果见表3。

1.5 统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行数据处理。计量资料若符合正态分布，以均数±标准差表示，采用

检验，若不符合正态分布，以中位数表示M(P25，P75)，采用Mann-Whitney

检验，多组间比较采用方差分析；计数资料以频数表示，组间比较采χ

检验；相关性分析采用

检验；以受试者操作特征(ROC)曲线探讨血清IL-33诊断肝纤维化的临床效能。以

<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.4 血清IL-33、FIB-4、S指数及B超评分诊断CHB患者肝纤维化的效能 将所有CHB患者血清IL-33水平、FIB-4、S指数及B超评分数值作为检验变量，其中S1～S4期CHB患者血清IL-33水平、FIB-4、S指数及B超评分作为状态变量，绘制ROC曲线图。血清IL-33、FIB-4、S指数及B超评分诊断CHB患者发生肝纤维化的AUC分别为0.951(95%

：0.905～0.996)、0.893(95%

：0.830～0.955)、0.889(95%

：0.826～0.951)和0.744(95%

：0.641～0.847)，与FIB-4、S指数和B超评分相比，血清IL-33诊断CHB患者发生肝纤维化的AUC较高，差异均有统计学意义(

=24.03，

=24.86，

=40.21，

<0.05)，提示血清IL-33诊断CHB患者发生肝纤维化的临床效能较高。当IL-33截断值为563.52 pg/ml时，此时敏感度和特异度分别为92.14%和96.33%。结果见图1和表4。

CHB可逐渐发展为肝纤维化，而持续的肝纤维化可导致肝硬化及肝癌的发生，故对CHB患者发生肝纤维化进行早期诊断和及时治疗具有重要意义。血清学标志物具有无创性、易于检测和操作等多种优势，且在一定程度上能反映肝脏整体的病变情况，使得血清学标志物诊断CHB患者发生肝纤维化的研究成为近年来的热点。

1.4.4 血清IL-33表达水平 所有研究对象均检测IL-33水平。

2.1 两组研究对象生化指标及血清IL-33水平的比较 见表1。

以上述2个主成分因子为变量绘制载荷图和得分图，详见图5。由图5可知，载荷图结果与初始因子载荷矩阵结果相同，距离原点较远的点为主成分因子1和主成分因子2中权重值较大的成分；由得分图可知，10批药材样品分散在不同区域，表明药材样品质量与地域分布有关。

3 讨论

2.2 不同肝纤维化程度CHB患者血清IL-33的表达水平 见表2。

IL-33于2005年被发现，属于IL-1家族中的一员，主要在机体的上皮细胞及成纤维细胞高表达

，研究认为IL-33与机体多种脏器纤维化的发生发展均密切相关

。本研究对CHB患者肝纤维化严重程度进行不同分期后发现，不同分期患者血清中IL-33表达水平存在显著差异，且IL-33水平随着肝纤维化分期的升高而升高；此外，FIB-4、S指数及肝脏B超评分均是既往评估肝纤维化的指标，相关性分析结果同样证实血清IL-33水平与FIB-4、S指数及B超评分均呈现显著正相关性，提示IL-33能显著促进CHB患者肝纤维的进展。研究证实IL-33通过其受体作用于Th2细胞从而促进IL-4、IL-13等Th2型细胞因子的高表达，而IL-4及IL-13对维持肝脏炎症和介导肝纤维化的发生具有重要作用

；另一方面，IL-33与其受体ST2，即IL-33/ST2信号通路参与肝纤维化的调控进程

，Marvie等

发现，小鼠和人肝脏纤维化组织中IL-33 mRNA和ST2 mRNA表达水平均显著上调，在肝纤维化进程中扮演重要作用且异常活化的肝星状细胞是IL-33主要来源，对IL-33受体ST2进行特异性敲除后能显著改善肝纤维化的程度。固有淋巴样2型细胞(ILC2)属于IL-33的一个经典效应细胞，ILC2在受IL-33刺激后能诱导Th2细胞炎性反应从而参与肝纤维的发生发展

。朱海军等

发现采用IL-33抗体对肝纤维化小鼠模型进行干预后能显著改善肝纤维化严重程度和降低血清ALT和AST水平，且小鼠肝脏匀浆组织中IL-4和IL-13水平显著降低，肝脏组织中MMP9表达水平同样降低，而MMP9早已被证实促进了肝纤维化的发病机制

。本研究中对反映肝纤维化的血清学指标如PCⅢ、Ⅳ-C、HA、LN检测后发现，IL-33与上述指标均呈现显著正相关性，提示IL-33可作为诊断肝纤维的一项血清学指标。

将饲料粉碎至一定粒度（过40目筛），放置阴凉干燥处密闭保存。将所需用的磷酸盐缓冲溶液、氢氧化钠溶液、盐酸溶液、磺基水杨酸溶液配好备用，实验所需的胃蛋白酶溶液、胰液素和氯霉素溶液在做实验前配制。

蔡元培对但采尔赴北平的要求表示支持，2月9日致许寿裳的信中说：“但采尔夫妇既往北平，使我等减少责任，亦复甚好。”[11]14考虑到北平没有民族学组，蔡元培又要求许寿裳等把但采尔介绍到历史语言研究所，因为这个所的人类学“与民族学密接，且考古学与语言学，亦与民族学有关”[11]14。

CHB患者血清IL-33水平显著升高，同时在一定程度上可反映肝纤维的严重程度。本研究结果显示，血清IL-33诊断CHB患者肝纤维化的AUC为0.951，提示血清IL-33诊断CHB患者肝纤维化的临床效能较高，敏感度和特异度分别为92.14%和96.33%。另一方面，FIB-4、S指数、B超评分也是临床上常用于评估CHB患者肝纤维化的指标，但FIB-4和S指数受到的影响因素较多，而血清中IL-33水平较为稳定，受到影响因素较少。我们对比IL-33与FIB-4、S指数和B超评分在诊断CHB患者肝纤维化临床效能的差异，发现IL-33诊断CHB患者肝纤维化的临床效能均显著高于FIB-4、S指数和B超评分，提示IL-33诊断CHB患者肝纤维化的准确率较高，可在临床推广。

综上所述，CHB患者血清IL-33水平促进了肝纤维的发生发展，且能够较为准确的评估CHB患者发生肝纤维化，这一结果对于临床上动态检测CHB患者肝纤维化的进展程度具有一定参考意义。然而，也需要大样本量的结果来证实我们的结论，同时IL-33如何参与CHB患者肝纤维化的作用机制还有待进一步研究。

[1] Toosi AE. Liver fibrosis: causes and methods of assessment, a review[J]. Rom J Intern Med,2015, 53(4):304-314.

[2] Zoubek ME, Trautwein C, Strnad P. Reversal of liver fibrosis: from fiction to reality[J]. Best Pract Res Clin Gastroenterol,2017, 31(2):129-141.

[3] Cayrol C, Girard JP. Interleukin-33 (IL-33): A nuclear cytokine from the IL-1 family[J]. Immunol Rev,2018, 281(1):154-168.

[4] Huan SL, Zhao JG, Wang ZL,

. Relevance of serum interleukin-33 and ST2 levels and the natural course of chronic hepatitis B virus infection[J]. BMC Infect Dis,2016, 16: 200.

[5] Zhao R, Yu Z, Li M,

. Interleukin-33/ST2 signaling promotes hepatocellular carcinoma cell stemness expansion through activating c-Jun N-terminal kinase pathway[J]. Am J Med Sci,2019, 358(4):279-288.

[6] 中华医学会肝病学分会, 中华医学会感染病学分会. 慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)[J]. 中华肝脏病杂志, 2015, 23(12): 888-905.

[7] 杨晴，刘东屏，李鲁平，等．慢性乙型肝炎肝纤维化非创伤性诊断模型的建立与评价[J]．中华肝脏病杂志, 2017, 25(1): 15-20.

[8] Kotsiou OS, Gourgoulianis KI, Zarogiannis SG. IL-33/ST2 axis in organ fibrosis[J]. Front Immunol,2018, 9:2432.

[9] Peine M, Marek RM, Löhning M. IL-33 in T cell differentiation, function, and immune homeostasis[J]. Trends Immunol,2016, 37(5):321-333.

[10] Koyama Y, Brenner DA. Liver inflammation and fibrosis[J]. J Clin Invest,2017, 127(1):55-64.

[11] Marvie P, Lisbonne M, L'helgoualc'h A,

. Interleukin-33 overexpression is associated with liver fibrosis in mice and humans[J]. J Cell Mol Med,2010, 14(6B):1726-39.

[10] Petrova T, Pesic J, Pardali K,

. p38 MAPK signalling regulates cytokine production in IL-33 stimulated type 2 innate lymphoid cel-ls[J]. Sci Rep,2020, 10(1):3479.

[13] Zhu J. T helper 2 (Th2) cell differentiation, type 2 innate lymphoid cell (ILC2) development and regulation of interleukin-4 (IL-4) and IL-13 production[J]. Cytokine, 2015, 75(1):14-24.

[14] 朱海军, 闫琼琼, 陈巍, 等. 腹腔注射IL-33抗体对CCl4诱导小鼠肝纤维化发病的作用[J]. 国际免疫学杂志, 2019, 42(3):290-295.

[15] Wang Q, Liu X, Zhang J,

. Dynamic features of liver fibrogenesis and fibrosis resolution in the absence of matrix metalloproteinase-9[J]. Mol Med Rep,2019, 20(6):5239-5248.