血清M2BPGi、MFAP4水平与慢性乙型肝炎病情进展的相关性*

秦 旭 侯志云 张 松 马 丽 朝浩鹏

1.北京市大兴区人民医院感染科 (北京， 102600) 2.中国中医科学院望京医院检验科

慢性乙型肝炎(CHB)是由于机体感染乙型肝炎病毒(HBV)引起的肝脏疾病，可发展为肝纤维化、肝硬化、肝癌，危及患者生命健康[1]。CHB发病机制尚未完全阐明，但有学者认为其发病进展与免疫反应、炎症反应、糖链变化、细胞外基质(ECM)合成/降解失衡等有关[2，3]。Mac-2结合蛋白糖基化异构体(M2BPGi)是由肝星状细胞合成的糖蛋白，其水平增加与CHB患者发生肝纤维化、肝细胞癌的高风险有关，M2BPGi可作为评估疾病进展的指标[4]。微纤维相关蛋白4(MFAP4)是一种ECM蛋白，其与CHB患者肝纤维化程度及肝组织炎症活动分级相关，MFAP4可成为评估CHB进展的标志物[5]。但M2BPGi、MFAP4在不同程度CHB患者血清中的水平及与肝功能损伤指标的相关性鲜有研究，基于此，本研究通过检测CHB患者血清M2BPGi、MFAP4水平，分析两者与疾病进展的关系，以期为临床评估CHB患者病情提供一定参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年4月至2019年4月在我院诊治的84例CHB患者进行研究，称CHB组，其中男性46例，女性38例；年龄35～65岁，平均(48.02±9.56)岁。并选取同期体检正常者86例进行对照研究，称健康组，其中男性47例，女性39例；年龄34～64岁，平均(47.97±9.18)岁。CHB组与健康组患者性别比例、年龄等资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。对CHB患者进行组织病理学检测，采用Metavir评分系统对患者肝纤维化程度进行分期[6，7]，其中无纤维化组36例(F0期)、轻中度纤维化组26例(F1～F3期)、重度纤维化组22例(F4期)。

1.2 诊断标准 根据《CHB防治指南(2015年版)》有关CHB判定标准进行诊断[6]。

1.3 纳入标准 ①符合CHB诊断标准；②经病毒学、血清学、生化实验指标检查确诊；③对本项研究均知情同意。所有受试者或其直系亲属签署知情同意书，本研究符合《赫尔辛基宣言》，获得本院伦理委员会审核、批准。

1.4 排除标准 ①合并人类免疫缺陷病毒、丙型、丁型肝炎病毒感染者；②合并免疫性肝病、酒精肝、药物性肝病等其他慢性肝脏疾病者；③合并严重心、肺、肾等器官疾病者；④妊娠哺乳期女性；⑤合并精神智力障碍者。

1.5 主要试剂与仪器 人M2BPGi酶联免疫吸附剂测定(ELISA)试剂盒(货号：062831)购买于YAD；人MFAP4 ELISA试剂盒(货号：E-EL-H0581)购买于ELABS，HBV DNA检测试剂盒(货号：11585614910)购买于ROCHE公司；酶标仪(型号：SpectraMax iD3)购买于Molecular Devices；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)仪(型号：ABI 7500Fast)购买于Thermofisher。

1.6 样本收集 收集所有研究对象空腹外周血6～7 ml，室温下自然凝集，4 800 r/min离心5 min，收集上层血清，分装于无菌EP管中，于-80℃冰箱中保存。

1.7 ELISA法检测血清M2BPGi、MFAP4水平 按照人M2BPGi、MFAP4 ELISA试剂盒说明书配制一系列浓度的标准样品，利用酶标仪检测不同浓度标准品在450 nm处的吸光度，绘制标准品回归曲线。取适量冻存血清样本，解冻，测定样本在450 nm处的吸光度值，根据标准回归曲线计算血清M2BPGi、MFAP4浓度。

1.8 HBV DNA水平检测 采用荧光定量PCR法检测HBV DNA水平，程序参数设置为：93℃ 1 min，1个循环；93℃ 45 s，55℃ 45 s，30个循环，于55℃ 45 s时采集荧光，最低检测下限100 IU/ml。

2 结果

2.1 两组血清M2BPGi、MFAP4水平比较 与健康组相比，CHB组患者血清M2BPGi、MFAP4水平均显著升高(P<0.01)，见表1。

表1 两组患者血清M2BPGi、MFAP4水平比较

2.2 不同病情程度CHB患者血清M2BPGi、MFAP4、ALT、AST、HBV DNA、LSM、Alb水平比较 与无纤维化组相比，轻中度、重度纤维化组患者血清M2BPGi、MFAP4、ALT、AST水平及HBV DNA水平均显著升高(P<0.05)；与轻中度纤维化组相比，重度纤维化组患者血清M2BPGi、MFAP4、ALT、AST水平及HBV DNA水平均显著升高(P<0.05)，见表2。

2.3 CHB患者血清M2BPGi、MFAP4水平与ALT、AST、HBV DNA、LSM、Alb关系 Pearson法分析显示，CHB患者血清M2BPGi、MFAP4水平与ALT、AST、HBV DNA水平及LSM均呈正相关(P<0.05)，与Alb呈负相关(P<0.05)，见表3。

表2 不同病情程度CHB患者血清M2BPGi、MFAP4、ALT、AST、HBV DNA、LSM、Alb水平比较

表3 CHB患者血清M2BPGi、MFAP4水平与ALT、AST、HBV DNA、LSM、Alb相关性

2.4 CHB患者血清M2BPGi水平与MFAP4的相关性 Pearson法分析显示，CHB患者血清M2BPGi水平与MFAP4水平呈正相关(r=0.462，P<0.05)，见图1。

图1 CHB患者血清M2BPGi水平与MFAP4的关系

2.5 CHB患者发生肝纤维化的影响因素 以CHB患者是否发生肝纤维化(发生=1，不发生=0)，以M2BPGi、MFAP4、ALT、AST、HBV DNA、LSM、Alb等为自变量纳入Logistic回归分析，结果显示，M2BPGi、MFAP4、ALT、AST、HBV DNA、LSM均是影响CHB患者发生肝纤维化的危险因素(P<0.05)，Alb是影响CHB患者发生肝纤维化的保护因素(P<0.05)，见表4。

表4 Logistic回归分析CHB患者发生肝纤维化的影响因素

3 讨论

CHB是临床常见的一种慢性肝脏疾病，腹胀、恶心、乏力、肝区疼痛等为主要临床特征，其不仅损害肝脏功能，还可侵犯心脏、肾脏等器官，引起多器官病变，对患者生存质量构成严重威胁[8]。因此，寻找CHB发病的影响因素，及时监控，对改善患者生活质量有一定积极意义。

糖链在疾病发展及生命进程中发挥着特异性识别、介导、调控信号转导作用，糖链结构改变可引起感染性疾病、肿瘤的发生，可反映细胞功能改变、分化、肝纤维化进展等情况[9]。既往研究显示，Mac-2结合蛋白(M2BP)是一类可存在于血浆、胞浆、组织液中的N型糖基化蛋白，其在传染病、炎症性疾病、癌症中水平明显升高，其可作为肝纤维化、肝癌的生物标志物[10]。另有研究显示，紫藤凝集素阳性M2BP(WFA+M2BP)是一种糖基化蛋白，其可预测CHB患者肝纤维化[11]。此外，M2BPGi是M2BP的糖链异构体，杨以良等[12]认为随着丙型肝炎肝纤维化加重，M2BP在表达水平及结构上发生明显变化，但其敏感性较差，而M2BPGi在肝脏病变中有较强特异性，可更好反映肝纤维进程。以上研究表明，糖链异常与肝脏病变密切相关。血清M2BPGi水平与CHB患者发生肝细胞癌的风险呈正相关，其参与CHB病理发展过程，M2BPGi可作为独立预测肝细胞癌的因子[13]。本研究中CHB组患者血清M2BPGi水平明显高于健康组，且M2BPGi水平随CHB病情加重呈上升趋势，提示M2BPGi可能在CHB发展过程中发挥重要作用，有利于评估CHB患者病情，推测M2BPGi糖链中含有大量N聚糖，其水平升高，调节细胞免疫、信号转导，从而CHB促进发病过程。

MFAP4是先天免疫模式识别分子，含有C-末端纤维蛋白原样结构域及N -端整合素结合序列(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列)，作为细胞受体整合素配体参与细胞间的相互作用及细胞黏附[14]。MFAP4作为ECM重要成分，其可与不同胶原蛋白发生特异性结合，此结合有钙依赖性[5]，其水平降低可抑制嗜酸性粒细胞炎症作用、气道重塑，MFAP4在哮喘中水平升高，与局部嗜酸性粒细胞趋化因子水平相关，其在哮喘疾病发展中发挥促进作用[15]。Bracht等[16]通过对542例丙型肝炎患者进行回顾性分析，结果显示，MFAP4在丙型肝炎患者中水平异常，其可作为评估肝纤维化程度的生物学标志物，且抗病毒治疗后，血清MFAP4水平降低，肝纤维化程度降低，MFAP4有助于判定丙型肝炎患者病情进展[17]。以上研究表明，MFAP4可能在免疫炎症类疾病中起重要作用。本研究中CHB组患者血清MFAP4水平明显高于健康组，且CHB疾病越严重，MFAP4水平升高越明显，提示MFAP4可能与CHB疾病进展关系密切，究其原因，可能是MFAP4水平升高促进其钙依赖性地与胶原蛋白结合，促进炎症反应和ECM转化[5]，从而促进CHB发展。

HBV感染机体后，易引发肝损害，导致CHB患者血清ALT、AST、Alb水平变化，三者水平均可一定程度反映CHB患者肝损伤程度[18，19]；HBV DNA是HBV复制的主体，其水平与肝损伤严重程度呈正比，可直接反映CHB感染情况[20]；且LSM有利于评估CHB患者肝纤维化程度[21]。本研究中CHB患者血清ALT、AST、HBV DNA、LSM水平随CHB疾病加重而升高，ALB水平随CHB疾病加重而降低，提示ALT、AST、HBV DNA、LSM、ALB可能在CHB发展中有重要作用，三者可有效地反映CHB进展及肝损伤情况。本研究中CHB患者血清M2BPGi、MFAP4水平与ALT、AST、HBV DNA、LSM水平均呈正相关，与ALB呈负相关，提示M2BPGi、MFAP4可能与肝功能、HBV感染相互影响，从而协同影响CHB发展。进一步研究显示，CHB患者血清M2BPGi水平与MFAP4水平呈正相关，M2BPGi可能与MFAP4相互作用，进而影响信号转导、免疫炎症反应，从而共同促进CHB发展，但具体作用机制有待深入探究。此外，M2BPGi、MFAP4、ALT、AST、HBV DNA、LSM均是影响CHB患者发生肝纤维化的危险因素，Alb是影响CHB患者发生肝纤维化的保护因素，提示血清M2BPGi、MFAP4、ALT、AST、HBV DNA水平及LSM升高，血清Alb水平降低均可能会增加CHB患者发生肝纤维化风险，及时监测上述指标，有助于临床及时防治肝纤维化。

综上所述，M2BPGi、MFAP4在CHB患者血清中水平升高，两者可能相互影响，从而共同在CHB发展中起重要作用，检测两者水平有助于判定CHB患者病情。但本研究未将CHB患者纤维化细分，未深入探究M2BPGi、MFAP4关系，后续将增加样本量深入研究。