胎膜早破孕妇胎膜组织中HLA-G、ox-AAT表达及与MMP-9相关性分析

周惠梅 王 暖 贾喜利

河南省获嘉县人民医院妇产科 453800

胎膜早破是一种临床前胎膜发生破裂的产科常见并发症，发生率已超过20%，与生殖系统感染、营养不良、胎膜受力失衡、羊膜腔压力过大等因素有关[1-2]。妊娠达到37周后出现胎膜早破称为足月胎膜早破，未达到37周称为足月前胎膜早破，其中足月胎膜早破发生的概率远高于未足月胎膜早破[3]。但孕妇出现胎膜早破后胎膜屏障消失，进而导致早产、围产期感染、新生儿窒息、绒毛膜羊膜炎等并发症出现的概率上升，已严重危害母婴健康，故寻求与胎膜早破发生相关的特异性分子标志物是临床研究的重点。人类白细胞抗原G(HLA-G)在母胎界面的表达对母胎免疫耐受和维持正常妊娠有重要作用，被证实参与孕妇免疫调节，发挥免疫抑制的功能，当其水平异常时预示妊娠期可能出现高血压、习惯性流产等不良后果[4]；氧化型α1-抗胰蛋白酶(ox-AAT)是丝氨酸蛋白酶抑制剂氧化后生成的无活性生成物，对孕妇胎盘组织具有保护功能，且在炎症反应中扮演重要角色并参与胎膜早破的发生[5]；基质金属蛋白酶(MMP-9)是一种明胶酶类，对于保持孕妇胎膜的完整性具有重要意义[6]。目前关于HLA-G、ox-AAT、MMP-9在胎膜早破发生机制的作用尚未明确，且HLA-G、ox-AAT表达及与MMP-9相关性研究尚无，故本研究通过对148例孕妇的临床资料进行分析比较，旨在分析几项因子的表达及相互作用并为胎膜早破的发生机制提供客观依据，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将本院2020年1月—2021年1月收治的148例胎膜早破孕妇作为研究对象，回顾性分析其临床资料。纳入标准：(1)符合《妇产科学》中关于胎膜早破的诊断标准；(2)临床资料完整；(3)均为初产妇、单胎、头位的自然分娩孕妇；(4)无吸烟等不良习惯；(5)无复发性流产。排除标准：(1)合并临床感染症状；(2)合并其他妊娠并发症；(3)合并内科、外科疾病。148例胎膜早破孕妇依据分娩孕周分为A组(足月胎膜早破)、B组(未足月胎膜早破)，另选取60例同期来院进行健康检测的孕妇作为对照组。A组86例，孕妇年龄21～35岁，平均年龄(27.59±3.21)岁，平均孕周(39.65±2.30)周；B组62例，孕妇年龄22～33岁，平均年龄(27.16±3.19)岁，平均孕周(30.16±3.27)周；对照组60例，孕妇年龄23～34岁，平均年龄(27.44±3.30)岁，平均孕周(39.51±2.91)周。三组间一般资料比较无统计学差异(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 标本采集：抽取所有产妇清晨空腹外周血3ml，3 000r/min离心10min后分离血清，将样本放置在-70℃环境内保存待测；在孕妇胎盘分娩前抽取新生儿脐血3ml，离心储存步骤同上。胎盘娩出之后，在距离胎膜破口>5cm处取数块大小3cm×3cm的胎膜组织，采用0.9%氯化钠溶液清洗干净，干燥之后使用大头针固定作卷状，而后采取10%甲醛固定、常规石蜡包埋，待测。

1.2.2 指标检测：采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测母血、脐血中HLA-G、ox-AAT、MMP-9水平，试剂盒购自美国R&D公司。采用免疫组织化学SP法检测胎膜组织中HLA-G、ox-AAT、MMP-9水平，鼠抗人HLA-G单克隆抗体购自武汉小木虫生物技术有限公司，山羊抗人ox-AAT多克隆抗体、小鼠抗人MMP-9单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司。

2 结果

2.1 三组孕妇母血中HLA-G、ox-AAT与MMP-9水平比较 A、B组孕妇母血中HLA-G水平显著低于对照组，且B组显著低于A组；A、B组孕妇母血中ox-AAT与MMP-9水平均显著高于对照组，且B组显著高于A组；组间差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 三组孕妇母血中HLA-G、ox-AAT与MMP-9水平比较结果

2.2 三组孕妇脐血中HLA-G、ox-AAT与MMP-9水平比较 对照组孕妇脐血中HLA-G水平显著高于A、B组，且A组显著高于B组；对照组孕妇脐血中ox-AAT、MMP-9水平显著低于A、B组，且A组显著低于B组；组间差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 三组孕妇脐血中HLA-G、ox-AAT与MMP-9水平比较结果

2.3 三组孕妇胎膜组织中HLA-G、ox-AAT与MMP-9水平比较 A、B组孕妇胎膜组织中HLA-G水平显著低于对照组且B组显著低于A组，A、B组孕妇ox-AAT与MMP-9水平均显著高于对照组且B组显著高于A组，组间差异均具有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 三组孕妇胎膜组织中HLA-G、ox-AAT与MMP-9水平比较

2.4 胎膜组织中HLA-G、ox-AAT表达与MMP-9水平相关性分析 Person相关性分析结果显示，HLA-G与MMP-9水平呈显著负相关(r=-0.117，P<0.05)；ox-AAT与MMP-9水平呈显著正相关(r=0.727，P<0.05)，见表4。

表4 胎膜组织中HLA-G、ox-AAT表达与MMP-9水平相关性分析结果

3 讨论

胎膜主要由羊膜及绒毛膜构成，保证胎膜的完整性是羊膜腔内羊水量充足的基础，且能够防止细菌、病原微生物等入侵，若胎膜出现破裂易引发一系列危害母婴健康的症状出现。目前，临床多认为胎膜早破是因胶原蛋白构成成分的过分降解而引发的[7]，但未找到有效的预防和治疗方案。随着生物学技术的进步与发展，寻求胎膜早破的特异性生物标志物是现今研究的重点，本文通过分析胎膜早破孕妇胎膜组织中HLA-G、ox-AAT与MMP-9指标的表达，为其寻求可靠的临床指标，为母体及胎儿安全保驾护航。

本研究结果显示，胎膜早破孕妇母血、脐血、胎膜组织中HLA-G水平显著下降且低于正常孕妇，ox-AAT与MMP-9表达显著上升且高于正常孕妇，其中足月胎膜早破孕妇HLA-G水平高于足月前胎膜早破孕妇，ox-AAT与MMP-9水平低于足月前胎膜早破孕妇，究其原因在于：(1)HLA-G是用于维持孕妇妊娠正常的免疫耐受分子，对细胞具有滋养和保护作用，其在胎膜早破孕妇中呈现低水平可能与抑制作用有关，表现为对母体NK细胞、T细胞对胎儿的免疫功能提高，进而导致胎膜出现破损，引发胎膜早破；(2)ox-AAT是AAT的氧化表现方式，当孕妇的机体出现炎症反应时，ox-AAT水平显著上升，导致AAT的表达下降，对机体炎性反应加剧，促使水解并导致胎膜早破的发生，且该水平与正常孕妇相比表达量显著要高，可能预示着羊膜腔炎症反应程度剧烈；(3)MMP-9在孕妇胎膜组织中能够起到降解Ⅳ胶原及弹性蛋白的作用，在孕妇早期的血清中很难检测出MMP-9水平，但随着妊娠时间的临近，表达量上升，当该水平出现异常时代表对胎膜细胞外基质的降解作用增加，此时胎膜韧性下降，从而出现胎膜早破。除此之外，本研究结果指出，ox-AAT与MMP-9水平呈现显著正相关(P<0.05)，这可能是因为：ox-AAT在正常孕妇的胎膜组织中表达无异常，但在胎膜早破孕妇中表达量上升，提示与孕妇机体处于炎症反应相关，炎症反应使中性粒细胞活性上升，释放大量炎性因子，引起AAT氧化，进而加速胎膜细胞外基质降解。MMP-9对AAT具有灭活及剪切作用，故可能存在抑制关联，因此两者呈现显著正相关。HLA-G与MMP-9水平在本研究中显示负相关，可能是由于当HLA-G水平降低时，会引发NK细胞的表达量上升，降低抑制作用，由于NK细胞能够通过转录调控等作用引起MMP-9水平的显著上升，故两者间呈现负相关[8]。但本研究结果可能是由于存在一定的局限性，例如样本数量有限等原因导致，在今后的研究中将会进一步扩大样本容量，使研究结果更具有说服力。

综上所述，孕妇母血、脐血及胎膜组织中的HLA-G表达下降、ox-AAT、MMP-9表达上升预示着孕妇胎膜早破和早产的发生，孕妇胎膜组织中ox-AAT水平与MMP-9指标呈现显著正相关，HLA-G水平与MMP-9指标呈现显著负相关，提示检测以上指标能够预测孕妇是否出现胎膜早破或早产，为其妊娠情况提供科学依据。