影响虎红平板凝集实验检测结果的原因分析

2022-01-01姚巧珍

河南畜牧兽医 2022年1期

姚巧珍

（内乡县动物疫病预防控制中心，河南内乡 474350）

虎红平板凝集实验是一种敏感性高、特异性强、操作简便、检测快速的血清学检测方法。常用于牛羊布鲁氏菌病普查净化的血清学监测初筛。影响虎红平板凝集实验检测结果的因素，主要是人员、设备、被检样品、操作、检测环境这五种因素，作为一名合格的检测人员应对每一个检测环节认真分析，排除一切可能引起检测结果不准确的因素，使检测的结果准确、可靠，为布鲁氏菌病的普查净化提供可靠服务。

在众多的兽医实验室检测方法中，虎红平板凝集实验是一种最简单实用的检测方法。该方法敏感性高、特异性强、操作简便、检测快速，常用于牛羊布鲁氏菌病普查净化的血清学监测初筛。其检测结果的准确性直接影响布病净化的进度和普查效果，由于布病传播的特殊性和危害性，漏检一例将会导致全群净化工作的延后甚至失败，因此在监测过程中一定要保证检测结果的准确性和可靠性。

1 虎红平板凝集实验检测方法

首先准备实验材料，包括虎红平板凝集抗原、标准阳性血清（阴性血清由制标单位提供，按说明书使用），新鲜、无明显蛋白凝块、无溶血和无腐败气味的被检血清，标准的一次性反应板，50 μl 或100 μl 的单道移液器,供搅拌用的混合棒。然后进行实验检测，实验前，先将血清和抗原在室温下放置30 min；再将反应板上标记被检血清号，然后加相应被检血清30 μl；接着在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原30 μl；再用混合棒搅拌血清和抗原，使之充分混合，在5 min内观察结果。要求每次试验应设阴、阳性血清对照，最后进行结果判定。在阴、阳性血清对照成立的前提下，对被检血清进行判定：受检血清在3～4 min 内出现肉眼可见凝集现象者即判为阳性（+），无凝集现象呈均匀粉红色者判为阴性（-）。

2 影响虎红平板凝集实验结果的几种因素

2.1 人员的不规范操作导致实验结果的不准确

在整个检测过程中，检测员起着关键性的主导作用，实验室的检测能力很大程度上取决于人员的业务素质和工作能力，人员不规范的操作直接影响检查结果的准确性。

2.2 使用不合格的设备、标准物质、实验材料导致实验结果的不准确

仪器设备、标准物质、实验材料是实验室开展检测工作所必需的重要资源，也是保证检测结果准确的基础。实验室设备管理为监测数据的代表性、准确性、精密性、可比性和完整性提供了有力的基础。如使用被污染的移液器，或未经过校准的移液器均会导致加样时加样量不准确造成实验结果的不准确；使用过期、失效、没有批准文号的抗原也会导致实验结果的不准确；用不合格的反应板也会导致实验结果的不准确。

2.3 被检血清溶血或腐败导致检测结果的不准确

在整个检测过程中，血清样品的质量直接影响检测结果的准确性。如使用溶血、腐败的样品均会导致结果的不准确。

2.4 不按操作规程进行操作导致检测结果的不准确

如使用移液器不规范，加样的量过多或过少，加样时枪头直接接触样品等不规范操作均会导致实验结果的不准确。

2.5 实验室环境不达标导致检测结果的不准确

实验室环境建设是实验室的重要组成部分，是反映实验室水平及实验室实力的重要标志，也是实验室监测能力必备的物质基础。实验室受污染及温湿度过高、过低，都会导致实验检测的结果不准确。

3 确保实验结果准确应采取的措施

3.1 检测人员要持证上岗

实验室检测员是至关重要且是根本性的影响因素，因此实验室应对检测技术人员进行相关培训和考核，对培训活动及培训效果进行有效评价，对培训中和已培训人员进行适当监督。检测人员必需持证上岗并定期进行培训、考核、监督。

3.2 仪器设备、标准物质和实验材料要符合检测要求

仪器设备、标准物质和实验材料是实验室开展检测工作所必需的重要资源，也是保证检测质量获取可靠数据的基础，直接决定了检测结果的质量。对仪器设备应在采购、检定、标识、使用、维护、保养、期间核查等方面展开，以确保检测结果的质量。因此移液器要做好期间核查和定期校准，做好维护和保养，每做完一次实验，要求用酒精擦拭，预防移液器被污染。所用的实验抗原有标准批号并按要求保存且要在有效期内。实验用的反应板要求用标准的一次性布病专用反应板。

3.3 血清样品要保证质量

血清样品要求清亮、不溶血、不腐败。采血时夏季温度过高，采好的血在阳光下暴晒或剧烈震荡均容易造成血清样品腐败和溶血。冬季温度过低，血液分离不出血清会导致实验结果的不准确。因此，在采样结束时血清未凝固前不得剧烈震荡，否则容易造成溶血。夏季避免阳光暴晒，当天不能检测的要及时放置在冰箱2～4℃保存，防止血清腐败。冬春季气温过低时，保温箱内放入50℃的矿泉水瓶（内装温水），采血后立即放入离心管架上，防止溶血，否则也会影响检验结果。