ABCC4在T2DM伴大血管病变患者外周血中的表达及意义

聂 兴

(锦州市中心医院 内分泌科,辽宁 锦州121000)

2型糖尿病(Type 2 diabetes，T2DM)是较常见的糖尿病类型，患者多伴随机体糖脂代谢紊乱，且随着疾病的不断进展，继发糖尿病足、糖尿病视网膜病变、大血管病变等并发症的风险增加[1]。研究显示，T2DM伴大血管病变的发生主要为大中血管动脉粥样硬化、内膜纤维增生、动脉中层钙化等所致的管腔狭窄，其病变类型包括心血管病变、脑血管病变、四肢及颈部大血管病变等，严重影响着患者生命健康[2]。目前随着对T2DM伴大血管病变的不断深入研究发现，其发生机制较为复杂，是在糖脂代谢紊乱的基础上与多种相关因素共同作用相关，其中对细胞因子改变的研究最多[3]。三磷酸腺苷结合转运家族蛋白4(Adenosine triphosphate binds to the transport family protein 4，ABCC4)属ABC转运蛋白家族成员之一，其在临床上被认为与恶性肿瘤相关，但关于其与T2DM伴大血管病变的关系研究较少，仅有Marumo等[4]在2015年的1项研究中认为可能与T2DM相关。基于上述背景，在本文研究中探讨ABCC4在T2DM伴大血管病变患者外周血中的表达及意义，为临床上T2DM伴大血管病变的研究提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2020年3月-2021年3月锦州市中心医院收治的T2DM患者216例，按照是否合并大血管病变分为单纯T2DM组135例、T2DM伴大血管病变组81例，另外同期选取行健康体检的80例健康志愿者作为健康对照组。单纯T2DM组男68例，女67例，年龄45-67岁，平均年龄(53.20±5.46)岁，BMI 23.46-25.75 kg/m2，平均BMI(24.15±1.00)kg/m2；T2DM伴大血管病变组男41例，女40例，年龄43-66岁，平均年龄(52.19±5.33)岁，BMI 23.01-25.50 kg/m2，平均BMI(24.00±1.09)kg/m2；健康对照组男38例，女42例，年龄45-68岁，平均年龄(53.86±5.19)岁，BMI 23.24-25.99 kg/m2，平均BMI(24.68±1.13)kg/m2；3组在一般资料中均衡可比(P>0.05)。所有研究对象及家属均知情同意本次研究，且经医院伦理委员会审核批准。

纳入标准：T2DM患者均符合《中国2型糖尿病防治指南(2020年版)》[5]中关于T2DM的诊断标准，且T2DM伴大血管病变组经临床、心电图以及影像学检查确诊合并大血管病变，包括心血管病变、脑血管病变、四肢及颈部大血管病变等。健康对照组无糖尿病史，无血管病变史，身体健康。均自愿参与本次研究。

排除标准：1型糖尿病者；合并糖尿病酮症酸中毒、糖尿病高渗性昏迷等糖尿病急性并发症者；急慢性感染性疾病者；近期有手术外伤史者；合并恶性肿瘤者；沟通障碍者；精神障碍者。

1.2 方法

1.2.1空腹血糖、血脂、CHE、Lp(a)水平检测 采集3组研究对象入组次日清晨空腹静脉血3 ml，使用7100 全自动生化分析仪(日立公司)测定空腹血糖、血脂总胆固醇(Cholesterol total，TC)、甘油三酯(Glycerin trilaurate，TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、胆碱酯酶(Cholinesterase，CHE)、脂蛋白a(Lipoprotein a，Lp(a))水平。

1.2.23磷酸腺苷结合转运家族蛋白4(Adenosine triphosphate binds to the transport family protein 4，ABCC4)表达量测定 采集3组研究对象入组次日清晨空腹静脉血3 ml，将采集到的标本10 000×g离心处理10 min，对上清液进行提取后，BCA进行蛋白定量检测，在2×SDS凝胶缓冲液中加入50 μg蛋白，在100℃环境中加热5 min有助于蛋白发生变性。凝胶电泳完、转膜，取膜，4℃环境下在5%脱脂牛奶中固定、封闭处理时间为1 h，将一抗使用0.05%-0.1% TBST给予稀释(ABCC4一抗为1∶1 000)，4℃孵育过夜保存，之后使用0.05%-0.1% TBST洗膜3次，每次为5 min，二抗被0.05%-0.1% TBST稀释(1∶10 000)，摇动孵育时间为 1 h，再次采用TBST连续洗膜3次，处理时间为5 min。DAB显色，定量分析蛋白表达情况，以GAPDH为内参。

1.2.3葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(Glucose-6-phosphatase catalyzes the subunits，G6PC)、二酰基甘油酰基转移酶2(Diacylglycerolyltransferase 2，DGAT2)表达量测定 G6PC、DGAT2表达量测定方法同1.2.2。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 3组研究对象空腹血糖、血脂、CHE、Lp(a)水平对比

如表1所示，与健康对照组相比，单纯T2DM组、T2DM伴大血管病变组血糖、血脂均较高；与健康对照组相比，单纯T2DM组、T2DM伴大血管病变组CHE降低，Lp(a)升高，差异具有统计学意义(P<0.05)；与单纯T2DM组相比，T2DM伴大血管病变组CHE降低，Lp(a)升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表1 3组研究对象空腹血糖、血脂、CHE、Lp(a)水平对比

2.2 3组研究对象ABCC4表达对比

如表2所示，健康对照组、单纯T2DM组ABCC4表达量对比，差异无统计学意义(P>0.05)；与健康对照组、单纯T2DM组相比，T2DM伴大血管病变组ABCC4表达量升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表2 3组研究对象ABCC4表达量对比

2.3 ABCC4与CHE、Lp(a)相关性分析

ABCC4与CHE负相关(r=-0.324,P=0.003)；ABCC4与(Lp(a))正相关(r=0.319,P=0.004)。

2.4 3组研究对象G6PC、DGAT2表达量对比

如表3所示，健康对照组、单纯T2DM组G6PC、DGAT2表达量对比，差异无统计学意义(P>0.05)；与健康对照组、单纯T2DM组相比，T2DM伴大血管病变组G6PC表达量降低，DGAT2表达量升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表3 3组研究对象G6PC、DGAT2表达量对比

2.5 ABCC4与G6PC、DGAT2的相关性分析

ABCC4与G6PC负相关(r=-0.349,P=0.001)；ABCC4与DGAT2正相关(r=0.324,P=0.003)。

3 讨论

当T2DM并发大血管病变后可使动脉产生粥样硬化，进而导致多数患者残疾或者死亡[6-7]。目前关于T2DM伴大血管病变的主要发病机制尚不完全明确。

ABCCs属于一类跨膜转运蛋白，生理条件下，在各种组织器官中表达，研究认为，其除了具有药物外排作用外，还对恶性细胞的细胞毒性具有防护作用，且每个成员均有自身独特的生理功能和底物特异性[8-9]。ABCC4属于ABCCs家族成员，是转录编码此家族中分子量最小的蛋白，研究显示[10-12]，ABCC4可识别和转运与谷胱甘肽偶合的底物，目前已经证实其与恶性肿瘤细胞耐药相关。谷文莎等[13]认为其同家族成员MRP8/14与2型糖尿病患者甲状腺功能相关，在本文中推测ABCC4可能与T2DM伴大血管病变有关，结果显示，与健康人相比，其在T2DM中表达未见升高和降低，但在T2DM伴大血管病变中表达升高，此结果提示ABCC4可能参与T2DM患者继发大血管病变过程。

本研究进一步分析其可能参与T2DM伴大血管病变的机制，发现ABCC4与CHE、G6PC负相关，与(Lp(a))、DGAT2正相关。其中CHE属于催化酰基胆碱水解酶，在人体中以同工酶的形式存在，其在T2DM中降低，这与T2DM患者糖脂代谢紊乱相关[14-15]。Lp(a)在临床上被认为是可独立引起动脉粥样硬化的原因，近年来有研究表明，其在T2DM患者中表达升高，尤其是在T2DM有并发症患者中表达更高[16]。G6PC属于6-磷酸葡萄糖酶催化亚基，其在机体内可经催化6-磷酸葡萄糖水解为磷酸、葡萄糖，维持机体内血糖水平，是调节机体糖代谢平衡的关键酶[17]。另外DGAT2被称为二脂酰甘油酰基转移酶，其在细胞内质网、脂滴中存在，可促进酰基辅酶与甘油二酯结合，完成甘油三脂的合成，其与T2DM患者机体糖脂代谢紊乱相关[18]。基于以上推测，ABCC4在T2DM伴大血管病变发挥作用途径可能与调控糖脂代谢的关键酶相关。

本研究首次分析ABCC4与T2DM伴大血管病变的关系，推测其作用机制，认为两者相关，但检索国内外研究并未有研究分析ABCC4与T2DM伴大血管病变的关系，且本次所纳入的样本量较少，在数据统计时可能存在一定的偏倚，因此上述结果还需后续研究大样本、多中心的分析，并验证本研究所推测的作用机制，以期望为临床上此病的诊治提供新方向。

综上所述，ABCC4在T2DM伴大血管病变患者外周血中表达升高，且与CHE、G6PC负相关，与(Lp(a))、DGAT2正相关，推测其在T2DM伴大血管病变发挥作用途径可能与调控糖脂代谢的关键酶相关。