何首乌复方口服液质量标准研究

苏 穆,王远敏,罗 敏

(遵义医科大学第三附属医院/遵义市第一人民医院,贵州 遵义563000)

何首乌复方口服液是贵州大学药物制剂室研发的专利制剂,其主要功能为补肝肾、行气活血,用于肝肾阴虚、头晕目昏、须发早白等症的治疗。何首乌复方口服液中有何首乌、黄精、太子参等多种中药成分,何首乌作为主要药物发挥了重要的治疗作用。何首乌中二苯乙烯苷(TSG)是主要有效活性成分[1],对于神经、心血管、消化、内分泌、泌尿、呼吸系统等疾病都有治疗作用[2-4]。具有保护神经、提高记忆力、抗衰老、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗氧化、抗炎、保肝、保护肾脏、抗骨质疏松、调节内分泌、增强造血功能、抗肿瘤等作用[5-7]。本研究通过一定的制剂工艺研制何首乌复方口服液,应用二苯乙烯苷(TSG)定性鉴别和含量测定来建立准确、可靠、专属性强的质量标准[10-11],为何首乌复方口服液的质量控制提供参考依据。

1 材料与设备

1.1 仪器

FA1004型电子分析天平(上海分析仪器总厂);UV200型紫外检测器(大连依利特分析仪器有限公司);LC-20AT型液相色谱仪泵主机(岛津);QT-330柱温箱(旗美)。

1.2 原料与试剂

本研究所用何首乌由同济堂药房提供,由贵阳中医学院何顺志教授鉴定为何首乌正品;2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-0一β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)对照品(中国药品生物制品研究院检定,批号:110943-201003);何首乌复方口服液(自制);甲醇(色谱纯,天津市大茂化学试剂厂);乙腈(色谱纯,天津市大茂化学试剂厂);乙醇(色谱纯,重庆川东化工[集团]有限公司)。

2 方法与结果

2.1 复方口服液的鉴别

取何首乌复方口服液20 m L,浓缩至1 m L,加乙醇4 m L,作为供试品溶液。另取二苯乙烯苷对照品,加乙醇制成每1m L含1mg的溶液,作为对照品溶液[9]。按照薄层色谱法(2015年《中国药典》附录V IB)试验[8],分别取上述3种溶液各10μL,点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯∶丙酮∶水∶甲苯(6.5∶5.5∶1.2∶0.7)混合溶液的上层溶液为展开剂展开,取出,晾干,以紫外灯365nm检识,供试品色谱中,与对照品相应位置上显相同色斑,阴性对照无干扰。见图1。

图1 鉴别结果

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(25∶75);流速:1 m L/min;柱温:35℃;检测波长:320 nm;进样量:20μL。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密吸取复方口服液5 m L,置10m L容量瓶中,加甲醇定容,摇匀,超声处理20 min,放置至室温,微孔滤膜过滤,取续滤液,备用。

2.2.3 对照品溶液的制备 取二苯乙烯苷标准品4.5mg精密称定,置于10m L容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,即得浓度为0.45 mg/m L的对照品溶液。

2.2.4 阴性对照品的制备 按何首乌复方口服液处方及制备工艺制备不含制何首乌的阴性样品,按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

2.2.5 专属性考察 精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液各20μL,按色谱条件:色谱柱:Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(25∶75);流速:1.0 m L/min;柱温:35℃;检测波长:320 nm;进样量:20μL,进行进样[12]。二苯乙烯苷对照品与供试品相同保留时间出现色谱峰,而阴性对照品与二苯乙烯苷对照品相同保留时间无色谱峰出现,证明口服液中的其他成分对测定结果无影响。见图2、图3、图4。

图2 二苯乙烯苷对照品色谱

图3 供试品色谱

图4 阴性对照色谱

2.2.6 线性关系考察 精密称量二苯乙烯苷对照品溶液0.5m L、1.0m L、1.5m L、2.0m L、2.5m L,定容于10m L量瓶中,精密称量各浓度对照品溶液20μL,按色谱条件测定。以峰面积积分值(Y)为纵坐标,对照品溶液浓度(X)为横坐标进行线性回归。得回归方程:y=47074x-195 386(r=0.999 3),表明二苯乙烯苷浓度在22.5~112.5μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系。见图5。

图5 何首乌二苯乙烯苷标准曲线

2.2.7 精密度试验 精密吸取浓度为0.45 mg/m L的对照品溶液20μL,按色谱条件注入液相色谱仪,重复进样6次,测定峰面积。RSD=1.82%<2%,表明该方法精密度良好。见表1。

表1 精密度试验

2.2.8 稳定性试验 精密吸取同一批浓度为0.45 mg/mL的对照品溶液,分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h按色谱条件进样20μL,测定峰面积。RSD=1.62%,<2%,说明样品溶液在10h内基本稳定。见表2。

表2 稳定性试验

2.2.9 重复性试验 精密称取同一批何首乌复方口服液,按供试品溶液制备法平行制备6份供试品溶液,按色谱条件进样20μL,测定峰面积。RSD=0.49%<2%,二苯乙烯苷平均含量为55.46μg/m L,说明该方法重复性好。见表3。

表3 重复性试验

2.2.10 加样回收率试验 精密移取已知含量的样品6份,分别精密加入二苯乙烯苷对照品适量,按照供试品溶液制备方法制成供试品溶液,按色谱条件进样20μL,测定峰面积,计算加样回收率。结果见表4。

表4 加样回收率试验

2.2.11 样品含量测定 精密移取5批何首乌复方口服液,分别按供试品溶液制备方法制成供试品溶液,分别进样20μL,测定峰面积,计算样品含量。测得二苯乙烯苷平均含量为110.28μg/mL。见表5。

表5 样品含量测定

3 讨论

二苯乙烯苷类化合物是何首乌主要成分,对神经系统、心血管系统、消化系统、内分泌系统、泌尿系统、呼吸系统及免疫系统均有一定的药理作用。在作用于神经系统方面,二苯乙烯苷可以增强神经细胞活力,对神经细胞有保护作用,对于神经系统疾病有一定疗效,而二苯乙烯苷还可以通过调整血脂中TC、TG、HDL-C和LDL-C的含量达到抑制血管粥样硬化进展的目的;对于肝脏,二苯乙烯苷可减少酒精对于肝脏的氧化损害,同时二苯乙烯苷对于糖尿病及肿瘤均有辅助治疗作用[1],由此可见,二苯乙烯苷对于何首乌既是主要成分,又是重要的药效成分,具有举足轻重的药理学意义。

何首乌复方口服液因其成分由多种中药组成,成分复杂,易产生干扰,经多方考量,将何首乌的二苯乙烯苷作为其质量标准的考察对象[13-14]。采用薄层色谱法对复方口服液中的何首乌有效成分进行定性鉴别,色谱中供试品与二苯乙烯苷对照品在相应色谱位置上出现相同颜色的斑点,分离良好,阴性对照液无干扰[15]。

由于试验中药物制剂为复方制剂,所以制剂中的其他药物成分可能会对高效液相的结果产生影响,所以试验对高效液相对柱温、色谱柱、流动相配比及流速进行了考察,得到最佳色谱条件为:色谱柱:Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(25∶75);流速:1 m L/min;柱温:35℃;检测波长:320 nm;进样量:20μL。

采用高效液相色谱法定量检测复方口服液中二苯乙烯苷的含量,结果显示该方法稳定性好(RSD=1.62%)、重现性好(RSD=0.49%)、精密度高(RSD=1.82%),能准确进行定量、定性检测,可作为何首乌复方口服液的质量控制方法[16]。