血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达与原发性痛风性关节炎相关指标的关系及发病危险因素分析

牛 敏，杨西超，闫美茜，李 英

痛风性关节炎(GA)是临床常见的急性炎症性关节病变，是尿酸盐晶体沉积在关节及关节的周围软组织所致[1]。有资料显示，我国GA患病率为1%～3%，高发年龄段在50岁左右，且逐渐年轻化[2]。该病发病机制复杂，与饮酒、富含嘌呤饮食、环境温度等多种因素密切相关。瘦素(LEP)是炎症相关指标，能参与骨代谢，可作用于成骨细胞抑制骨形成，其与细胞外基质合成、降解失衡相关[3]。缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是细胞在低氧条件下产生的一种核转录因子，可形成二聚体，引起细胞对缺氧反应的应答[4]。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)为脂联素信号传导的重要信号分子，参与机体内外抗炎反应[5-6]。本研究通过检测原发性GA患者血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达，分析三者与原发性GA的关系及影响发病的危险因素。

1 资料与方法

1.1一般资料 整理2018年2月—2020年10月西安交通大学附属西安市红会医院收治的原发性GA患者的临床资料。①纳入标准：均符合2015年美国风湿病学会GA的诊断标准[7]；患者和(或)家属签署知情同意书；纳入研究前1个月内未服用影响激素水平的药物，且未进行相关治疗者。②排除标准：肾脏疾病、心血管疾病引起的继发性痛风者；合并感染或自身免疫性疾病者；临床资料或影像学资料缺失者。本研究最终纳入164例原发性GA作为研究对象，其中原发急性痛风性关节炎(AGA)80例为AGA组，原发非急性痛风性关节炎(NAGA)84例为NAGA组。选取同期进行体检健康者85例作为对照组。AGA组男44例，女36例；年龄47～79(52.14±3.56)岁；病程3.3～14.1(6.25±1.63)年；有长期富含嘌呤饮食史48例。NAGA组男45例，女39例；年龄45～77(52.55±3.69)岁；病程3.9～14.7(6.74±1.77)年；有长期富含嘌呤饮食史52例。对照组男48例，女37例；年龄50～78(52.84±3.78)岁。3组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准执行。

1.2方法

1.2.1LEP、HIF-1α检测：AGA组及NAGA组于入院48 h内，对照组于体检当日采集肘静脉血5 ml，以3000 r/min离心15 min，提取上层血清于-80 ℃冰箱冻存待测。应用酶联免疫吸附试验对LEP、HIF-1α进行检测。试剂盒购自贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司，具体操作步骤参见试剂盒说明书。LEP正常范围：84～110 pg/ml，≥110 pg/ml视为异常升高[8]。HIF-1α正常范围：17～32 ng/L，≥32 ng/L视为异常升高[9]。

1.2.2PPARγ mRNA表达检测：采用实时荧光定量PCR检测3组血清PPARγ mRNA表达水平。依据GeneBank中人PPARγ、18s-rRNA基因序列设计引物，引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，PPARγ上游引物：5'-TGAGGAGAAGTCACACTCTG-3'，下游引物：5'-TGGGTCACCTCTTGTGAATG-3'。18s-rRNA上游引物：5'-CAGCATCAGGTGCAACGTGT-3'，下游引物：5'-GGACCTGCCTGTATTTTCCA-3'。PCR反应条件：94 ℃ 2 min；92 ℃ 60 s，56 ℃ 30 s，74 ℃ 30 s，连续进行38个循环。采用相对定量法计算目的基因mRNA表达水平。PPARγ mRNA正常范围：<0.41，≥0.41视为异常升高[10]。

1.2.3临床指标检测：3组肌酐、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)采用美国贝克曼库尔特公司生产的LH750全自动血液分析仪检测。测量3组的身高和体质量，并计算体质量指数(BMI)。

1.3观察指标 比较3组血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达量，分析三者与原发性GA患者临床指标的相关性，以及影响GA发病的危险因素。

2 结果

2.1血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达量比较 AGA组和NAGA组血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达量均高于对照组，且AGA组高于NAGA组(P<0.05)。见表1。

表1 急性、非急性痛风性关节炎和体检健康者3组血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达量比较

2.2临床指标比较 AGA组和NAGA组BMI、肌酐、LDL-C水平均高于对照组，且AGA组高于NAGA组(P<0.05)。AGA组和NAGA组HDL-C水平低于对照组，且AGA组低于NAGA组(P<0.05)。见表2。

表2 急性、非急性痛风性关节炎和体检健康者3组临床指标比较

2.3相关性分析 Pearson相关性分析显示，血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达量与原发性GA患者BMI、肌酐、LDL-C均呈正相关，与HDL-C呈负相关(P<0.05，P<0.01)。见表3。

表3 血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达量与原发性GA患者临床指标相关性

2.4影响GA发病的危险因素分析 年龄≥65岁、高血压病史、糖尿病史、长期富含嘌呤饮食史、吸烟史、饮酒史、LEP异常升高、HIF-1α异常升高、PPARγ mRNA异常升高、肌酐>110 μmol/L、LDL-C>3.37 mmol/L、HDL-C<1.16 mmol/L为影响GA发病的独立危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 影响GA发病的多因素Logistic回归分析

3 讨论

GA是由机体过量嘌呤降解导致血液循环中尿酸增多，晶体化尿酸盐沉积过多导致的。GA发病与调节嘌呤代谢的遗传因素密切相关，如嘌呤代谢催化酶缺陷使尿酸生成过多等。相关流行病学资料显示，在遗传及环境因素的作用下，长期饮酒及摄入过多红肉、海鲜等富含嘌呤的食物均是导致GA发病的关键因素[11]。该病急性发作时，肢体活动功能严重受限，尿酸盐晶体沉积在踝关节等部位，引起关节肿胀及剧烈疼痛。尽早诊断GA，并判断病情严重程度，有助于实施针对性治疗，改善患者预后。

研究发现，LEP是一种肽类激素，具有调节内分泌功能的作用[12]。LEP能抑制骨形成，主要原因为其能与成骨细胞特异性结合，致成骨细胞丧失活性。近年研究发现，LEP可与多种免疫细胞表面的受体结合引起免疫应答，在炎症及免疫调节中发挥重要作用，与免疫性疾病的发生发展相关[13]。HIF-1α是缺氧状态下细胞产生的转录活性核蛋白，参与机体缺氧代偿反应的全过程，并调控炎症微环境代谢[14]。PPARγ属核受体超家族成员，在多种免疫活性细胞中高表达，参与调控糖脂代谢、脂肪细胞分化及炎症反应[15-17]。

本研究结果显示，AGA组和NAGA组血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达量均高于对照组，且AGA组高于NAGA组，与既往文献报道结果相符[18]。可见三者在GA患者血清中表达水平较高，可能与病情进展相关。本研究结果显示，AGA组和NAGA组BMI、肌酐、LDL-C水平均高于对照组，且AGA组高于NAGA组。AGA组和NAGA组HDL-C水平低于对照组，且AGA组低于NAGA组。可见AGA及NAGA患者BMI、肌酐、LDL-C、HDL-C水平均呈异常状态。本研究中，血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达量与BMI、肌酐、LDL-C呈正相关，与HDL-C呈负相关，因此可以推测LEP、HIF-1α、PPARγ可能为诱发GA的基础，参与脂代谢，引起急性炎症反应，且可产生协调作用。既往研究报道，BMI、肌酐、LDL-C、HDL-C均为发生GA的独立危险因素[19-21]。本研究通过多因素Logistic回归分析发现，年龄≥65岁、高血压病史、糖尿病史、长期富含嘌呤饮食史、吸烟史、饮酒史、LEP异常升高、HIF-1α异常升高、PPARγ mRNA异常升高、肌酐>110 μmol/L、LDL-C>3.37 mmol/L、HDL-C<1.16 mmol/L均为影响GA发病的独立危险因素，进一步证实上述观点。提示临床可通过调控上述危险因素对GA患者进行干预，以控制病情进展。

综上所述，原发性GA患者血清LEP、HIF-1α水平及PPARγ mRNA表达量均升高，三者异常升高是GA发病的危险因素。临床可通过三者判断GA病情，为合理制定治疗方案提供参考。