基于HPLC法的生姜酚类成分分析及含量检测

2021-12-22万长江魏光强万长春

中国调味品 2021年12期

万长江，魏光强，万长春

(1.大理农林职业技术学院，云南大理 671003；2.云南农业大学，昆明 650201；3.大理技师学院，云南大理 671003)

生姜是一种多年生宿根草本植物，具有较高的食用和药用价值，同时也是传统香料的原材料[1-2]。生姜味辛、微热，当作为药用材料食用时，具有驱寒止血的功效，常用于治疗中气虚寒、腹痛，同时具有化痰止咳、助消化、利分泌、解毒的功效[3]。生姜中含有丰富的功能性物质，主要包含6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚等酚类物质[4-6]。酚类物质成分种类及含量是生姜品质的关键衡量指标。

本文采用高效液相色谱法(HPLC)对不同种类的生姜中酚类物质成分和含量进行检测分析，为生姜品质的鉴别提供了理论基础。

1 试验条件及样品制备

试验过程所用仪器主要包含电子分析天平、高效液相色谱仪以及其他辅助仪器，其中电子分析天平的精度要求达到十万分之一[7]。

所用对照品试剂为批号为23513-146的6-姜酚，批号为23513-088的8-姜酚，批号为23513-157的10-姜酚以及批号为12121803的6-姜烯酚，要求选用含量均大于98%的对照品试剂[8]。分别取1 mL的6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚对照品试剂放置于10 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，摇匀后分别取2 mL的4种对照品溶液放置于同一个20 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，制备成6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的混合对照品试剂溶液[9]。

生姜选取市场所售来自不同产地的多个品种，经筛选后确定14种测定样品。将待测定样品切成2 mm小块，分别精准称取1 g样品，放置于容量为100 mL的烧瓶中，加入甲醇50 mL后称取重量，加热30 min放冷后再次称取重量，利用甲醇将加热后的溶液重量补充至加热前重量，摇匀后进行过滤，滤液即为待测定样品溶液[10]。

测定过程中选定HPLC色谱柱为250 mm×4.6 mm×5 μm，梯度洗脱过程中流速为1 mL/min，柱温保持在35 ℃，样品流入速度为1 mL/min，检测波长为282 nm。在0 min时，保持55%的流动相A，45%的流动相B；在10 min时，与0 min保持相同的洗脱参数；在15 min时，保持52%的流动相A，48%的流动相B；在17 min时，保持40%的流动相A，60%的流动相B；在38 min时，保持40%的流动相A，60%的流动相B。

2 试验分析方法

量取5 mL待测定样品溶液，放置于10 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，作为1号线性溶液；量取5 mL待测定样品溶液，放置于20 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，作为2号线性溶液；量取1 mL待测定样品溶液，放置于10 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，作为3号线性溶液；量取1 mL待测定样品溶液，放置于100 mL量瓶中，利用甲醇溶解定容至量瓶刻度，作为4号线性溶液；将待测定样品溶液作为5号线性溶液[11-12]。量取1号线性溶液5 mL、2号线性溶液1 mL、3号线性溶液2 mL、4号线性溶液4 mL、5号线性溶液6 mL，按照色谱条件进行测定。测定结果表明，生姜中6-姜酚含量为1.005～100.5 mg/mL，8-姜酚含量为1.001～100.1 mg/mL，10-姜酚含量为0.996～99.6 mg/mL，6-姜烯酚含量为1.28～128 mg/mL。设定色谱峰面积值为Y，溶液浓度为X，建立浓度与色谱峰面积之间的线性回归方程：

量取4号线性溶液5 mL，按照色谱条件进行测定，连续测定6次，记录6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色谱峰面积RSD，色谱峰面积RSD测定数据见表1。

表1 精密度试验检测数据(色谱峰面积RSD)Table 1 The detection data of precision test (chromatographic peak area RSD) %

由表1可知，6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色谱峰面积RSD均值分别为0.26%、0.14%、0.45%、0.41%，表明选用的高效液相色谱仪具有良好的精密度，测定方法满足相关检测需求。

取同一品种的待测定样品6份，分别切成2 mm小块，每一份精准称取1 g样品，分别放置于容量为100 mL的烧瓶中，加入甲醇50 mL后称取重量，加热30 min放冷后再次称取重量，利用甲醇将加热后的溶液重量补充至加热前重量，摇匀后进行过滤，分别量取滤液5 mL，按照色谱条件进行测定，记录6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色谱峰面积RSD，并计算色谱峰面积RSD方差值与均方差值[13]。色谱峰面积RSD测定数据见表2。

表2 重复性试验检测数据(色谱峰面积RSD)Table 2 The detection data of repeatability test (chromatographic peak area RSD) %

由表2可知，同一种类的生姜6种测试样品中6-姜酚的色谱峰面积RSD方差趋于0，均方差趋于0；8-姜酚的色谱峰面积RSD方差趋于0，均方差趋于0；10-姜酚的色谱峰面积RSD方差趋于0，均方差为0.0121%，同样趋于0；6-姜烯酚的色谱峰面积RSD方差趋于0，均方差为0.0138%，同样趋于0。表明本文选用的高效液相色谱仪在进行测定过程中具有较好的数据重复性。

随机取6份生姜待测定样品，分别切成2 mm的小块，每一份精准称取0.5 g样品，分别放置于容量为100 mL的烧瓶中，分别加入0.5 g的6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚对照品试剂，加入甲醇50 mL后称取重量，加热30 min放冷后再次称取重量，利用甲醇将加热后的溶液重量补充至加热前重量，摇匀后进行过滤，分别量取滤液5 mL，按照色谱条件进行测定，记录6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的色谱峰面积RSD，并分别计算6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的平均回收率[14-15]。6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚以及6-姜烯酚的回收率测定数据见表3～表6。

表3 6-姜酚加样回收率试验检测数据(色谱峰面积RSD)Table 3 The detection data of 6-gingerol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

表4 8-姜酚加样回收率试验检测数据(色谱峰面积RSD)Table 4 The detection data of 8-gingerol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

表5 10-姜酚加样回收率试验检测数据(色谱峰面积RSD)Table 5 The detection data of 10-gingerol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

表6 6-姜烯酚加样回收率试验检测数据(色谱峰面积RSD)Table 6 The detection data of 6-shogaol sampling recovery rate test (chromatographic peak area RSD)

由表3～表6可知，6-姜酚的平均回收率为99.85%，8-姜酚的平均回收率为98.40%，10-姜酚的平均回收率为99.219%，6-姜烯酚的平均回收率为98.22%，因此本文选择的测定试验方法满足加样回收测定需求。

量取5 mL待测定样品溶液，置于容量为100 mL的烧瓶中，加入甲醇50 mL后称取重量，加热30 min放冷后再次称取重量，利用甲醇将加热后的溶液重量补充至加热前重量，摇匀后进行过滤，量取5 mL 滤液7份，分别在0，1，2，4，8，12，24 h按照色谱条件进行测定，并计算色谱峰面积RSD方差值与均方差值[16-17]。色谱峰面积RSD测定数据见表7。

表7 稳定性试验检测数据(色谱峰面积RSD)Table 7 The detection data of stability test (chromatographic peak area RSD) %

由表7可知，测试样品中6-姜酚在24 h内的色谱峰面积RSD方差趋于0，均方差为0.01%，趋于0；8-姜酚在24 h内的色谱峰面积RSD方差趋于0，均方差为0.018%，趋于0；10-姜酚在24 h内的色谱峰面积RSD方差趋于0，均方差为0.017%，趋于0；6-姜烯酚在24 h内的色谱峰面积RSD方差趋于0，均方差为0.024%，趋于0。数据表明，待测定样品溶液放置24 h时仍具有良好的稳定性。