气相色谱-三重四极杆质谱法测定生湿面制品中单辛酸甘油酯的研究

陈 彬，季葛振，杨 俊,*，朱 云

1南通市食品药品监督检验中心 (南通 226006)2南通市经济技术开发区市场监督管理局 (南通 226009)

生湿面制品是指经过压延成型并未经干燥处理的面制品，由于含水量高，若不进行保鲜处理则极易生长微生物，并腐败变质[1]，引起腐败的主要微生物是细菌和霉菌[2-4]。单辛酸甘油酯作为一种新型无毒高效广谱防腐剂，对细菌和霉菌均有抑制效果[5]。它在人体内和脂肪一样，能分解代谢，无任何积蓄和不良反应。中国与世界各国和组织对于单甘油酯类的使用都有相关的规定，GB 2760—2011规定：“单辛酸甘油酯常用作面制品防腐剂用于湿切面，其最大使用量为1.0 g/kg”。

目前，单辛酸甘油酯的检验方法主要有气相色谱法[6]和单四级杆气质联用法[7]，而三重四级杆气质联用法检测单辛酸甘油酯的方法未见报道。本文建立了气相色谱-三重四极杆质谱测定食品中单辛酸甘油酯的方法，处理方法简单高效，适用于生湿面制品中单辛酸甘油酯的测定。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

7890B型气相色谱仪，7000D型三重四极杆质谱仪，美国Agilent公司；乙腈，色谱纯，德国Merk公司；氯化钠，分析纯，国药集团；无水硫酸钠(使用前在650 ℃灼烧 4 h ，贮于干燥器中，冷却后备用)，分析纯，国药集团；单辛酸甘油酯标准品，99.0%，美国NU-CHEK-PREP公司；Milli-Q高纯水，由Millipore纯水仪制备。

单辛酸甘油酯标准储备液：称取单辛酸甘油酯标准品1 mg，用丙酮溶解并定容至10 mL，配制成100 μg/mL的标准储备液。

单辛酸甘油酯标准工作液：分别吸取单辛酸甘油酯标准储备液0.01 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL于10 mL容量瓶中，用空白基质溶液定容至刻度，此工作液浓度为分别为0.1 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL。

1.2 仪器条件

1.2.1气相色谱条件

色谱柱1为HP-5石英毛细管柱(15 m×0.25 mm，0.25 μm)，色谱柱2为HP-5石英毛细管柱(15 m×0.25 mm，0.25 μm)，色谱柱1和色谱柱2串接，两柱间连接反吹气路；进样口温度300 ℃；脉冲分流进样，脉冲压力50 psi，脉冲时间为0.2 min，分流比为(5∶1)，进样量1 μL；载气、反吹气为高纯氦气；色谱柱1流量1.0 mL/min，色谱柱2流量1.2 mL/min；升温程序为初始温度150 ℃保持10 min，以20 ℃/min升至280 ℃，保持5 min。

1.2.2质谱条件

离子源：电子轰击源，70 eV；离子源温度280 ℃，接口温度280 ℃；淬灭气(高纯氦气)流量为2.25 mL/min，碰撞气(高纯氮气)流量为1.5 mL/min。扫描方式为MRM多反应监测，单辛酸甘油酯离子对及碰撞能量见表1。

表1 单辛酸甘油酯离子对和碰撞能量

1.3 样品前处理

称取2 g样品，加入10 mL乙腈+水(1+1，v/v)溶液10 mL，10 000 r/min匀浆1 min，加入2 g氯化钠，涡旋混合，6 000 r/min离心5 min，取上层清液，加入1 g无水硫酸钠，涡旋1 min，经0.22 μm有机滤膜过滤，按仪器工作条件进行测定。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

根据文献资料，单辛酸甘油酯沸点较高，活性较大，在衬管中容易产生吸附。试验选择UI超高惰性衬管，并设置进样口温度为300 ℃，色谱柱起始温度为150 ℃，降低单辛酸甘油酯在进样环节产生的吸附。

试验考察了脉冲分流(5∶1)和脉冲不分流两种进样方式对单辛酸甘油酯峰形的影响，结果表明：脉冲不分流进样方式，响应值高，但峰形较差，容易产生拖尾。脉冲分流(5∶1)进样加快单辛酸甘油酯进入色谱柱的速度，同时减少该物质进入色谱柱的量，所得峰形对称，响应值适中，见图1。试验选择脉冲分流(5:1)进样，脉冲压力50 psi，脉冲时间0.2 min。

图1 单辛酸甘油酯总离子流图

2.2 质谱条件的优化

采用全扫描采集方式扫描50～300 amu范围内单辛酸甘油酯质谱图，见图2。根据质谱图中离子的丰度和质量数，为提高方法的灵敏度和选择性，确定特征离子m/z 127.2、m/z 145.2作为前级离子。

图2 单辛酸甘油酯全扫描质谱图

选择高纯氮气作为碰撞气、高纯氦气作为淬灭气，并分别设置气流量为1.5 mL/min和2.25 mL/min，采用产物离子扫描方式，选择并丰度较大的离子对m/z 127.2～57.2作为定量离子，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1作为定性离子，见图3、图4。按照欧盟的法规，试验选择了两个母离子和三个子离子，满足4点鉴定法要求。

图3 前级离子m/z 127.2二级全扫描质谱图

图4 前级离子m/z 145.2二级全扫描质谱图

根据选择的离子对，试验考察了碰撞能量为5、10、15、20 eV下，m/z 127.2～57.2、m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1三组离子对的响应值。结果表明：m/z 127.2～57.2在10 eV下有较好的响应，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1在5 eV下有较好的响应。因此，在上述碰撞能量下，以m/z 127.2～57.2作为基峰，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1相对于基峰的比率分别为13.2%和4.2%，辅助定性，见图5。

图5 单辛酸甘油酯定量和定性离子对

2.3 样品前处理条件的优化

单辛酸甘油酯极性较强[6]，根据相似相溶原理，选择强极性溶剂乙腈、水作为提取溶剂。试验比较了乙腈、乙腈+水((1+1，v/v)的提取效果，结果表明：乙腈+水(1+1，v/v)渗透性能好，能进入生湿面制品内部，有利于充分提取样品中的单辛酸甘油酯。

2.4 线性范围和检出限

试验考察了样品的基质效应，结果表明：生湿面制品有较强的基质增强效应，且能较好地改善峰形，提高灵敏度。使用空白基质溶液配制标准曲线：0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μg/mL。以m/z 127.2～57.2离子对峰面积为纵坐标，基质标准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，得出线性方程和相关系数，单辛酸甘油酯在该浓度范围内有良好的线性关系，其相关系数不小于0.998。在空白生湿面制品中加入将一定质量浓度的标准品，使样品中的加标量为25 μg/kg。经过前处理，经仪器分析后，单辛酸甘油酯m/z 127.2～57.2定量离子信噪比大于3，因此，本试验检出限为25 μg/kg。

2.5 回收率和精密度

选择饺子皮空白样品，以10、25、50 mg/kg 3个水平进行添加回收试验。每个水平做6次平行试验，计算方法的回收率和精密度。平均回收率分别为108.2%、92.1%、80.5%，相对标准偏差(RSD)分别为5.2%、3.3%、7.8%。结果表明：该方法回收率稳定，数据精密度高，能满足日常检验中单辛酸甘油酯准确定量的要求。

3 结论

本文建立了生湿面制品中单辛酸甘油酯的检测方法，选用乙腈+水(1+1，v/v)混合溶剂高速匀浆提取样品中单辛酸甘油酯，优化了气相色谱、三重四级杆质谱仪的各项参数，采用脉冲分流(5:1)进样方式，选择m/z 127.2～57.2作为定量离子，m/z 145.2～89.1和m/z 145.2～103.1作为定性离子，两对定性离子对相对于m/z 127.2～57.2的比率分别为13.2%和4.2%。本方法处理方法简单高效，定性定量准确，灵敏度高，回收率高，重现性好，适用于生湿面制品中单辛酸甘油酯的测定。