荧光定量PCR法在孕晚期B族链球菌感染患者中的诊断分析

刘磊

（辽宁省阜新市第二人民医院（阜新市妇产医院）检验科，辽宁 阜新 123000）

B族链球菌位于人体下消化道或者阴道，其成年人携带率较高，尤其是孕妇。B族链球菌可影响孕妇免疫功能与婴儿生长发育，造成早产、流产，甚至导致脑膜炎、败血症等，不利于新生儿与孕妇健康[1]。因此，产前对B族链球菌感染进行筛查尤为重要。基因测序是诊断孕晚期B族链球菌感染的金标准，但其对检测技术与设备要求较高，目前尚无普及。细菌培养检测是B族链球菌的传统检测方式，但其检测耗时较长，且灵敏度较低，其应用受到一定限制[2]。荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）法准确率较高，且简便易行[3]。荧光定量PCR法打破了细菌培养检测的局限，其无需进行培养，具有简便、快捷的优势，尤其适用于临床大量样本的筛查，可利用试剂盒对标本直接进行处理，受到广大医护人员的青睐。目前，临床关于荧光定量PCR法与细菌培养检测在孕晚期B族链球菌感染诊断中的应用价值比较研究较少。基于此，本研究分析荧光定量PCR法在孕晚期B族链球菌感染诊断中的应用，以期为临床诊治提供参考经验，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年1月至2019年1月于本院检查的80例疑似B族链球菌感染孕晚期孕妇，年龄23～46岁，平均（35.24±2.21）岁；体重指数19.2～24.6 kg/m2，平均（22.31±0.63）kg/m2；孕周32～37周，平均（34.53±1.21）周；孕次1～3次，平均（1.02±0.25）次。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：B族链球菌感染患者经基因测序确诊；无妊娠期合并甲状腺疾病或糖尿病；采集标本前2周内未应用抗生素类药物；临床资料完整。排除标准：阴道分泌物有衣原体感染、滴虫性阴道炎、外阴道假丝酵母菌等其他菌群感染；存在染色不良、涂片过厚等涂片不符合要求者；取样前24 h内接受过洗液或栓剂。

1.3 方法 ①标本采集方式：应用无菌拭子对孕妇阴道分泌物进行采集，先将孕妇外阴过多分泌物擦去，使用无菌窥器使阴道暴露，在插入孕妇阴道后将无菌拭子旋转1周，对阴道内1/3处的分泌物进行采集。②荧光PCR检测：在标本中加入1 mL缓冲液并进行震荡，离心，将下层沉淀取出，加入缓冲液，离心，下层沉淀重悬，加入核酸提取剂，破碎细胞后100℃离心10 min，取上清液，进行PCR扩增反应，应用荧光PCR检测试剂盒（北京博尔诚有限公司，ABI7500）进行检测。CT指标＜36、荧光信号曲线呈S形时判为阳性。细菌培养检测：在培养基上将标本涂匀接种，进行培养，培养条件为5%CO2，培养温度为37℃，培养时间为24 h，根据培养后菌落的染色、形态等进行鉴别。

1.4 统计学方法 采用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析，计数资料用百分比（%）表示，采用χ2检验，绘制ROC曲线得到AUC，检验荧光定量PCR法与细菌培养诊断孕晚期B族链球菌感染诊断价值：AUC＜0.5无价值，0.5～0.7诊断价值较低，0.7～0.9诊断价值中等，＞0.9诊断价值高，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 诊断结果 基因测序结果显示，80例孕妇中，阳性52例，阴性28例；荧光定量PCR法检出真阳性52例，假阴性0例，假阳性1例，真阴性27例；细菌培养检测检出真阳性44例，假阴性8例，假阳性8例，真阴性20例，见表1。

表1 两种检测方式诊断结果Table 1 Diagnostic results of two detection methods

2.2 诊断效能 以基因测序作为金标准，荧光定量PCR法对B族链球菌感染的诊断灵敏度、准确性、特异度、阴性预测值、阳性预测值均高于细菌培养检测，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两种检测方式诊断效能Table 2 Diagnostic efficacy of two detection methods

2.3 荧光定量PCR法与细菌培养诊断价值 将2.2中两种诊断方式作为检验变量，将阴阳性作为状态变量，绘制ROC曲线得到荧光定量PCR法与细菌培养诊断孕晚期B族链球菌感染的AUC分别为0.982、0.780，均＞0.75，有一定预测价值，且以荧光定量PCR法效能更高，见表3。ROC曲线图见图1。

图1 荧光定量PCR法与细菌培养诊断孕晚期B族链球菌感染的ROC曲线图Figure 1 The ROC curve of fluorescence quantitative PCR and bacterial culture for diagnosis of group B streptococcus infection in the third trimester of pregnancy

表3 荧光定量PCR法与细菌培养检测诊断价值Table 3 Diagnostic value of fluorescence quantitative PCR and bacterial culture detection

3 讨论

女性阴道中存在多种微生物菌落，其间相互协调与制约，从而平衡阴道微生态系统，当菌群失调时可引起阴道感染。其中，B族链球菌感染较为常见，可能对孕妇妊娠进展、胚胎发育等造成较大影响，诱发产褥感染、新生儿脑膜炎等，严重威胁新生儿与孕妇生命健康[4]。因此，在产前开展筛查具有重要意义，临床应积极探索结果直观、耗时短、操作简单的检测方式，及时检出B族链球菌感染，从而指导临床治疗，有效保证产妇及新生儿安全[5]。

B族链球菌感染的传统检测方式为细菌培养法，但具有重复性低、干扰多、操作繁琐、耗时长等缺点。由于细菌培养法需依赖肉眼对菌落状态进行观察，且其菌落污染率较高，部分B族链球菌感染无法有效检出，降低阳性率，对诊断结果造成影响，不利于临床后续治疗。加之细菌培养法中培养过程比较繁琐，耗时较长，容易延误病情[6]。荧光定量PCR法是一种新型检测方式，打破了传统细菌培养法的局限性，无需进行培养，在试剂盒辅助下直接处理标本，具有简便易行的优势，逐渐受到广泛应用[7]。同时，荧光定量PCR法可将荧光标记和扩增应用于B族链球菌特异性核酸序列，在对B族链球菌感染进行诊断时，使微量病原菌被检出，提升诊断的准确性。相比较于细菌培养法，荧光定量PCR法无需进行接种、培养、鉴别等操作，流程简化，操作较为简便，耗时较短，缩短孕妇等待时间，且其检验的重复性与工作效率更高[8]。另外，标本的保存环境基本不影响荧光定量PCR法检测结果，死亡的B族链球菌亦可在该方式下被检出，以提升检测准确率，有利于促进孕妇早期用药干预进程与效果，从而保障孕妇与胎儿的安全与健康。另外，荧光定量PCR法在早产、胎膜早破等紧急情况下可对其进行快速检测，有利于减少新生儿的发病与死亡。本研究结果发现，以基因测序作为金标准，荧光定量PCR法对B族链球菌感染的诊断灵敏度、准确性、特异度、阴性预测值、阳性预测值均高于细菌培养检测；绘制ROC曲线得到荧光定量PCR法与细菌培养诊断孕晚期B族链球菌感染的AUC分别为0.982、0.780，均＞0.75，有一定预测价值，且以荧光定量PCR法效能更高。结果提示，荧光定量PCR法在孕晚期B族链球菌感染诊断中诊断效能较高，可有效应用于早期预防治疗。陈明发等[9]研究表明，荧光定量PCR法可有效将B族链球菌感染病例检出，与本研究结果相符。向燕群等[10]研究中，试验组应用荧光PCR检测B族链球菌感染，对照组应用细菌培养法，其结果发现试验组诊断准确率为准确率为97.4%，高于对照组的76.9%，说明荧光PCR技术阳性检出率较高，与本研究结果一致。且其结果中表明实验组妊娠结局优于对照组，说明荧光定量PCR法对预防产妇发生不良妊娠结局有积极作用。

综上所述，荧光定量PCR法在孕晚期B族链球菌感染诊断中诊断效能较高，可有效应用于临床早期诊断与预防治疗孕晚期B族链球菌感染，保证孕妇与胎儿的安全与健康。