成纤维生长因子19及其受体4在不同分子分型乳腺癌中的表达及临床意义

周毅，蔡仕彬，虞凯杰，周佳慧，刘鹏鹏，陈述政

得益于不同分子分型为基础的乳腺癌（Luminal A型、Luminal B型、Her-2过表达型及三阴性）个体化治疗，近年来乳腺癌的预后取得了长足的进步，但其发生发展、浸润及转移的生物学特性及分子机制仍未完全明确，导致乳腺癌的总生存率仍不容乐观[1]。成纤维生长因子19（FGF19）及其受体4（FGFR4）结合的信号通路失调可抑制肿瘤细胞凋亡并刺激增殖，研究表明其在乳腺癌的发生、发展过程中发挥着作用[2]，但其在不同分子分型乳腺癌间的表达是否有差异目前鲜有报道。本研究采用免疫组织化学技术法检测不同分型乳腺癌间的FGF19、FGFR4的表达差异，旨在为以分子分型为基础的个体化精准治疗提供新的思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集浙江省丽水市中心医院乳腺外科2016年1月至2019年1月经手术治疗的乳腺癌患者石蜡标本，随机抽取不同分子分型乳腺癌标本各40例，共160例。患者均为女性，年龄30～61岁，中位年龄42岁。肿瘤直径1.2～5.5 cm，中位直径3.1 cm。术前均未行放、化疗，病理诊断均为浸润性癌，分子分型根据指南分为：Luminal A型（ER/PR阳性且PR高表达，Her-2阴性，Ki-67＜20%）、Luminal B型（ER/PR阳性且Ki-67≥20%或PR低表达，Her-2阳性或阴性）、Her-2过表达型（ER、PR阴性，Her-2阳性）及三阴性（ER、PR、Her-2均阴性）。TNM分期I期43例，II期86例，III期31例。

1.2 方法 所用试剂一抗为兔抗人FGF19、FGFR4多克隆抗体（购自北京博奥森生物技术有限公司），二步法免疫组化检测试剂盒及DAB显色试剂盒（购自北京中杉金桥生物技术有限公司）。取石蜡标本连续切取组织片，切片厚度为4 m，置于60℃电热恒温箱中烘烤过夜；脱蜡、水化切片，3%双氧水孵育15 min后蒸馏水浸泡3 min，再以0.01%PBS浸泡清洗2 min，3次后行抗原修复；再滴加兔抗人一抗，放于保湿盒中置于37℃烤箱之中孵育过夜，然后PBS缓冲液清洗5 min共3次；在一抗基础上滴加二抗并置于烤箱孵育25 min，再以PBS缓冲液清洗5 min共3次；滴加DAB显色剂染色，镜下观察显色反应并适时用自来水中止反应，以苏木素复染并封片。PBS缓冲液代替一抗体作为阴性对照，已知阳性切片作为阳性对照。

1.3 结果判读 由两2名高年资病理科医师采用双盲法判读，按染色强度及阳性细胞数计算评分。染色强度：不着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色分别为0分、1分、2分、3分。阳性细胞数：0%、1%～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100%阳性细胞数记分别记0分、1分、2分、3分、4分。两者相加分值积分：0分为（－），1～3分为（+），4～5分为（2+），6～7分（3+），积分＞3分为阳性，≤3分为阴性，随机取5个不同高倍镜视野求平均积分。

1.4 统计方法 采用SPSS 21.0软件进行统计学分析，计数资料采用2检验，＜0.05为差异有统计学意义；组间两两比较采用bonferroni校正的检验水准’=/6=0.008＜0.008为差异有统计学意义。

2 结果

不同分子分型乳腺癌患者年龄、肿瘤直径、肿瘤组织学分级、淋巴结转及TNM分期差异均无统计学意义（均＞0.05），见表1。FGF19在Luminal A、Luminal B、Her-2过表达型及三阴性乳腺癌的阳性表达率分别为52.5%（21/40）、50.0%（20/40）、82.5%（33/40）及80%（34/40），FGFR4阳性表达率分别为45.0%（18/40）、42.5%（17/40）、75.0%（30/40）及 80.0%（32/40）。FGF19、FGFR4在Luminal A型、Luminal B型间的表达差异均无统计学意义（均＞0.05），在Her-2过表达型、三阴性乳腺癌间的表达差异均无统计学意义（均＞0.05），在Her-2过表达型、三阴性乳腺癌间的表达高于Luminal A型、Luminal B型（均＜0.008），见表2。

表1 不同分子分型乳腺癌临床病理特征 例（%）

表2 不同分子分型乳腺癌组织中FGF19、FGFR4表达 例（%）

3 讨论

目前，以ER、PR、Her-2及Ki-67为基础的乳腺癌分子分型得到了大多数专家的共识[3]，同时对各型乳腺癌的具体治疗亦给出了详细的个体化指导。自此之后以分子分型为基础的个体化治疗使得乳腺癌的预后得到了极大的改善。然而在患者预后得到改善的同时，临床实践中发现部分相同分子分型的乳腺癌即使经历相同的治疗方案，预后也截然不同，由于乳腺癌为异质性较高的疾病，临床实践仅以ER、PR、Her-2及Ki-67作为分型的方法仍不够完善。而目前乳腺癌的治疗正从个体化医疗向精准医疗转变，有些分子类型需更多的基因、蛋白表达谱来确认新的治疗靶点从而实现精准医疗。

FGF19是一种代谢性调节基因，FGFR4是一类分布在多种细胞上穿膜的酪氨酸激酶受体，在胚胎和组织修复时严格表达，出生后表达量下降，且主要分布于肾上腺和肺组织[4-5]。生理状态下，FGF19与其特异性受体FGFR4结合活化及加强细胞内的信号通路，发挥其调节细胞增殖、分化和转移的功能[6]。而FGF19、FGFR4与细胞基质黏附力和血管生成相关的信号级联反应有关，并且可促进细胞膜的边缘波动而增加细胞的运动能力，该信号通路的失调可抑制肿瘤细胞凋亡并刺激其增值，导致癌症的发生发展、增殖、存活及转移，提示FGF19/FGFR4轴是潜在的治疗靶点[7-8]。Zhao等[9]研究发现FGF19与FGFR4结合后具有促进乳腺癌细胞增殖和侵袭的能力，最终推动乳腺癌的发生及转移，抑制FGF19可有效减少乳腺癌细胞的生长和转移。同时有研究发现FGFR4基因多态性与Luminal型乳腺癌的临床病理特征无相关性，FGFR4中某些基因型与Her-2过表达情况一致[10-11]。Tiong等[2]发现FGF19/FGFR4可激活细胞自分泌信号并介导基底细胞样乳腺癌细胞的增殖分化并提示抑制这种激活信号通路可显著降低乳腺癌细胞的增殖分化并降低其侵袭性。而基底细胞样乳腺癌与三阴性乳腺癌两者有85%的重叠，提示FGF19与FGFR4在三阴性乳腺癌中存在高表达。而本次研究结果亦显示FGF19及FGFR4在Her-2过表达型及三阴性乳腺癌均存在高表达，且表达量均高于Luminal A与Luminal B型乳腺癌，可能与Her-2过表达型及三阴性乳腺癌较Luminal型乳腺癌生长更迅速，侵袭性更强，更易出现淋巴结及内脏转移的生物学特性有关，且与上述研究提示FGF19/FGFR4轴增强乳腺癌侵袭性的结果相符。此外，Her-2过表达型及三阴性乳腺癌有许多潜在的分子亚型，不同亚型间的预后亦不同，但大多数预后较差、侵袭性高，FGF19/FGFR4在此两种类型中高表达亦提示可作为侵袭性高乳腺癌的预后指标之一，抑制其表达有望成为侵袭性乳腺癌新的治疗途径，但其在不同分子分型乳腺癌中表达异常的机制目前尚未研究清晰，有待后续更大样本量及更近一步的研究明确。

综上所述，FGF19及FGFR4在Her-2过表达型及三阴性乳腺癌中表达高，提示与该类乳腺癌的侵袭性高、预后差相关，有望作为评价此类乳腺癌预后的指标之一，可能为后续更加细化、更加精确的分型建立良好的基础，为乳腺癌个体化精准治疗提供新的思路。