化湿润女胶囊治疗不孕症实验研究*

石敏娟 刘家邑 杨莲芳 刘军锋 袁秋贞 李博 甘雪峰 姜姗姗**

(1.陕西省中医医院，陕西 西安 710003；2.北京中医药大学中医学院，北京 100029)

化湿润女胶囊来源于临床经验方，验之临床取得了较好疗效。主要由茯苓，苍术等10味中药组成，具有健脾利湿，理气化浊的功效，主要用于脾失健运，湿浊壅塞经络、胞宫，所致的不孕。脾主运化，如脾虚不运，则痰湿内生，胞脉受阻，不能摄精成孕；另一方面脾为气血生化之源，脾虚则生化无力，冲任失养，不能养精育胎，故脾虚与不孕症密切相关。本研究拟通过观察化湿润女胶囊对大黄所致脾虚雌性小鼠生殖功能的影响，为临床使用提供实验依据。

1 试验材料与方法

1.1药品及试剂 生大黄制剂的制备：取生大黄1000 g，切片后冷水浸泡24 h，过滤，40 ℃水浴浓缩成每毫升含生药1 g[3]；血清促排卵素(FSH)试剂盒、促黄体生成素(LH)试剂盒、雌二醇(E2)试剂盒、孕酮(P)试剂盒：武汉伊莱瑞特生物科技有限公司。

1.2实验动物 动物：SPF级雌性KM小鼠，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，体重18～22 g，实验动物质量许可证号：SCXK(陕)2007-001。

1.3主要仪器 体视显微镜:XTL-220，上海光密仪器有限公司；欧姆龙电子体温计：MC-106B，欧姆龙工贸(大连)有限公司生产。

1.4方法 取SPF级雌性KM小鼠50只，体重约18～22 g，随机分为5组，每组10只，分别为空白对照组(A组)、脾虚模型组(B组)、化湿润女胶囊高(C组)、中(D组)、低(E组)剂量组。除空白组小鼠灌胃去离子水外，其余4组小鼠灌服100%生大黄水浸液30 mL·kg-1，每天1次，连续14天造成脾虚模型[1]。从第15天开始，空白对照组与脾虚模型组给予去离子水灌胃10 mL·kg-1，化湿润女胶囊高、中、低剂量组分别灌服化湿润女胶囊2.10 g·kg-1、1.05 g·kg-1、0.525 g·kg-1，每天1次，连续14天。

观测小鼠：①一般情况：观察小鼠形态、毛色、活动、大便等。②小鼠体重及肛温：末次给药前禁食12 h，给药后0.5 h，称重、测定肛温。③ELISA法检测小鼠性激素：测定完体重和肛温的小鼠，摘除眼球取血，离心后获得血清，按照试剂盒说明书完成血清促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌激素(E2)、孕酮(P)的检测。④性腺指数和排卵数：上述实验取血完毕后处死小鼠，剖取输卵管、子宫和双侧卵巢，剥离周围附着的脂肪组织，称子宫、卵巢湿重，计算脏器指数，脏器指数=脏器湿重/体重×1000。把输卵管压片，用体视显微镜观察计数每动物双侧输卵管内的卵子数目。

2 结果

2.1化湿润女胶囊对脾虚小鼠一般情况的影响 经大黄灌服后的小鼠第4天出现少食、懒动、便溏等症状，第6天出现精神倦怠、毛发枯燥、蜷缩，消瘦，第10天部分动物出现脱肛，与脾虚证临床表现基本吻合。造模及给药期间，模型组和小剂量组各有一只动物死亡。各治疗组小鼠毛色恢复光泽，活动增多，大便成形。

2.2化湿润女胶囊对小鼠体重及体温的影响 造模成功后，模型组的体重及体温均显著低于空白组(P<0.01)。化湿润女胶囊高剂量组体重(P<0.01)和体温(P<0.05)均明显回升，与模型组比较差异具有显著性。见表1。

表1 化湿润女胶囊对脾虚小鼠体重质量及体温的影响

2.3化湿润女胶囊对血清FSH、LH、E2、P的影响 与空白组比较，模型组血清FSH、P(P<0.05)，LH、E2(P<0.01)均降低，中、低剂量组LH、E2均显著低于空白组(P<0.05)，高剂量组FSH、P、LH、E2均显著高于模型组(P<0.05)，提示化湿润女胶囊对性激素的影响呈剂量依赖性。

2.4化湿润女胶囊对小鼠性腺指数及排卵功能的影响 模型组与空白组及给药组比较，卵巢显苍白，且较小，子宫肌层较薄欠红润。高剂量化湿润女胶囊可使小鼠子宫指数、卵巢指数增加，和模型对照组有显著差异(P<0.05)；高、中剂量组可使小鼠排卵数目增加，和模型组比较有极其显著差异(P<0.01)。

表2 化湿润女胶囊对小鼠血清FSH、LH、E2、P的影响

表3 对小鼠性腺指数及排卵功能的影响

3 讨论

化湿润女胶囊以使用多年的临床验方为依据，临床总有效率86.5%,妊娠率为38.4%，具有健脾利湿，理气化浊的功效，主要用于脾失健运，湿浊壅塞经络、胞宫，所致的不孕。临床症见月经后期，量少，色淡、形体肥胖、面色无华、头重身困、舌淡胖或有齿痕、脉细微等。临床不孕症大多与精神紧张，工作压力大以及起居失常、饮食不节等原因造成肾虚、肝郁或脾虚有关。以往治疗功能性不孕症多以补肾益精或疏肝理气之法，但很多时候效果不甚理想[2]。多位医家从临床经验提出脾在功能性不孕中具有重要作用[2-5]，更有学者提出“助孕先治脾”的观点[2]。脾为生痰之源，脾虚失运，水谷精微输布障碍，水湿内停，聚湿成痰，痰湿阻滞冲任，胞脉阻塞，故见月经稀发、闭经、不孕。我国古代多名医家对脾虚导致痰湿和不孕的关系进行论述，《傅青主女科·种子》中言“妇人有身体肥胖，痰涎甚多，不能受孕者。”“而肥胖之湿，时非外邪，乃脾土之内病也。”《校注妇人良方·求嗣门》中总结不孕症的常见原因为“窃谓妇人之不孕，亦有因六淫七情之邪，有伤冲任……，又有脾胃虚损，不能营养冲任”。现代研究显示同样的结果，用利血平肌注雌性大鼠进行脾虚造模，模型大鼠生殖器官萎缩；血清FSH、E2水平下降；子宫腺体数目、卵巢次级及成熟卵泡数减少，生育能力下降[6]。故本病以脾气虚弱运化不利为本，痰湿阻滞冲任胞脉为标，治法应以健脾利湿为主，兼以通化浊气，水湿痰邪得化，胞胎得养而成。化湿润女胶囊以茯苓健脾渗湿为君药，佐以苍术、法半夏加强利湿之功；以皂角刺、蜂房、连翘、白花蛇舌草这类质轻之药解毒通化一身浊气；莪术行气破血加速浊气排出，推动全身气机运行；再以川楝子入肝行气、白芥子利气，通利一身气机，诸药合用共同发挥健脾利湿，理气化浊的功效。脾气健运，精、气、血、津液化生有源，则冲任二脉有血以用，精血得养，温煦胞宫，月经便会恢复正常，方可摄精成孕。

苦寒中药复制脾虚模型的造模思路，是根据李时珍对大黄“其性苦寒，能伤元气耗阴血”及李杲“大忌苦寒之药损其脾胃”的论述为依据。常用大黄、芒硝、番泻叶、玄明粉或大承气汤等，以水浸泡或煎煮的煎剂灌胃动物造模[7]。王晓明等通过对脾虚动物模型的客观指标研究表明，进食、体重、粪便状态是评估脾虚证动物模型的基本指标[8]。本研究采用生大黄水浸液灌胃造模，模型动物出现少食、体重下降、毛发枯槁、便溏等脾虚症状，部分动物出现脱肛，说明造模成功。

脾主运化，如脾的运化功能健全，则脏腑、经络、四肢百骸以及筋肉皮毛等组织能得到充足的营养而发挥正常的生理活动。若脾失健运，必然影响食物的消化和水谷精微的吸收而出现腹胀、便溏、食欲不振、倦怠、消瘦等病变。大黄苦寒，以其灌胃复制的脾虚模型以脾气(阳)虚为主[9-10]，脾阳虚衰，温煦功能减退，机体基础代谢率下降，水液的输布及气化出现障碍，出现大便清稀、体温偏低等寒症表现。脾虚小鼠经化湿润女胶囊治疗后，便溏等症状明显改善，从第4天开始各给药组体重明显回升，明显高于模型小鼠，接近正常小鼠。而模型组小鼠经过自然恢复，其体重仍旧显著低于空白组小鼠，提示化湿润女胶囊能改善脾虚症状，促进脾虚小鼠体重和体温的恢复。

下丘脑-垂体-卵巢轴(HPAA)对维持女性正常生殖功能具有重要作用。脾为后天之本，化生气血以充养脏腑，有研究显示脾虚能引起性激素水平的异常变化[11]，李聪等[12]研究柴疏四君汤对肝郁、脾虚和肝郁脾虚模型大鼠性腺轴的影响，发现脾虚模型存在下丘脑-垂体-卵巢轴功能异常。FSH是垂体分泌的一种刺激卵泡成熟的激素，具有促进生殖细胞分化和性腺发育的功能，能促进卵泡发育成熟，干预主卵泡的募集、选择、成熟和排卵的过程[13]。LH也是诱发排卵的重要激素之一，其通过和FSH协同刺激卵泡的生长发育与成熟，影响内膜细胞E2的合成和分泌，参与排卵过程和黄体的生成过程，合适的 E2是卵母细胞成熟和受精卵着床的重要调节因素，E2的低值可能导致了不孕症的发生[14]。国内外均有学者通过子宫增重实验评价药物的雌激素活性[15-19]，化湿润女胶囊能增加脾虚小鼠子宫重量，提高脾虚小鼠的子宫指数、卵巢指数，提示化湿润女胶囊具有类雌激素活性。雌激素主要刺激性生殖系统的发育，促进子宫内膜各种成分增殖生长，为胚胎着床提供良好环境。P能使增殖的子宫内膜及时转化为分泌型子宫内膜，促进蜕膜形成和发育，使子宫内膜由非黏附状态进入黏附状态，有利于胚胎着床。这些性激素作用于靶器官，靶器官在性激素的调控下产生周期性变化，调节卵泡的生长、发育、成熟以及排卵，提高子宫内膜容受性，促进胚胎着床，提高受孕率[21-22]。因此测定血清生殖激素E2、FSH、LH、P含量能直接反应卵巢储备功能，是反应下丘脑一垂体一卵巢功能轴的重要指标。化湿润女胶囊能提高血清E2、P、FSH、LH水平(P<0.05)，提示化湿润女胶囊能增强垂体的内分泌功能，促进输卵管卵泡发育，提高子宫内膜容受性，促进胚胎着床。

综上所述，本实验从性腺指数、排卵功能、性激素水平等方面，观察了化湿润女胶囊对脾虚小鼠生殖功能的影响，结果表明化湿润女胶囊能明显改善脾虚症状，促进子宫和卵巢发育，促进排卵，促进促性腺激素的合成与释放，提高子宫内膜对受孕卵的容受性，利于胚胎着床。但其对雌激素及孕激素受体及蛋白表达的影响及机制需要进一步阐明，为临床使用提供依据。